NEGATIBONG STAINING: MAKATUWIRAN, PAMAMARAAN, KALAMANGAN AT KAWALAN - BIOLOGY - 2026

Ang negatibong paglamlam ay isang paraan ng espesyal na pangkulay upang i-highlight ang pagkakaroon ng kapsula sa ilang mga microorganism , higit sa lahat Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae at Cryptococcus neoformans-, mula sa mga klinikal na specimens o purong kultura.

Ang direktang sample na karaniwang ginagamit upang mag-aplay ng negatibong paglamlam ay cerebrospinal fluid. Ang pamamaraan na ito ay kumakatawan sa isang mabilis na alternatibo para sa presumptive diagnosis ng meningitis, lalo na ang Cryptococcus neoformans.

A. Ang tartar ng ngipin na may mantika ng India, B. Cryptococcus neoformans var gatti mahina na napapaligiran ng nangyayari sa kalikasan, gamit ang nigrosin. C. Cryptococcus neoformans var gatti na may isang makapal na kapsula na matatagpuan sa form na parasito nito, gamit ang nigrosin. D. Cryptococcus neoformans na may bahagyang natunaw na tinta ng India. Gisell Quinde, mula sa Wikimedia Commons / CDC, sa pamamagitan ng Wikimedia Commons / Photo Credit: Mga Provider ng Nilalaman: CDC / Dr. Leanor Haley, sa pamamagitan ng Wikimedia Commons

Gayundin, ang mantsang ito ay maaaring mailapat sa plema ng sputum at sterile sa pangkalahatan, pati na rin sa mga strain na nakuha mula sa mga batang purong kultura. Ang pamamaraan na ito ay gumagamit ng tinta ng nigrosine o India para sa pagpapatupad nito; samakatuwid, ito ay isang napaka-simple at murang pamamaraan upang mailapat na nagbibigay ng impormasyon ng mahusay na halaga ng diagnostic sa isang maikling panahon.

Sa kahulugan na ito, ang anumang laboratoryo ay may kakayahang maisagawa ang panglamig na ito. Siyempre, ang laboratoryo ay dapat magkaroon ng karampatang mga tauhan na may kakayahang kilalanin ang nakahiwalay o namumuko na yeoformans na mga yeoformans na yeptormans at pagkakaiba sa kanila mula sa mga leukocytes at artifact na maaaring ipakita ng sample.

Batayan

Ang Nigrosine at India tinta ay gumagana sa isang katulad na paraan; samakatuwid, ang alinman sa dalawang sangkap ay maaaring magamit nang palitan.

Ang diskarteng ito ay tinatawag na negatibong paglamlam dahil kumikilos ito sa isang salungat na paraan sa natitirang pamamaraan ng paglamlam. Sa ito, ang nananatiling hindi naaangkop ay ang istraktura na hinahanap o nais ng isang tao na makita; iyon ay, mga microorganism.

Samakatuwid, ang paglamlam ay batay sa paglamlam sa ilalim ng pahid ng isang madilim na kulay. Sa sitwasyong ito, ang mga nakabalangkas na istraktura ay tatayo sa ilaw o walang kulay na kulay.

Sa pangkalahatan, ang mga lebadura ay mapaglalang, napapaligiran ng isang malinaw na halo na tumutugma sa mga kapsula. Nangyayari ito dahil ang tinta at nigrosin ng India ay mga sangkap na hindi tumagos sa polysaccharide na bumubuo sa kapsula ng mga buhay na microorganism.

Kapansin-pansin na ang iba pang mga istraktura na maaaring naroroon sa direktang sample, tulad ng leukocytes o pulang mga selula ng dugo, ay hindi rin tumagos.

Ngayon, kung ang mga microorganism ay patay, ang pangulay ay maaaring tumagos sa loob ng mga ito, upang ang paglamlam na ito ay kapaki-pakinabang din upang masuri ang posibilidad ng mga microorganism.

