UREA SABAW: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang urea sabaw ay isang daluyan ng kultura ng likido, na ginamit upang makita ang pagkakaroon ng urease enzyme sa ilang mga microorganism. Ang Urease ay isang microbial enzyme na ginawa sa isang paraan ng konstitusyonal, iyon ay, synthesized ito anuman ang o hindi ang substrate kung saan ito kumilos ay naroroon.

Ang pag-andar ng urease ay nauugnay sa agnas ng mga organikong compound. Hindi lahat ng mga microorganism ay may kakayahang synthesizing ang enzyme na ito, samakatuwid ang pagpapasiya nito sa laboratoryo ay nagbibigay-daan sa pagkilala sa ilang mga bakterya na mga galaw at kahit na pagkakaiba sa pagitan ng mga species ng parehong genus.

Negatibong at positibong pagsubok sa urea. Pinagmulan: Larawan na kinunan ng may-akda na si MSc. Marielsa Gil.

Mayroong dalawang uri ng pagsubok ng urea: Stuart at Christensen. Magkaiba sila sa komposisyon at pagiging sensitibo. Ang una ay espesyal na magpakita ng isang malaking halaga ng urease na ginawa ng mga species ng genus na Proteus.

Ang pangalawa ay mas sensitibo at maaaring makita ang maliit na halaga ng urease na nabuo huli sa pamamagitan ng iba pang mga bakteryang genera, tulad ng Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter, at Mycobacterium.

Ang Stuart's Urea Broth ay binubuo ng Urea, Sodium Chloride, Dipot potassium Phosphate, Monopotassium Phosphate, yeast Extract, Phenol Red, at Distilled Water.

Samantala, ang urea na sabaw o agar ni Christensen ay binubuo ng mga peptones, sodium chloride, monopot potassium phosphate, glucose, urea, phenol red, distilled water, at agar-agar. Ang huli lamang kung ito ay ang solidong daluyan.

Batayan

Ang enzyme urease hydrolyzes urea upang makabuo ng carbon dioxide, tubig, at dalawang molekula ng ammonia. Ang mga compound na ito ay gumanti upang mabuo ang produkto ng pagtatapos na tinatawag na ammonium carbonate.

Urea Broth ni Stuart

Ang sabaw ng urea ni Stuart ay mas buffered na may isang pH na 6.8. Samakatuwid, ang microorganism ay dapat na bumuo ng malaking halaga ng ammonia upang maging pula ang phenol. Ang pH ay dapat tumaas sa itaas 8.

Samakatuwid, pumipili ang Stuart na sabaw ng Stuart para sa mga species ng Proteus, na nagbibigay ng mga positibong resulta sa loob ng 24 hanggang 48 na oras ng pagpapapisa ng itlog, at hindi ito epektibo para sa bakterya na gumagawa ng mababang halaga ng urease o na dahan-dahang nag-hydrolyze ng urea.

Ito ay dahil ang mga species ng Proteus ay maaaring gumamit ng urea bilang isang mapagkukunan ng nitrogen. Sa halip, ang iba pang mga gawaing gumagawa ng urease ay nangangailangan ng karagdagang mapagkukunan.

Gayunpaman, si Pérez et al. (2002) tinukoy na ang sabaw ng urea ni Stuart ay mabisa tulad ng Christensen's urea agar para sa pagtukoy ng urease sa lebadura ng genera na Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon at Saccharomyces.

Ang mga may-akda ng pag-aaral ay inaangkin na nakamit ang 100% na kasunduan sa parehong media (Stuart at Christensen) kapag nag-incubating ng 24 at 48 na oras; maliban na ang mga strain na pinamamahalaang upang i-on ang media sa isang malakas na kulay rosas-fuchsia ay kinuha bilang positibo.

Ang paglilinaw na ito ay kinakailangan, dahil sinabi ni Lodder (1970) na halos lahat ng mga lebadura ay namamahala upang i-on ang rosas ng Christensen urea agar bevel. Ito ay dahil sa ang katunayan na maaari nilang i-hydrolyze ang urea sa kaunting halaga, at ang pagbuo ng mga amin sa pamamagitan ng oxidative decarboxylation ng mga amino acid sa ibabaw. Hindi ito dapat maipakitang positibo.

