VOGES-PROSKAUER TEST: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2026

Ang pagsubok ng Voges-Proskauer ay isang pagsubok na biochemical na ginamit upang makatulong sa pagkilala sa mga bakterya na kabilang sa pamilyang Enterobacteriaceae. Lalo na kapaki-pakinabang ito para sa pagkakaiba-iba ng mga strain ng Escherichia coli mula Klebsiella at Enterobacter, bukod sa iba pa.

Ang pagsubok ay isinasagawa sa isang daluyong kultura medium na tinatawag na Methyl Red - Voges Proskauer, na mas kilala sa acronym RM / VP. Ang medium na ito ay binubuo ng buffered polypeptone, glucose, dipot potassium phosphate, at distilled water.

Methyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) komersyal na daluyan / VP test positibo at negatibong ayon sa pagkakabanggit. Pinagmulan: Larawan na kinunan ng may-akda na si MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, mula sa Wikimedia Commons

Ang kasalukuyang daluyong RM / VP ay isang pagbabago ng daluyan ng Clark at Lubs, na orihinal na naglalaman ng isang mas mababang konsentrasyon ng mga peptones at glucose. Kaya, mas mababa sa hydrogen ion, na kinakailangan para sa positibong reaksyon ng Voges-Proskauer, ay ginawa.

Ang pagsubok ay batay sa kakayahan ng microorganism na gumamit ng glucose sa pamamagitan ng ruta ng butylene-glycol, at bumubuo ng isang pangwakas na pangwakas na produkto na tinatawag na acetoin, sa pagkakaroon ng oxygen at isang alkaline pH.

Sa daluyan ng RM / VP, bilang karagdagan sa kakayahang ibunyag ang pagsubok ng Voges-Proskauer, maaari ring mahayag ang methyl red test.

Batayan

Batayan sa pagsubok ng Voges-Proskauer

Ang mga pluripeptones na naroroon sa daluyan ay nagbibigay ng mga mahahalagang pangangailangan sa nutrisyon para sa paglaki ng bakterya. Para sa bahagi nito, ang glucose ay ang pangunahing tambalan. Maraming bakterya ang may kakayahang mag-metabolize ng glucose at bumubuo ng pyruvic acid.

Ang pyruvic acid ay isang midpoint sa metabolismo ng glucose at mula doon ang bawat microorganism ay maaaring gumawa ng iba't ibang mga ruta. Ang ilan ay bubuo ng mga halo-halong mga asido, tulad ng lactic acid, acetic acid, formic acid, at succinic acid, at iba pa ay bubuo ng mga neutral na produkto tulad ng 2,3-butanediol.

Ang pagsubok ng Voges-Proskauer ay naghayag sa kakayahan ng microorganism upang makabuo ng acetyl methyl carbinol (acetoin), isang intermediate na produkto ng 2,3-butanediol sa ilalim ng mga kondisyon ng aerobic.

Ang Acetoin ay nabawasan at bumubuo ng 2,3-butanediol, ngunit ang reaksyon na ito ay mababalik, samakatuwid kung ang 2,3-butanediol ay na-oxidized, ang acetoin ay nabuo. Samakatuwid, ang oxygen ay mahalaga.

Ang potassium phosphate ay ang buffer na nagpapabagal sa halo sa pH 6.9 ± 0.2.

Ang patunay na pagsisiwalat at batayan ng interpretasyon

Upang maipakita ang reaksyon, dapat isagawa ang isang pag-unlad gamit ang dalawang reagents (Barrit reagents), na kilala bilang Voges A at Voges B.

Ang Voges A ay isang 5% na solusyon ng α-naphthol, at ang Voges B ay isang 40% na paghahanda ng potassium hydroxide. Kung ang potasa ng hydroxide ay hindi magagamit, maaari itong mapalitan ng 40% sodium hydroxide.

Ang Naph-Nephthol ay isang katalista na magpapataas ng tindi ng kulay ng reaksyon, na ginagawang mas sensitibo ang pagsubok. Ang α-naphthol ay dapat palaging maidaragdag muna, nanginginig ang tubo upang ang daluyan ay makikipag-ugnay sa oxygen. Sa ganitong paraan ang naroroon ng acetoin ay na-oxidized sa diacetyl, at ang 2,3-butanediol ay na-oxidized upang mabuo ang acetoin, na ipinapasa ito sa diacetyl.

Ito ay kung paano magbubuklod ang α-naphthol sa diacetyl, na kung saan ay sumali sa guanidine nucleus na naroroon sa amino acid arginine, ang huli na nagmumula sa mga pluripeptones.

Para sa bahagi nito, ang potasa o sodium hydroxide ay may pananagutan sa pagsipsip ng CO ₂ at pagtugon sa mga peptones. Ang reaksyong ito ay nagiging sanhi ng pagbuo ng isang kulay ng salmon-pink, malinaw na nakikita pagkatapos ng pag-alog ng tubo nang maayos.

