EC SABAW: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang sabaw ng EC o sabaw na Escherichia coli ay isang pumipili na daluyan ng kultura ng likido. Ang daluyan na ito ay inirerekomenda ng Mga Pamantayang Pamantayan para sa pagbibilang ng kabuuang at fecal coliforms, sa pamamagitan ng pinaka-malamang na pamamaraan ng numero (MPN) sa mga sample ng tubig at pagkain, kung saan ang pangunahing ahente na kasangkot ay Escherichia coli.

Ang sabaw ng EC ay binubuo ng triptein, lactose, bile salts, dipot potassium phosphate, monopot potassium phosphate, sodium chloride, at tubig. Ang pormula nito ay estratehikong idinisenyo upang mapabor ang paglaki ng kabuuan at fecal coliforms at maiwasan ang pagbuo ng iba pang mga kasamang microorganism.

Ang makasagisag na representasyon ng paghahanda ng sabaw ng EC. Pinagmulan: Pixabay.com

Ang Escherichia coli bacterium ay ang pangunahing fecal coliform na naroroon bilang isang kontaminado sa mga mapagkukunan ng tubig at pagkain, na ang sanhi ng mga mahahalagang sakit sa gastrointestinal.

Dapat pansinin na maraming mga serotyp ng Escherchia coli; Kabilang sa mga ito maaari nating banggitin ang enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) at enteroaggregative (EAEC).

Ang daluyan na ito ay may kakayahang payagan ang pag-unlad ng lahat ng mga ito, ngunit nang hindi magagawang pag-iba-ibahin ang mga ito mula sa bawat isa. Nangangailangan ito ng karagdagang pagsubok.

Ang microbiological na pag-aaral ng tubig at pagkain sa pamamagitan ng pinaka-malamang na numero (MPN) upang maghanap para sa kabuuan at fecal coliforms ay isang protocol na binubuo ng maraming mga phase; presumptive phase, phase ng pagpapatunay at yugto ng pagkumpleto. Ang sabaw ng EC ay ginagamit sa phase ng pagkumpirma.

Batayan

EC sabaw

Ang daluyan ng EC ay batay sa pagbibigay ng mga elemento ng nutrisyon na kinakailangan para sa pinakamainam na pag-unlad ng kabuuan at fecal coliforms, kung saan kasama ang bakterya ng Escherichia coli.

Ang mga elementong nutritional na ito ay ibinibigay ng triptein, pagiging isang mahusay na mapagkukunan ng peptides at amino acid. Bilang karagdagan, naglalaman din ito ng lactose, isang fermentable na karbohidrat na nagbibigay ng enerhiya at nagbibigay-daan upang ipakita kung ang mga bakterya ay gumagawa ng gas.

Sa kabilang banda, ang daluyan ay naglalaman ng mga bile salts na nagbibigay ng pumipili na character, dahil pinipigilan nito ang paglaki ng mga Gram na positibong microorganism na maaaring naroroon sa sample.

Gayundin, ang dipot potassium phosphate at monopot potassium phosphate ay kumikilos bilang isang sistema ng pagbabalanse ng pH. Ang sistemang ito ay kinakailangan, dahil ang lactose na nilalaman ng sabaw ay may posibilidad na ma-acidify ang daluyan kapag ito ay na-ferment ng mga microorganism, ngunit ito ay binabayaran ng mga phosphate salts.

Samakatuwid, ang mga elementong ito ay mahalaga, dahil ang hindi makontrol na kaasiman ay maaaring makaapekto sa wastong pag-unlad ng mga microorganism na hinahangad.

Para sa bahagi nito, ang sodium klorido ay nagpapatatag ng daluyan ng osmotically, habang ang tubig ay ang solvent para sa mga solute na naroroon at nagbibigay ng tuluy-tuloy na pagkakapare-pareho sa medium.

Novobiocin Binagong EC Broth

Si Okrend at Rose ay lumikha ng iba't ibang sabaw ng EC, na tinatawag na novobiocin na binago ng EC sabaw. Ang pagbabago ay binubuo ng pagbabawas ng konsentrasyon ng mga asin ng apdo at pagdaragdag ng 20 mg / dl ng novobiocin.

Ang modipikasyong ito ay pinapaboran ang pagbawi ng enterohemorrhagic Escherichia coli strains (O157: H7).

Ang bacterial serotype na ito ay nagdudulot ng matinding hemorrhagic colitis na maaaring humantong sa hemolytic uremic syndrome (HUS); na kung saan ay maaaring makabuo ng talamak na kabiguan sa bato, na may isang mataas na rate ng namamatay na maaaring umabot ng hanggang sa 50% sa mga matatanda.

Dahil sa taunang morbidity at mortality na sanhi ng bacterium na ito dahil sa pagkonsumo ng kontaminadong pagkain, inirerekomenda ng Kagawaran ng Agrikultura ng Estados Unidos (USDA) ang paggamit ng daluyan na ito.

