PAGMAMARKA NG SPORE: MAKATUWIRAN, PAMAMARAAN AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2026

Ang paglamlam ng spore ay ang pamamaraan na ginamit upang kulayan ang mga istruktura ng paglaban na bumubuo sa ilang mga bakteryang genera kapag sa hindi kanais-nais na mga kondisyon; Ang mga istrukturang ito ay tumutugma sa isang form ng kaligtasan.

Maraming genera na bumubuo ng mga spores; gayunpaman, ang pangunahing mga ito ay Bacillus at Clostridium. Ang mga genera na ito ay itinuturing na mas nauugnay dahil mayroon silang mga pathogen species para sa mga tao.

Pagpapanatili ng spore ng paraan ng Shaeffer - Fulton o Wirtz-Conklin na pamamaraan. At tambe (orihinal na uploader), mula sa Wikimedia Commons

Ang bawat bacillus ay maaaring magbigay ng pagtaas ng isang spore. Sa oras na mapanatili ang paghahanda, ang spore ay matatagpuan sa loob ng bacillus (endospore) o sa labas nito (exospore). Sa mga maginoo na pamamaraan ng paglamlam para sa bakterya - tulad ng mantsa ng Gram - ang mga spores ay mananatiling walang kulay.

Sa kasalukuyan, maraming mga pamamaraan ng paglamlam na may kakayahang tumagos sa makapal na istraktura ng spore upang makulay ito. Ang mga pamamaraan na ito ay ibang-iba; Kasama dito ang pamamaraan ng Dorner, ang Möeller stain at ang Shaeffer - Fulton methodology, na kilala rin bilang Wirtz-Conklin.

Sa lahat ng mga pamamaraan na nabanggit, ang pamamaraan ng Shaeffer-Fulton ay ang pinaka-malawak na ginagamit sa mga nakagawiang laboratoryo. Pinangalanan ito matapos ang dalawang microbiologist na lumikha ng kulay noong 1930: Alicia Shaeffer at MacDonald Fulton. Gayunpaman, ang pamamaraan ay kung minsan ay pinangalanan Wirtz-Conklin pagkatapos ng dalawang mga bacteriologist mula 1900s.

Batayan

Ang mga spores ay hindi marumi sa mga maginoo na mantsa dahil mayroon silang isang napakakapal na dingding. Ang kumplikadong komposisyon ng spores ay pinipigilan ang pagpasok ng karamihan sa mga colorant.

Kung ang spore ay pinag-aralan mula sa labas sa, ang mga sumusunod na layer ay sinusunod: una, mayroong exosporium, na kung saan ay ang payat at panlabas na layer na nabuo ng glycoproteins.

Susunod na darating ang cuticle, na nagbibigay ng pagtutol sa mataas na temperatura, na sinusundan ng cortex na binubuo ng peptidoglycan. Kalaunan ay ang dingding ng base na nagpoprotekta sa protoplast.

Ang spore ay isang dehydrated na istraktura na naglalaman ng 15% calcium at dipicolinic acid. Samakatuwid, ang karamihan sa mga diskarte sa pag-store ng spore ay umaasa sa aplikasyon ng init upang ang tina ay maaaring tumagos sa makapal na istraktura.

Kapag ang spore ay namantsahan, hindi nito matanggal ang pangulay. Sa pamamaraan ng Shaeffer - Fulton, ang malachite green ay pumapasok sa mga vegetative cells at, kapag inilalapat ang init, tumagos sa endospore pati na rin ang mga exospores.

Sa pamamagitan ng paghuhugas ng tubig, ang pangulay ay tinanggal mula sa vegetative cell. Nangyayari ito dahil ang malachite green dye ay bahagyang basic, kaya hinigpitan ito nang mahina sa vegetative cell.

Sa halip, hindi ito makawala sa spore at sa huli ang bacillus ay hindi naisip na safranin. Ang pundasyong ito ay may bisa para sa natitirang mga pamamaraan, kung saan ang isang katulad na mangyayari.

Mga diskarte sa pagnanasa ng spore

Upang maisakatuparan ang paglamlam ng spore, dapat makuha ang isang purong kultura ng kahina-hinalang strain na mapag-aralan.

Ang kultura ay sumailalim sa matinding temperatura sa loob ng 24 na oras upang pasiglahin ang microorganism upang mag-sporulate. Para sa mga ito, ang kultura ay maaaring mailagay sa isang oven sa 44 ° C o sa isang ref (8 ° C) sa loob ng 24 o 48 na oras.