Ang tama na halaga ng diacetyl, peptone, at α-naphthol ay dapat na ihalo para sa kulay na mangyari agad. Kung hindi ito nangyari, pinahihintulutan ang tube na magpahinga sa loob ng 15 minuto bago isalin.

Ang pagsubok ay karaniwang positibo pagkatapos ng 2 hanggang 5 minuto, kung ang isang malabo na kulay rosas ay makikita. Kung naiwan upang tumayo ng 30 min hanggang 1 oras, ang intensity ng kulay ay magiging maximum (matindi ang pula).

Ang isang negatibong pagsubok ay lalabas kapag ang dilaw ay nagiging dilaw. Matapos ang 1 oras, kung negatibo ang pagsubok, ang isang kulay ng tanso ay maaaring mabuo bilang isang resulta ng reaksyon ng potasa hydroxide sa α-naphthol.

Paghahanda

Katamtamang MR / VP

Tumimbang ng 17 g ng dehydrated medium medium at matunaw sa isang litro ng distilled water. Hayaang tumayo ng 5 minuto. Init sa isang pigsa upang matunaw nang lubusan. Maglingkod ng 3 hanggang 4 ml sa mga tubes at isterilisado sa autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.

Ang dehydrated culture medium ay beige na kulay at ang handa na daluyan ay light amber na kulay.

Ang pangwakas na pH ng daluyan ay 6.9 ± 0.2.

Voges Isang reagent

Tumimbang ng 5 g ng α-naphthol at matunaw sa 50 ml ng ethyl alkohol (ganap). Pagkatapos ay ipagpatuloy ang pagdaragdag ng etil na alkohol hanggang sa umabot sa 100 ml.

Muling sumigaw ang Voges B

Tumimbang ng 40 g ng potassium hydroxide at matunaw sa 50 ml ng distilled water sa isang beaker. Ang baso ay dapat ilagay sa isang malamig na paliguan ng tubig upang makontrol ang temperatura, dahil kapag ang paghahanda ay natunaw, ang temperatura ay tumataas nang husto.

Matapos malamig ang solusyon, inililipat ito sa isang volumetric flask at binubuo ng hanggang 100 ML na may distilled water.

Pamamaraan sa pagsubok ng Voges-Proskauer

Upang maisagawa ang pagsubok sa Voges-Proskauer, ang isang sabaw na RM / VP ay inoculated sa microorganism sa ilalim ng pag-aaral, mula sa isang purong kultura sa loob ng 18 hanggang 24 na oras.

Ang inoculum ay hindi dapat maging siksik. Ito ay incubated sa 35-37 ° C sa loob ng 24 hanggang 48 na oras, bagaman kinakailangan ang pagpapapisa ng itlog sa loob ng maraming araw. Ang opinyon ng Cowan at Steel na ang 5 araw ay ang minimum na oras ng pagpapapisa ng itlog na kinakailangan upang makita ang lahat ng mga positibong uri ng Voges-Proskauer (VP) ng pamilya Enterobacteriaceae.

Pag-unlad ng pagsubok

Paghiwalayin ang isang 1 mL aliquot sa isang tubo at bumuo ng mga sumusunod: Ilagay ang 12 patak (0.6 mL) ng Voges Isang reagent at 4 na patak (0.2 mL) ng Voges B. Paghaluin sa aerate at payagan upang manirahan para sa 5 - 10 minuto bago bigyang kahulugan. Gayunpaman, kung ang pagsubok ay negatibo pa rin, hayaang umupo ito at obserbahan ang tubo pagkatapos ng 30 minuto hanggang 1 oras.

Ang hitsura ng isang kulay rosas na kulay-pula ay nagpapahiwatig na ang reaksyon ng Voges-Proskauer ay positibo. Kung ang daluyan ay nananatiling dilaw ang reaksyon ay negatibo.

Ang pagdaragdag ng mga developer sa pagkakasunud-sunod at dami na ipinahiwatig ay mahalaga upang maiwasan ang mga maling negatibo.

Gumamit

Ang pagsubok ng Voges-Proskauer ay kapaki-pakinabang upang magkakaiba sa pagitan ng mga strain ng E. coli na VP negatibo, ng genera na Klebsiella, Enterobacter, Serratia, bukod sa iba pa, iyon ay positibo sa VP.

Pinagmulan: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.

QA

Ang mga control strains, kabilang ang Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium at Enterobacter cloacae ATCC 13047, ay maaaring magamit upang masubukan ang kalidad ng handa na daluyan.

Ang inaasahang resulta ay positibo sa mga reaksyon ng Voges-Proskauer para lamang sa K. pneumoniae at E. cloacae. Ang natitira ay nagbibigay ng negatibong reaksyon.

Mga Sanggunian

1. Britannia Laboratories. Medium ng MR-VP. 2015.Magagamit sa: www.britanialab.com
2. Microkit Laboratories. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Magagamit: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). Mga pagsubok sa biochemical para sa pagkilala ng mga bakterya na kahalagahan ng klinikal. 3rd ed. Editoryal Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.