Paghahanda

EC sabaw

Timbang 37.4 g ng dehydrated medium at matunaw sa 1 litro ng distilled water. Ang halo ay dapat pahintulutan na tumayo ng 5 minuto. Kasunod nito, sa isang mapagkukunan ng init, tapos na itong matunaw sa pamamagitan ng madalas na pagpapakilos.

Kapag natunaw, ipinamamahagi ito sa mga preconditioned test tubes na may isang Durham tube sa loob. Sterilize sa autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.

Ang pH ng daluyan ay dapat na 6.9 ± 0.2. Ang kulay ng dehydrated medium ay beige at ang handa na daluyan ay light amber.

Ang mga sabaw ay itinatago sa refrigerator hanggang sa gamitin. Sa oras ng paggamit, ang mga sabaw ay dapat na nasa temperatura ng kuwarto.

Sa kabilang banda, ang sabaw ng EC ay maaari ding ihanda sa dobleng konsentrasyon.

Novobiocin Binagong EC Broth

Tumimbang ng 36.7 g ng dehydrated medium at matunaw sa 1 litro ng tubig. Ang natitirang bahagi ng paghahanda ay pareho tulad ng inilarawan sa itaas.

Gumamit

Kabuuan at pagsusuri ng fecal coliform

Ang sabaw ng EC ay mainam para sa pagpapatunay na yugto ng pag-aaral ng mga coliform sa pamamagitan ng pamamaraan ng NMP, kapwa sa mga sample ng tubig, pati na rin sa mga produktong parmasyutiko at pagkain.

Mapang-api, paggawa ng mga sabaw ng lactose na nakuha sa presumptive phase ay dapat na maipagpatuloy sa 2% apdo maliwanag na berdeng sabaw at sabaw ng EC.

Para sa kabuuang coliforms, ang mga sabaw ng EC ay binubulgar nang aerobically para sa 24 hanggang 48 na oras sa 37 ° C, at para sa fecal coliforms sila ay natubuang aerobically para sa 24 hanggang 48 na oras sa 44 ° C.

Sa parehong mga kaso ito ay binibigyang kahulugan bilang mga sumusunod: ang mga turbid na tubo na may produksyon ng gas ay itinuturing na positibo. Kung walang produksyon ng gas sa 24 na oras, ang pagpapapisa ng itlog ay patuloy hanggang sa 48 na oras.

Ang mga positibong sabaw ng EC ay pumunta sa buong yugto ng pagkumpirma, na binubuo ng pagpapatuloy sa pumipili na media tulad ng Mac Conkey agar, EMB agar o Endo agar.

Kung ang sabaw na ginamit ay novobiocin-mabago EC, ang mga positibong tubes ay inirerekomenda na maipagpatuloy sa Mac Conkey agar na may sorbitol.

QA

Ang bawat pangkat ng handa na daluyan ay dapat na kontrolado ng kalidad. Una, ang pagsukat ng daluyan ay dapat na masuri. Sa kahulugan na ito, ang isa o dalawang sabaw ay napapawi nang walang inoculation sa aerobiosis sa loob ng 24 na oras sa 37 ° C. Ang inaasahang resulta ay isang transparent na sabaw, nang walang kaguluhan o pagbabago ng kulay.

Pangalawa, ang paglago ng kilalang mga galaw ay dapat na masuri, para sa mga sumusunod na bakterya ay maaaring magamit: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Sa lahat ng mga kaso ay inaasahan ang kasiya-siyang pag-unlad ng microbial, na obserbahan ang isang maulap na sabaw na may produksyon ng gas para sa E. coli at walang gas para sa Salmonella.

Ang iba pang mga pilay na maaaring maisama sa control ay: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ang mga pag-iwas na ito ay dapat na lubos na mapigilan.

mga rekomendasyon

-Ang paglalagay ng mga tubo ng Durham ay mahalaga para sa pag-aaral ng mga coliform.

-Nagtaguyod ng daluyan sa mga tubo ng pagsubok bago isterilisado, hindi kailanman pagkatapos.

-Hindi gumamit kung ang daluyan ay higit sa 3 buwan.

-Huwag gamitin kung ang anumang pagbabago sa karaniwang mga katangian ng daluyan ay sinusunod.

Mga Sanggunian

1. Britannia Laboratories. Medium. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
2. Enterohemorrhagic E. coli. Ang Center para sa seguridad ng pagkain at kalusugan ng publiko. 2010.Magagamit sa: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Daluyan ng EC. Magagamit sa: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Binago ng Novobiocin ang medium ng EC. Magagamit sa: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Detection, paghihiwalay at pagkilala sa Escherichia coli na gumagawa ng Shiga toxin mula sa mga sariwang karne sa lupa mula sa mga butcher sa Concepción, lalawigan mula sa Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Magagamit sa: www.scielo.org.