Kung naiwan nang masyadong mahaba sa mga nabanggit na temperatura, ang mga exospores lamang ang masusunod, dahil ang lahat ng mga endospores ay lalabas na sa bacillus.

Sa pagtatapos ng oras, ang ilang mga patak ng sterile na physiological solution ay dapat ilagay sa isang malinis na slide. Pagkatapos ang isang maliit na bahagi ng kultura ay nakuha at isang mahusay na pagkalat ay ginawa.

Pagkaraan, maiiwan upang matuyo, naayos sa init at tinina gamit ang isa sa mga pamamaraan na ipinaliwanag sa ibaba:

Dorner Technique

1- Maghanda sa isang test tube isang puro suspensyon ng sporulated microorganism sa distilled water at magdagdag ng isang pantay na dami ng na-filter na Kinyoun carbol fuchsin.

2- Ilagay ang tubo sa isang paliguan na may tubig na kumukulo sa pagitan ng 5 at 10 minuto.

3- Sa isang malinis na slide, ihalo ang isang patak ng nakaraang suspensyon na may isang patak ng 10% may tubig na solusyon ng nigrosine, pinakuluang at sinala.

4- Kumalat at matuyo nang mabilis sa banayad na init.

5- Suriin sa isang 100X layunin (paglulubog).

Ang mga spores stain pula at ang mga selula ng bakterya ay lumilitaw halos walang kulay laban sa isang madilim na kulay-abo na background.

Binagong Dorner Technique

1- Ang isang suspensyon ng sporulated microorganism ay kumakalat sa isang slide at naayos sa init.

2- Ang sample ay sakop ng isang filter na strip ng papel na kung saan ay idinagdag carbol fuchsin. Ang colorant ay pinainit para sa 5 hanggang 7 minuto kasama ang siga ng burner ng Bunsen hanggang sa mabuo ang ebolusyon ng mga singaw. Pagkatapos ay tinanggal ang papel.

3- Ang paghahanda ay hugasan ng tubig at pagkatapos ay tuyo na may sumisipsip na papel.

4- Takpan ang smear sa isang manipis na pelikula na 10% nigrosin, gamit ang isang pangalawang slide upang maikalat ang nigrosin o isang karayom.

Ang kulay na kinuha ng spores at bacteria ay pareho sa na inilarawan sa naunang sining.

Shaeffer - pamamaraan ng Fulton o Wirtz-Conklin

1- Gumawa ng isang pinong smear na may pagsuspinde sa sporulated microorganism sa isang slide at ayusin upang maiinit.

2- Takpan ang slide na may 5% malachite green aqueous solution (maaari kang maglagay ng isang filter na papel sa slide).

3- Mag-init sa apoy ng Bunsen burner upang maging sanhi ng pagpapakawala ng mga singaw at alisin ang siga. Ulitin ang operasyon para sa 6 hanggang 10 minuto. Kung ang malachite green solution ay sumingaw ng labis sa panahon ng pamamaraan, marami pa ang maaaring maidagdag.

4- Alisin ang filter na papel (kung naka-install) at hugasan ng tubig.

5- Takpan ang slide na may 0.5% may tubig na safranin sa loob ng 30 segundo (ang ilang mga variant ng pamamaraan ay gumagamit ng 0.1% may tubig na safranin at iwanan ito ng 3 minuto).

Sa pamamaraang ito, ang spores ay lilitaw na berde at pula ang bacilli.

Mayroon itong kawalan na ang mga endospores ng mga batang kultura ay hindi mantsang mabuti, dahil lumilitaw ang mga ito nang malinaw o walang kulay. Upang maiwasan ito, inirerekumenda na gumamit ng mga kultura ng 48 na oras ng pagpapapisa ng itlog.

Teknolohiya ng Möeller

1- Takpan ang smear na may chloroform sa loob ng 2 minuto.

2- Itapon ang chloroform.

3- Takpan na may 5% chromic acid sa loob ng 5 minuto.

4- Hugasan gamit ang distilled water

5- Ang sheet ay natatakpan ng carbol fuchsin-fenicada at nakalantad sa apoy ng burner ng Bunsen hanggang sa paglabas ng mga singaw; pagkatapos ay tinanggal ito mula sa siga para sa isang sandali. Ang operasyon ay paulit-ulit hanggang 10 minuto ay nakumpleto.