Uric Agar o Broth ni Christensen

Ang ube na sabaw o agar ni Christensen ay hindi gaanong buffered, na nakakakita ng maliit na halaga ng ammonia. Bukod dito, ang daluyan na ito ay pinayaman ng mga peptones at glucose. Ang mga compound na ito ay nagdudulot ng iba pang mga paggawa ng urease na microorganism na lumalaki na hindi lumalaki sa sabaw ng Stuart.

Gayundin, ang Christensen urea test ay nag-aalok ng mas mabilis na mga resulta, lalo na para sa Proteus, na nakapagbigay ng malakas na positibo sa 30 minuto lamang bilang isang minimum na oras at hanggang 6 na oras bilang isang maximum na oras.

Ang natitirang mga microorganism na gumagawa ng urease ay namamahala upang i-on ang kulay ng daluyan nang bahagya pagkatapos ng 6 na oras, at malakas pagkatapos ng 24, 48, 72 na oras o higit pa, at kahit na ang ilang mga galaw ay maaaring magbigay ng mahina na reaksyon pagkatapos ng 5 o 6 na araw.

Pagbibigay kahulugan sa parehong media (Stuart at Christensen)

Ang daluyan ay orihinal na dilaw-kahel na kulay at isang positibong reaksyon ay magpapasara sa kulay ng medium sa pinkish-fuchsia. Ang intensity ng kulay ay direktang proporsyonal sa dami ng ginawa ng ammonia.

Ang isang negatibong reaksyon ay mag-iiwan ng daluyan ng orihinal na kulay maliban sa mga lebadura, na maaaring mamutla ang rosas sa daluyan ng urea agar Christensen.

Paghahanda

Urea Broth ni Stuart

Timbangin ang kinakailangang gramo ayon sa mga indikasyon ng komersyal na kumpanya. Dissolve sa mas mabuti na sterile distilled water. Huwag gumamit ng init upang matunaw, dahil ang urea ay sensitibo sa init.

Ang pagsasala ng lamad ay ginagamit upang isterilisado. Para sa mga ito, isang filter ng Millipore na may mga pores na 0.45 µ ang ginagamit. Huwag gumamit ng isang autoclave. Kapag ang solusyon ay na-filter, ipinamamahagi ito sa mga sterile tubes. Upang makakuha ng maaasahang mga resulta, dapat itong ilipat sa pagitan ng 1.5 ml bilang isang minimum na dami at 3 ml bilang isang maximum na dami ng bawat tubo.

Mag-imbak sa isang refrigerator at mainit-init bago gamitin.

Kung ang pamamaraan ng pagsasala ay hindi magagamit, ang medium ay dapat gamitin agad upang makakuha ng maaasahang mga resulta.

Ang isa pang paraan upang maihanda ang Stuart's Urea Broth ay ang mga sumusunod:

Ang ilang mga komersyal na bahay ay nagbebenta ng base medium para sa urea test, hindi kasama ang urea.

Ang dami na ipinahiwatig ng kumpanya ng komersyal ay timbang. Natunaw ito sa distilled water at isterilisado sa autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto. Ito ay naiwan upang magpahinga ng kaunti at kapag ang medium ay mainit-init, magdagdag ng 100 ml ng isang solusyon sa urea na inihanda sa 20% at isterilisado sa pamamagitan ng pagsala.

Ipinamamahagi ito sa mga sterile tubes, tulad ng inilarawan dati.

Uric Agar o Broth ni Christensen

-Preparasyon ng solusyon sa urea

Tumimbang ng 29 g ng dehydrated urea at matunaw sa 100 ml ng distilled water. Gumamit ng paraan ng pagsasala upang isterilisado. Huwag mag-autoclave.

