TRYPTICASEIN TOYO SABAW: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang toyo na sabaw tryponsyo ay isang daluyan ng kultura ng likido, lubos na masustansya, hindi madaling magamit. Dahil sa mahusay na kakayahang umangkop, ito ay isa sa pinaka malawak na ginagamit na media ng kultura ng likido sa laboratoryo ng microbiology.

Kilala rin ito sa pangalan ng tryptic soy na sabaw o hinukay na casein-soy, na ang pagdadaglat ay TSB para sa acronym nito sa English Tryptic Soy Broth o CST para sa acronym nito sa Espanyol. Ang mga gamit nito ay iba-iba dahil sa komposisyon nito. Binubuo ito ng triptein, soy peptone, sodium chloride, dipot potassium phosphate, at glucose.

Ang Trypticasein toyo na sabaw na binhing may isang pilay ng Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 kung saan sinusunod ang produksiyon ng pigment. Pinagmulan: Larawan na kinunan ng may-akda na si MSc. Marielsa Gil.

Ito ay may kakayahang magparami ng mga mahahalagang bakterya ng klinika, kasama na ang mga hinihingi sa nutritional at anaerobic bacteria. Ang ilang mga oportunidad at kontaminadong fungi ay maaari ring umunlad sa kapaligiran na ito.

Dahil sa mataas na kapangyarihang nutritional, mayroon itong mataas na sensitivity upang makita ang kontaminasyon ng microbial, dahil sa kadahilanang ito ay napili ng USDA Animal and Plant Health Inspection Service para sa pagsusuri ng microbiological ng mga bakuna.

Gayundin, ang sabaw ng trypticasein toyo ay nakakatugon sa mga kinakailangan ng iba't ibang parmasyutiko (European EP, Japanese JP at North American USP) para sa pag-aaral ng microbiological ng mga produkto sa antas ng pang-industriya, tulad ng mga pampaganda at pagkain.

Sa kabilang banda, marapat na banggitin na sa kabila ng mahusay na utility nito, ang daluyan na ito ay medyo mura, na ginagawang abot-kayang para sa karamihan sa mga laboratoryo ng microbiology. Napakadaling ihanda.

Batayan

Ang Triptein, peptone at glucose ay nagbibigay ng mga mahahalagang katangian ng nutrisyon upang gawin itong isang mainam na daluyan para sa mabilis na paglaki ng microbial.

Sa humigit-kumulang na 6 hanggang 8 na oras ng pagpapapisa ng itlog, ang paglago ay makikita na sa karamihan sa mga microorganism. Gayunpaman, may mga mabagal na lumalagong mga galaw na maaaring tumagal ng mga araw upang lumago.

Ang sodium chloride at dipot potassium phosphate ay kumikilos bilang osmotic balanse at pH regulator ayon sa pagkakabanggit. Ang pagkakaroon ng paglaki ay napatunayan sa pamamagitan ng paglitaw ng kaguluhan sa daluyan; kung walang pag-unlad ang daluyan ay nananatiling translucent.

Dahil sa magaan na kulay posible na obserbahan ang paggawa ng mga pigment, tulad ng ipinakita sa imahe na matatagpuan sa simula ng artikulo, na tumutugma sa pigment na ginawa ni Pseudomonas aeruginosa.

Paghahanda

-Triptysein toyo sabaw

Upang maghanda ng tryptic soy sabaw, 30 g ng dehydrated komersyal na daluyan ay dapat timbangin sa isang digital scale. Pagkatapos ito ay natunaw sa isang litro ng distilled water na nasa isang prasko.

Ang timpla ay naiwan upang magpahinga ng 5 minuto at pagkatapos ay dadalhin sa isang mapagkukunan ng init upang matunaw ang medium. Dapat itong pinukaw nang madalas habang kumukulo ng 1 minuto.

Kapag natunaw, ipinamamahagi ito sa mga tubo ng naaangkop na sukat kung kinakailangan. Ang mga tubo na may cotton plugs o gamit ang Bakelite caps ay maaaring magamit. Kasunod nito, ang mga tubo ay isterilisado sa medium sa autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.

Ang pH ng daluyan ay dapat manatili sa 7.3 ± 0.2

Dapat pansinin na ang kulay ng dehydrated medium medium ay light beige at dapat na nakaimbak sa pagitan ng 10 hanggang 35 ° C, sa isang tuyo na lugar. Habang ang handa na sabaw ay light amber na may kulay at dapat na nakaimbak sa isang ref (2 hanggang 8 ° C).

-Variant ng sabaw ng trypticasein

Ang binagong trypticasein na toyo ay maaaring ihanda sa pamamagitan ng pagdaragdag ng mga apdo salts at novobiocin upang mapili ito para sa paghihiwalay ng E. coli. Ang isa pang pagpipilian para sa parehong layunin ay upang maghanda ng trypticase toyo na sabaw na pinunan ng vancomycin, cefixime at tellurite (2.5 µg / ml).

Sa kabilang banda, mas maraming glucose (0.25%) ang maaaring idagdag sa tryptic soy sabaw kapag ang layunin ay pasiglahin ang pagbuo ng mga biofilms.

Gumamit

Ito ay sapat na nakapagpapalusog upang pahintulutan ang paglaki ng mabilis at mabilis na bakterya tulad ng Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp at Brucella sp, nang hindi nangangailangan ng pagdaragdag ng dugo o suwero.

