THIOGLYCOLLATE SABAW: MAKATUWIRAN, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang sabaw ng thioglycollate ay isang medium na nagpayaman ng tuluy-tuloy na likido. Kilala ito sa pamamagitan ng acronym FTM para sa acronym nito sa English Fluid Thioglycollate Medium. Ito ay nilikha ng Brewer at binago noong 1944 ni Vera, na nagdagdag ng casein peptone dito.

Ang daluyan na ito ay may isang potensyal na mababang potensyal na oksihenasyon, samakatuwid hindi inirerekomenda para sa pagbuo ng mahigpit na aerobic bacteria, ngunit perpekto ito para sa pagbawi ng facultative aerobic, mahigpit na anaerobic at undemanding microaerophilic bacteria.

Thioglycollate sabaw nang walang tagapagpahiwatig. Nagpapakita ng paglabas ng vaginal. Pinagmulan: Bobjgalindo

Ang mataas na pagganap na sinusunod sa daluyan na ito sa paghihiwalay at paggaling ng isang iba't ibang mga microorganism, ay ginawa itong tinanggap ng United States Pharmacopeia (USP), sa pamamagitan ng Opisyal na Association of Agricultural Chemists (AOAC) at ng European Pharmacopoeia ( EP).

Inirerekomenda ito ng mga samahang ito para sa pagsubok ng kontrol ng sterility ng mga produktong parmasyutiko at para sa pagpapayaman ng iba't ibang uri ng mga sample.

Ang cado thioglycolate ay binubuo ng extract ng lebadura, pancreatic digest ng casein, anhydrous dextrose, L-cystine, sodium chloride, sodium thioglycollate, resazurin at agar sa maliit na dami.

Mayroong ilang mga bersyon ng daluyan na ito, kabilang sa mga ito ay: thioglycollate na sabaw na may tagapagpahiwatig, thioglycollate na sabaw na walang tagapagpahiwatig, thioglycollate na sabaw na may tagapagpahiwatig na yaman ng hemin at bitamina K _1, at thioglycollate na sabaw na may calcium carbonate.

Kapansin-pansin, ang variant ng thioglycollate na sabaw na pinayaman ng hemin at bitamina K ay nagsisilbi upang mapahusay ang paglaki ng mabilis na anaerobes, at ang variant ng thioglycollate na naglalaman ng calcium carbonate ay kapaki-pakinabang upang kontrahin ang mga acid na ginawa sa panahon ng paglaki ng microbial.

Batayan

Ang Thioglycollate sabaw ay itinuturing na isang hindi pumipili na daluyan ng pagpapayaman dahil pinapayagan nito ang paglaki ng karamihan sa mga di-masidhing bakterya. Ang mga kinakailangan sa nutrisyon ay ibinibigay ng katas ng lebadura, ang pancreatic digest at glucose.

Sa kabilang banda, ang daluyan na ito, sa kabila ng pagiging isang sabaw, naglalaman ng isang maliit na halaga ng agar; Nangangahulugan ito na mayroon itong isang mababang potensyal na pagbabawas ng oksihenasyon, dahil sa katotohanan na pinapabagal nito ang pagpasok ng oxygen, sa paraang bumababa ang oxygen habang lumalalim ito sa tubo.

Iyon ang dahilan kung bakit ang daluyan na ito ay mainam para sa pagpapaunlad ng aerobic ng facultative, microaerophilic at mahigpit na anaerobic bacteria, ang huli 2 nang walang pangangailangan na mapalubha sa ilalim ng mga kondisyong ito. Ang parehong daluyan ay kinokontrol ang dami ng oxygen sa loob ng daluyan, na wala sa ilalim ng tubo at sa sapat na dami sa ibabaw.

Gayundin, ang thioglycollate at L-cystine ay kumikilos bilang pagbabawas ng mga ahente, na tumutulong upang maiwasan ang akumulasyon ng mga nakakapinsalang sangkap para sa pag-unlad ng bakterya, tulad ng peroxide. Bilang karagdagan, ang mga compound na ito ay naglalaman ng mga grupo ng sulfhydryl (-SH-), pag-neutralize sa mga inhibitory effects ng mga mercury derivatives, arsenical, bukod sa iba pang mabibigat na metal.