6- Hugasan ng tubig.

7- Gumamit ng acidified ethanol (hydrochloric alkohol) upang mawala. Naiwan ito sa loob ng 20 o 30 segundo.

8- Hugasan gamit ang distilled water.

9- Paghahambing sa pamamagitan ng takip ng sheet na may asul na methylene sa loob ng 5 minuto.

10- Hugasan gamit ang distilled water.

11- Hayaan itong matuyo at ang sample ay dadalhin sa mikroskopyo.

Ang spores ay lilitaw na pula at asul ang bacilli. Mahalaga na huwag huminga sa mga singaw, dahil sila ay nakakalason at sa pangmatagalang maaaring maging carcinogenic.

Binago ang pamamaraan ng Möeller nang walang init

Noong 2007 si Hayama at ang kanyang mga nakikipagtulungan ay lumikha ng isang pagbabago ng pamamaraan ng Möeller. Inalis nila ang hakbang ng pagpainit ng pangulay at pinalitan ito ng pagdaragdag ng 2 patak ng surfactant Tergitol 7 para sa bawat 10 ml na solusyon ng carbol fuchsin-carbol. Ang parehong mga resulta ay nakuha.

Aplikasyon

Ang paglamlam ng spores ay nagbibigay ng napakahalaga at kapaki-pakinabang na impormasyon para sa pagkakakilanlan ng pathogen, dahil ang pagkakaroon nito, ang hugis nito, lokasyon sa loob ng bacillus at ang kakayahang mabalangkas ang vegetative cell o hindi, ay ang mga data na maaaring gabayan ang mga species kasangkot sa loob ng isang tiyak na genre.

Sa konteksto na ito, nagkakahalaga na sabihin na ang mga spores ay maaaring maging bilog o hugis-itlog, maaari silang matatagpuan sa gitna o din sa isang posisyon ng paracentral, subminal o terminal.

Diagram ng hugis at posisyon ng mga endospores at exospores

Mga halimbawa

- Ang Clostridium difficile ay bumubuo ng isang oval spore sa isang posisyon ng terminal na deforms ang bacillus.

- Ang spore ng Clostridium tertium ay hugis-itlog, hindi ipinapahiwatig ang bacillus at matatagpuan sa antas ng terminal.

- Ang endospore ng Clostridium tetani ay terminal at deforms ang bacillus, na nagbibigay ng hitsura ng isang drumstick.

- Ang spores ng Clostridium botulinum, C. histolyticum, C. novy at C. septicum ay bilog o hugis-itlog na subterminal at pinapahiwatig ang bacillus.

- Ang endospore ng Clostridium sordelli ay matatagpuan sa gitnang posisyon, na may isang maliit na pagpapapangit.

Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. (Ika-5 ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA

Mga Sanggunian

1. Si Hayama M, Oana K, Kozakai T, Umeda S, Fujimoto J, Ota H, Kawakami Y. Panukala ng isang pinasimple na pamamaraan para sa paglamlam ng spores ng bakterya nang hindi nag-aaplay ng init - matagumpay na pagbabago ng pamamaraan ng Moeller. 2007 ng J J Med Res. 2007; 16 12 (8): 356-9.
2. Mga nag-aambag sa Wikipedia. Mantsa ng Moeller. Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. Nobyembre 3, 2018, 03:28 UTC. Magagamit sa: en.wikipedia.org
3. Pérez R, Juárez M, Rodríguez (2011). Manwal na Laboratory ng Microbiological Techniques. Kagawaran ng Pangunahing Agham Academy of Microbiology. National Polytechnic Institute.
4. "Endospore." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 25 Peb 2018, 10:20 UTC. 10 Jan 2019, 02:42: en.wikipedia.org
5. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J at mga nakikipagtulungan. (2006). Mga Tauhan ng Trabaho ng autonomous na komunidad ng Extremadura. Tukoy na agenda Dami IV. Editoryal MAD. Seville-Spain, pp 211-212.
6. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006) .Sukhang tekniko ng laboratoryo ng espesyalista, Galician Health Service (SERGAS). Tukoy na dami ng paksa ng paksa 2. Editoryal na MAD. Seville-Spain, pp 79-80.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. (Ika-5 ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
8. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editoryal Panamericana SA