Gayundin, ang ilang mga fungi ay maaaring umunlad sa sabaw na ito, tulad ng Candida albicans Complex, Aspergillus sp at Histoplasma capsulatum.

Bukod dito, ang daluyan na ito sa ilalim ng anaerobic na kondisyon ay mainam para sa pagbawi ng bakterya na kabilang sa genus Clostridium, pati na rin ang non-sporulated anaerobic bacteria na may kahalagahan sa klinikal.

Kung ang 6.5% sodium chloride ay idinagdag, maaari itong magamit para sa paglaki ng Enterococcus at iba pang Group D Streptococcus.

Sa antas ng pananaliksik, naging kapaki-pakinabang ito sa iba't ibang mga protocol, lalo na sa pag-aaral ng biofilm o biofilm-bacteria bacteria. Ginagamit din ito upang maghanda ng 0.5% na suspensyon ng bakterya ng Mac Farland na kinakailangan upang maisagawa ang antibiogram ng paraan ng Kirby at Bauer.

Sa kasong ito, ang 3 hanggang 5 na mga kolonya ng magkaparehong hitsura ay kinuha at emulsified sa 4-5 ml ng trypticasein soy sabaw. Pagkatapos ito ay natutuyo para sa 2 hanggang 6 na oras sa 35-37 ° C at pagkatapos ay nababagay sa nais na konsentrasyon gamit ang sterile saline. Ang mga sabaw ng trypticasein na toyo ay hindi dapat gamitin mula 18 hanggang 24 na oras ng pagpapapisa ng itlog.

Sown

Ang sample ay maaaring maihasik nang direkta o dalisay na mga kolonya na kinuha mula sa pumipili media ay maaaring maging subcultured. Ang inoculum ay dapat na maliit upang hindi mai-cloud ang medium bago ang pagkaputok.

Karaniwan ito ay natutuyo sa 37 ° C sa aerobiosis sa loob ng 24 na oras, ngunit ang mga kundisyong ito ay maaaring mag-iba depende sa microorganism na hinahangad. Maaari rin itong ma-incubated sa ilalim ng anaerobic na kondisyon sa 37 ° C para sa ilang araw kung kinakailangan. Halimbawa, ang mabilis na paglaki o mabilis na mga microorganism ay maaaring mapaprubahan ng hanggang sa 7 araw.

Sa pagsusuri ng microbiological ng mga sangkap ng parmasyutiko - tulad ng mga bakuna - mas mahihigpit ang mga protocol. Sa mga kasong ito, ang sabaw nang walang paglaki ay hindi itinatapon hanggang sa umabot sa 14 na araw ng patuloy na pagpapapisa ng itlog.

QA

Mula sa bawat batch na inihanda, ang 1 o 2 na mga uninoculated na tubes ay dapat na maipakita upang maipakita ang kanilang tibay. Dapat itong manatiling hindi nagbabago.

Ang mga kilalang pilay ay maaari ding itanim upang masuri ang kanilang pag-uugali. Kabilang sa mga pilay na maaaring magamit ay:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 o 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CComonas.

Sa lahat ng mga kaso, ang paglago ay dapat maging kasiya-siya sa ilalim ng naaangkop na kondisyon ng kapaligiran at temperatura para sa bawat microorganism.

Mga Limitasyon

-Ang pagbuburo ng glucose ay nagdudulot ng pagbaba sa pH ng daluyan dahil sa paggawa ng mga acid. Ito ay maaaring hindi kanais-nais para sa kaligtasan ng buhay ng ilang mga microorganism na sensitibo sa kaasiman.

-Hindi inirerekumenda para sa pagpapanatili ng mga strain, dahil bilang karagdagan sa kaasiman, ang bakterya ay humihiwalay ng mga sustansya pagkatapos ng ilang araw kasama ang mga resulta ng akumulasyon ng mga nakakalason na sangkap na hindi nakakaapekto sa kapaligiran.

Dapat kang gumana sa pag-aalaga ng lahat ng mga protocol ng sterility, dahil ang mga sabaw ay madaling nahawahan.

-Pagkatapos ng paghahanda ng mga sabaw ng trypticasein, hindi mo dapat subukang ilipat ang sabaw sa isa pang sterile tube, dahil ang ganitong uri ng pagmamaniobra ay napaka-mahina sa kontaminasyon.

Mga Sanggunian

1. Cona E. Mga Kondisyon para sa isang mahusay na pag-aaral sa pagkamaramdamin sa pamamagitan ng agar diffusion test. Rev. bata. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Magagamit sa: scielo.org
2. Laboratoryo ng Britannia. Ang sabaw ng Triptein. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
3. MCD Laboratory. Trypticasein Soy Broth. Magagamit sa: electronic-systems.com
4. Laboratory ng Neogen. Ang Triptych Soy Broth. Magagamit sa: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Pagsusuri ng magnetic immunoseparation technique para sa pagbawi ng Escherichia coli O157: H7 sa mga milk cream. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Magagamit sa: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilm pagbuo sa Staphylococcus aureus na nagbubukod alinsunod sa antimicrobial pagkamaramdamin at klinikal na pinagmulan. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Magagamit sa: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. paghihiwalay ng Escherichia coli O157: H7 sa Double na Layunin ng Bovine Faeces Samples mula sa munisipalidad ng Miranda, Zulia State, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Magagamit sa: scielo.org