-Urea base agar

Dissolve 24 g ng dehydrated base agar sa 950 ml ng distilled water. Sterilize sa autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto. Hayaan itong magpahinga hanggang sa umabot sa isang temperatura na 50 ° C at idagdag ang dati nang inihanda na urea nang walang pag-iingat.

Ibuhos ang 4-5 ml sa sterile tubes at ikiling hanggang sa solid. Dapat mayroong isang mahabang tandang plauta.

Ang daluyan na ito ay maaari ding ihanda sa form na likido.

Aplikasyon

Ang urea test ay lubos na epektibo sa pagkilala sa genus na Proteus mula sa iba pang mga genera sa Family Enterobacteriaceae, na binigyan ng mabilis na reaksyon na ibinigay ni Proteus.

Gamit ang komposisyon ng Christensen, ang pagsubok ay tumutulong upang magkakaiba sa pagitan ng mga species ng parehong genus. Halimbawa, ang S. haemolyticus at S. warneri ay coagulase-negatibo at beta-hemolytic Staphylococcus, ngunit naiiba sa na ang S. haemolyticus ay urea negatibo at ang S. warneri ay urea positibo.

Sa kabilang banda, matagumpay na ginamit ng McNulty ang 2% urea sabaw ni Christensen upang pag-aralan ang pagkakaroon ng Helicobacter pylori sa mga sample ng biopsy na kinuha mula sa gastric mucosa (rehiyon ng antral).

Ang pagkakaroon ng H. pylori ay napatunayan ng isang positibong pagsubok sa urea. Ang tagal ng oras upang obserbahan ang mga resulta ay direktang proporsyonal sa dami ng mga microorganism na naroroon.

Tulad ng nakikita, ito ay isang simpleng pamamaraan para sa pagsusuri ng Helicobacter pylori sa mga gastric biopsies.

Panghuli, ang pagsusulit na ito ay kapaki-pakinabang din para sa pag-iba ng mga species mula sa genera na Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, at Mycobacteria.

Paghahasik ng urea test

Ang parehong mga pamamaraan ay nangangailangan ng isang malakas na microbial inoculum upang mai-optimize ang mga resulta. Ang mga kolonya ng bakterya ay mas mabuti na kinuha mula sa agar agar ng dugo at lebadura mula sa Sabouraud agar, na may ilang mga pagbubukod. Ang inoculum ay emulado sa likidong daluyan.

Para sa urea sabaw ni Stuart, mag-incubate sa 37 ºC sa loob ng 24 hanggang 48 na oras, alam na naghahanap ka lamang ng mga proteus na galaw kapag ang pilay ay isang bakterya. Para sa mga lebadura, maaari itong ma-incubated sa 37 ° C o sa temperatura ng silid para sa 24 hanggang 48 na oras ng pagpapapisa ng itlog.

Sa kaso ng ubeens ni Christensen, ito ay natupok sa 37 ºC sa loob ng 24 na oras. Kung negatibo ang pagsubok, maaari itong ma-incubated hanggang sa 6 na araw. Kung ang pagsubok ay positibo bago ang 6 na oras, ipinapahiwatig nito na ito ay isang pilay ng genus na Proteus.

Sa kaso ng Christensen's urea agar, ang agar bevel ay malakas na inoculated, nang walang pagbutas. Ang sabaw ay natutuyo at binibigyang kahulugan sa parehong paraan.

QA

Ang mga kontrol sa galaw tulad ng Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 at Salmonella typhimurium ay maaaring magamit upang masubukan ang daluyan. Ang unang dalawa ay dapat magbigay ng positibong resulta at ang huling dalawang negatibong resulta.

Pinagmulan: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.

Mga Sanggunian

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Ang paggamit ng sabaw ng urea ng Stuart para sa urease test, bilang isang pagsubok sa diagnosis ng lebadura. Si Rev. Soc. Ven. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Magagamit sa: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Mga pagsubok sa biochemical para sa pagkilala ng mga bakterya na kahalagahan ng klinikal. 3rd ed. Editoryal Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
5. Britannia Laboratories. Christensen Medium (Urea agar base) 2015.Available at: britanialab.com