TETRATHIONATE SABAW: MAKATUWIRAN, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang sabaw ng tetrathionate o sabaw na TT ay isang pumipili na daluyan ng kultura ng likido para sa pagpapayaman at pagbawi ng genus Salmonella strains. Ito ay nilikha ng Müeller at kalaunan ay binago ni Kauffmann, kung kaya't mayroong mga tumatawag sa ito na sabaw ng Müeller-Kauffmann.

Ang orihinal na daluyan na naglalaman ng mga peptones ng proteose, calcium carbonate, at sodium thiosulfate. Nagdagdag si Kauffmann ng mga asing-gamot na bile at gumawa ng isa pang modality na may maliwanag na berde. Ang mga sangkap na ito ay pumipigil sa paglaki ng mga coliforms, nag-iiwan ng daluyan na libre para sa pagbuo ng mga pathogen bacteria, sa kasong ito Salmonella.

Pagdaragdag ng iodine iodine solution sa tetrathionate sabaw. Pinagmulan: Manuel Almagro Rivas

Ang pagbabagong ito ay matagumpay dahil ito ay makabuluhang nadagdagan ang pagiging sensitibo ng daluyan. Para sa kadahilanang ito, kasalukuyang kapaki-pakinabang para sa paghahanap para sa Salmonellas sa anumang uri ng sample, ngunit lalo na para sa solid o likido na dumi ng tao at pagkain.

Ang paghahanda nito ay binubuo ng dalawang phase; Ang komersyal na daluyan ay isang batayan upang ihanda ang sabaw ng tetrathionate, at kasunod, upang mabuo ang tetrathionate, isang idinagdag na yodo na yodo ay idinagdag upang makumpleto ang daluyan.

Inirerekomenda ng American Public Health Association (APHA) ang paggamit ng Tetrathionate Broth na pupunan ng maliwanag na berde para sa pagpapayaman ng mga halimbawa para sa Salmonella, dahil mas pinipili kaysa sa Tetrathionate Broth at Selenite Broth.

Sa pangkalahatan, ang sabaw ng tetrathionate ay mainam kapag ang pagkakaroon ng bakterya ng genus na si Salmonella ay pinaghihinalaang sa maliit na dami o kapag inaabuso sila sa pamamagitan ng pagkakalantad sa mga sangkap na nakakahawa o sa pamamagitan ng mga pang-industriya na proseso na mabawasan ang kanilang kakayahang umangkop.

Batayan

Ang mga peptones na naroroon ay tumutugma sa pancreatic digest ng casein at peptic digest ng tissue ng hayop. Nagbibigay ang mga ito ng mapagkukunan ng carbon, nitrogen, at pangkalahatang nutrisyon para sa paglaki ng bakterya.

Para sa bahagi nito, ang sodium thiosulfate ay tumugon sa iodinated solution upang mabuo ang tetrathionate. Pinipigilan nito ang paglaki ng mga coliform at pinapaboran ang pag-unlad ng bakterya na naglalaman ng enzyme tetrathionate reductase, kabilang sa mga ito ang genus Salmonella, ngunit din ang Proteus.

Ang mga asing-gamot ng bile ay kumikilos din bilang isang inhibitory na sangkap para sa karamihan sa positibong Gram at ilang mga negatibong bakterya ng Gram (coliforms).

Ang calcium calciumate ay sumisipsip ng mga nakakalason na sangkap na nabuo ng agnas ng tetrathionate, na bumubuo ng sulpuriko. Sa ganitong kahulugan, ang calcium carbonate ay neutralisahin ang kaasiman, pinapanatili ang pH ng medium na matatag.

Sa kaso ng maliwanag na berdeng modality, ang sangkap na ito ay nagdaragdag ng pumipili ng lakas ng sabaw ng tetrathionate sa pamamagitan ng pagsugpo sa mga microorganism maliban sa genus Salmonella.

Paghahanda

-Tetrathionate sabaw

Ang solusyon sa yodo

Timbangin:

• 6 gramo ng yodo.
• 5 g ng potassium iodide.

Ang potassium iodide ay natunaw sa humigit-kumulang 5 ml ng sterile distilled water, pagkatapos ay ang iodine ay idinagdag nang kaunti habang ang pinaghalong ay pinainit. Matapos itong ganap na matunaw, gumawa ng hanggang sa marka na may sterile distilled water hanggang maabot ang isang pangwakas na dami ng 20 ml.

Base medium para sa tetrathionate sabaw

Tumimbang ng 46 gramo ng dehydrated medium at suspindihin sa 1 litro ng sterile distilled water. Paghaluin at init hanggang sa ganap na matunaw, maaari itong dalhin sa isang pigsa lamang ng ilang minuto. Huwag mag-autoclave. Ang base ng daluyan ay pinapayagan na palamig sa humigit-kumulang na 45 ° C at sa oras na iyon 20 ml ng iodinated solution ay idinagdag.

Matapos idagdag ang yodo na solusyon sa medium dapat itong magamit agad. Kung hindi mo nais na gamitin ang buong halo, magpatuloy bilang mga sumusunod:

Ang 10 ml ng base medium ay ipinamamahagi sa mga tubes, at sa mga dapat na inoculated na may mga sample ay idinagdag 0.2 ml ng yodo na solusyon.