Para sa bahagi nito, ang resazurin ay isang tagapagpahiwatig ng pagbawas sa oxide. Ang sangkap na ito ay walang kulay kapag nabawasan at kulay rosas kapag na-oxidized. Mayroong mga tagapagpahiwatig at non-indicator thioglycollate na mga variant ng sabaw. Ang paggamit nito ay depende sa uri ng sample at kagustuhan ng laboratoryo.

Samantala, pinapanatili ng sodium chloride ang balanse ng osmotic ng thioglycollate na sabaw at ang paggamit ng glucose sa anhydrous form na pinipigilan ang labis na kahalumigmigan sa dehydrated medium.

Paghahanda

Thioglycollate Broth kasama ang tagapagpahiwatig

Tumimbang ng 29.75 g ng dehydrated medium at matunaw sa 1 litro ng distilled water. Pinapayagan ang timpla na tumayo ng halos 5 minuto. Dalhin sa isang mapagkukunan ng init at madalas na pukawin hanggang sa ganap na matunaw.

Ibuhos ang daluyan sa mga tubo ng pagsubok at autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto. Payagan na palamig bago gamitin. Suriin ang pagpasok ng komersyal na bahay para sa pag-iingat nito. Inirerekomenda ng ilan na mag-imbak sa temperatura ng silid sa isang madilim na lugar, at ang iba pa sa isang refrigerator ay protektado mula sa ilaw.

Ang pH ng handa na daluyan ay 7.1 ± 0.2.

Ang kulay ng dehydrated medium ay light beige at ang handa na daluyan ay light amber na may ilang opalescence.

Ang Thioglycollate sabaw na may tagapagpahiwatig na pinayaman ng hemin at bitamina K

Mayroong mga komersyal na media na naglalaman ng hemin at bitamina K ₁ , lalo na para sa paglilinang ng anaerobes.

Kung wala kang enriched medium para sa anaerobes, maaari mong ihanda ang pangunahing sabaw ng thioglycollate. Para sa mga ito, 10 mg ng hemin hydrochloride at 1 mg ng bitamina K _{1 ay idinagdag} para sa bawat litro ng daluyan. Gayunpaman, kung ang dugo o suwero ay idinagdag sa thioglycollate na sabaw, ang pagdaragdag ng hemin o bitamina K ay hindi kinakailangan.

Thioglycollate sabaw na may calcium carbonate

Dumating ito sa komersyo at inihanda ang pagsunod sa mga tagubilin sa insert.

Thioglycollate sabaw nang walang tagapagpahiwatig

Ito ay may parehong komposisyon ng pangunahing thioglycollate, ngunit hindi naglalaman ng resazurin.

Tumimbang ng 30 g ng dehydrated medium at matunaw sa isang litro ng distilled water. Ang natitirang bahagi ng paghahanda ay pareho ng inilarawan sa thioglycollate na sabaw na may tagapagpahiwatig.

Gumamit

Ang Thioglycollate sabaw ay kapaki-pakinabang para sa pagpapayaman ng mga klinikal na sample, lalo na sa mga nagmula sa mga site. Kapaki-pakinabang din ito para sa mga di-klinikal na halimbawa, tulad ng mga pampaganda, gamot, atbp.

Para sa inoculation ng mga likidong sample (tulad ng CSF, synovial fluid, bukod sa iba pa), ang mga sample ay una na nakasentro at pagkatapos ay 2 patak ng sediment ay kinuha at inilalagay sa thioglycollate sabaw. Mag-incubate sa 35 ° C sa loob ng 24 na oras. Kung sa oras na ito walang pag-unlad (pagkalito), ito ay natupok hanggang sa maximum na 7 araw.

Kung ang sample ay kinuha gamit ang isang pamalo, ang media media ay unang inoculated sa mga plato at sa wakas ang pamunas ay ipinakilala sa sabaw, ang bahagi ng nakausli at nahati ang tubo, naiiwan ang swab sa loob. Mag-incubate sa 35 ° C sa loob ng 24 na oras, maximum na 7 araw.

Para sa mga solidong sample, homogenize sa physiological saline solution (SSF) at pagkatapos ay inoculate ang thioglycollate sabaw na may 2 patak ng suspensyon.

Maaari itong magamit bilang isang medium ng transportasyon para sa mga sample kung saan ang mga mahigpit na anaerobes ay pinaghihinalaang o bilang isang sabaw ng pagpapayaman sa backup.

Ang variant ng thioglycolate na sabaw na may calcium carbonate ay ginagamit para sa pagpapanatili ng mga kontrol ng mga galaw sa mas mahabang panahon, dahil may kakayahang i-neutralisahin ang mga acid na ginawa ng paggamit ng glucose; Ang mga acid na ito ay nakakalason sa ilang mga bakterya.

Ang paglaki sa thioglycollate sabaw ay masusundan ng kaguluhan ng daluyan. Inirerekomenda na magsagawa ng isang Gram stain at kasunod na subculture sa non-pumipili at pumipili media, depende sa uri ng sample at ang mga microorganism na pinaghihinalaan.

QA

Para sa control ng sterility inirerekumenda na mapalubha ang isa o dalawang sabaw nang walang inoculation. Ang inaasahang resulta ay isang malinaw na sabaw, na walang pagbabago ng kulay, kahit na normal na makita ang isang bahagyang kulay rosas sa ibabaw ng tubo.

Para sa kontrol ng kalidad, sa pagitan ng 10 - 100 CFU ng mga sertipikadong control na galaw ay dapat na inoculated, tulad ng Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 114 Ang mga bakterya ng bulgatus ATCC 8482.

Mag-incubate sa 30-35 ° C sa aerobiosis sa loob ng 24 na oras hanggang sa maximum na 3 araw, dahil ang mga microorganism na ito ay mabilis na lumalaki.

Inaasahan ang mabuting pag-unlad sa lahat ng mga kaso, maliban sa Micrococcus luteus at Bacillus subtilis, kung saan maaaring may katamtaman na pag-unlad.

Para sa kalidad na kontrol ng thioglycollate na sabaw na enriched na may hemin at bitamina K ₁ , ang control strains Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 at Bacteroides fragilis ATCC 25285 ay maaaring magamit.Ang inaasahang resulta ay kasiya-siyang paglago.

mga rekomendasyon

-Katulad na mapapansin na ang ibabaw ng thioglycollate na sabaw na may tagapagpahiwatig ay nagiging kulay rosas; Ito ay dahil sa oksihenasyon ng daluyan. Kung ang kulay rosas na kulay ay sumasaklaw sa 30% o higit pa sa kabuuang sabaw, maaari itong pinainit sa isang paliguan ng tubig sa loob ng 5 minuto, pinalamig muli at ginamit.

Aalisin nito ang hinihigop na oxygen, ibabalik ang medium sa orihinal na kulay nito. Ang pamamaraang ito ay maaari lamang gawin nang isang beses.

-Upang mapagbuti ang paglaki ng aerobic bacteria, pag-incubate sa takip na bahagyang maluwag. Gayunpaman, mas mainam na gamitin para sa layuning ito isang sabaw ng pagbubuhos ng utak sa puso o sabaw ng trypticase toyo para sa tamang pag-unlad ng mahigpit na aerobes.

-Ang pagyeyelo ng daluyan o sobrang pag-init ay dapat iwasan, dahil ang parehong mga kondisyon ay pumipinsala sa daluyan.

-Direct light pinsala ang medium medium, dapat itong maiimbak na protektado mula sa ilaw.

Mga Sanggunian

1. Britannia Laboratories. Thioglycollate USP na may tagapagpahiwatig. 2015.Magagamit sa: labBritania.com.
2. Chios Sas Laboratories. 2019. sabaw ng Thioglycollate. Magagamit sa: quios.com.co
3. Mga Laboratories BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003.Magagamit sa: bd.com/Europe
4. Inihanda ang media ng BBL sa mga tubo para sa paglilinang ng anaerobic microorganism. Thioglycollate media. 2013.Magagamit sa: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.