Ang mga hindi gagamitin ay maaari pa ring maiimbak sa ref, gayunpaman dahil ang daluyan ay hindi isterilisado, ang perpekto ay ihanda ang eksaktong dami na kinakailangan.

Ang kulay ng daluyan bago idagdag ang yodo na solusyon sa yodo ay may gatas na puti na may isang puting pag-ayos at pagkatapos ng karagdagan ito ay kayumanggi na may isang siksik na pag-agos. Ang sinusunod na pag-uunlad ay normal at tumutugma sa calcium carbonate na hindi matunaw. Ang panghuling pH ng daluyan ay 8.4 ± 0.2.

-Tetrathionate na variant ng sabaw na may maliwanag na berde

Upang ihanda ang maliwanag na berdeng tetrathionate na sabaw, ang lahat ng mga hakbang na inilarawan sa itaas ay isinasagawa, ngunit bilang karagdagan, 10 ml ng maliwanag na berdeng solusyon na inihanda sa 0.1% ay idadagdag sa halo.

Nagniningning berde

Ang solusyon na ito ay inihanda tulad ng sumusunod:

Timbang 0.1 g ng maliwanag na berde at suspindihin sa 100 ml ng distilled water. Init sa kumukulo upang makamit ang kabuuang pagkawasak. Mag-imbak sa bote ng amber.

Gumamit

Para sa mga sample ng stool (kultura ng stool) ang protocol ay ang mga sumusunod:

Inoculate 1 g ng solidong dumi ng tao o 1 ml ng likidong dumi ng tao sa isang tubo na may 10 ml na handa na gamitin na tetrathionate sabaw. Nanginginig nang masigla at mag-incubate ng aerobically sa 43 ° C sa loob ng 6-24 na oras.

Kasunod nito, kumuha ng isang 10 hanggang 20 alil aliquot ng sabaw at subkultur sa isang napiling daluyan para sa Salmonella, tulad ng SS agar, XLD agar, maliwanag na berdeng agar, Hektoen enteric agar, bukod sa iba pa.

Kaayon, pumipili ng media para sa Salmonella ay dapat na inoculated sa direktang sample (feces) nang walang pagyaman. Para sa mga specimens ng rectal swab, ilabas ang nakolekta na materyal sa tubo at magpatuloy tulad ng inilarawan sa itaas.

Para sa mga sample ng pagkain, timbangin ang 10 g ng solidong pagkain o 10 ml ng likidong pagkain at mag-inoculate ng isang bote na may 100 ML ng handa na magagamit na sabaw na tetrathionate. Magpatuloy sa parehong paraan tulad ng inilarawan sa itaas ngunit pagkubkob sa 37 ° C.

Tulad ng makikita, ang ugnayan sa pagitan ng sample at sabaw ay palaging magiging 1:10.

QA

Ang mga kilalang control control ay maaaring magamit upang masubukan ang medium medium. Ang pinaka-malawak na ginagamit ay ATCC na sertipikadong mga galaw.

Ang mga pilay na gagamitin ay Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 at Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Inaasahan ang mahusay na paglago para sa mga salmon ng Salmonella, habang ang Escherichia coli ay maaaring mahina o regular na paglaki, at ang Gram positibong pag-iilog (Enterococcus at Staphylococcus) ay bahagyang o lubos na inalis.

mga rekomendasyon

-Ang medium na ito ay hindi pumipigil sa paglaki ng Proteus, ang ilang mga laboratoryo ay gumagamit ng 40 mg / L ng novobiocin upang maiwasan ang pagbuo ng mikrobyo na ito. Ang antibiotic ay dapat idagdag bago ang solusyon sa yodo.

-Pagkatapos ng paghahanda ng daluyan kasama na ang solusyon ng yodo ng yodo, hindi ito dapat tumagal ng higit sa 2 oras upang mai-inoculated.

-Kapag namamahagi ng daluyan sa mga tubes, ang timpla ay dapat na patuloy na homogenized upang resuspend ang nabuo.

-Sa mas kaunting kontaminadong mga sample ang sabaw ng tetrathionate ay natupok sa 35-37 ° C, at sa lubos na kontaminadong mga sample ng pagpapapisa ng itlog sa 43 ° C ay inirerekomenda.

Mga Sanggunian

1. Laboratory ng Conda Pronadisa. 2010. Ang base ng sabaw ng Tetrathionate ayon kay Müeller-Kauffmann. Magagamit sa:
2. Mga Laboratoryo ng BD. 2003. Tetrathionate Broth Base. Magagamit sa:
3. Britannia Laboratories. 2015. Tetranate na sabaw ng base. Magagamit sa:
4. BBL Media. 2005. Inihanda sa mga tubo para sa kultura ng mga species ng Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Paghahambing sa pagitan ng media ng kultura ng sodium selenite at sodium tetrathionate, na parehong natubuan sa 37 ° C at 42 ° C para sa ang paghihiwalay ng Salmonella spp mula sa mga feces ng mga tagadala. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220