Teknik

materyales

Nigrosine

Ang Nigrosine ay may utang sa pangalan ng itim na kulay na mayroon ito. Ito ay isang gawa ng tao na nakuha mula sa pag-init ng pinaghalong mga organikong compound -such bilang nitrobenzine, aniline at aniline hydrochlorite-, gamit ang isang katalista (bakal o tanso) sa sinabi na reaksyon.

Tinta ng Intsik

Ang tinta ng Tsino ay isang sangkap na ginagamit pangunahin ng mga Asyano para sa pagsusulat, paggawa ng mga gawa ng sining, at pagpipinta ng monochromatic. Ito ay napakapopular sa kulturang Tsino.

Ito ay nakuha mula sa pusit na tinta na may halo-halong may pulso na uling, ang produkto ng pagsusunog ng mga puno na may mababang resinous.

Posible rin na ihanda ito mula sa soot mula sa pagsunog ng hydrocarbons (mga langis ng gulay), kasama ang isang protina na gelatin na nagbibigay ito ng tamang pagkakapareho upang maiwasan ang pag-ulan ng mga particle ng carbon.

Mga pagtutukoy para sa pag-sampling

- Hindi ito nangangailangan ng pag-aayuno.

- Ang CSF, plema o sterile liquid sample ay dapat maglaman ng hindi bababa sa 1 ml ng lakas ng tunog at dapat ilipat agad sa laboratoryo sa temperatura ng silid.

- Ang mga sample ng CSF at sterile fluid ay dapat gawin ng isang dalubhasang doktor.

- Maaari rin itong maging isang purong kultura ng isang kahina-hinalang pilay na naka-link sa nabanggit na mga pathogens.

Ang pagpapatupad ng pamamaraan na may direktang mga sample

- Ang mga sample ay dapat isentro, pagkatapos supernatant ay itapon at kinuha ang sediment.

- Ang isang patak ng centrifuged material (sediment) at isang patak ng India tinta o nigrosine ay inilalagay sa isang malinis na slide.

- Dapat itong ihalo nang maayos at natatakpan ng isang takip na takip, na pinapayagan ang pagbagsak na kumalat bilang isang manipis na pelikula nang hindi pumupunta sa mga gilid.

- Kasunod, ang paghahanda ay naka-mount sa mikroskopyo.

- Kung ang paghahanda ay masyadong madilim, maaari itong matunaw ng tubig.

Pagpatay ng diskarteng may mga pilay mula sa kultura

- Ang isang napakaliit na bahagi ng isang batang kultura ay kinunan gamit ang isang seeding karayom ​​at natunaw sa isang patak ng tinta ng India na dati nang inilagay sa isang malinis na slide.

- Ang isang takip ay inilalagay sa tuktok.

- Ito ay sinusunod sa mikroskopyo sa 10X at pagkatapos ay sa 40X.

Maaari mo ring matunaw ang isang bahagi ng kolonya sa distilled water, at mula doon kumuha ng isang patak at ihalo ito sa tinta ng India. Sa ganitong paraan, ang paghahanda ay hindi magiging makapal, na ginagawang posible na obserbahan ang mga istruktura sa paghihiwalay; kung may mga pulutong, hindi ito maayos na sinusunod.

Ang isa pang pamamaraan ay ang mga sumusunod:

- Maglagay ng isang patak ng kultura ng suspensyon sa isang dulo ng slide.

- Maglagay ng isang patak ng nigrosine sa parehong dulo at ihalo.

- Sa tulong ng isa pang slide, kumalat ang sample na parang gumagawa ng isang hematological smear.

- Hayaan ang tuyo at obserbahan sa ilalim ng mikroskopyo.

Pagmamasid sa mikroskopyo

Kailangan mo munang tumuon sa isang 10X na layunin upang magkaroon ng malawak na pagtingin sa larangan. Kasunod nito, dapat itong hahanapin kung may malinaw na mga puwang; kung mayroong, tumuon sa 40X upang makita ang mga detalye.

Kalamangan

- Madali itong isagawa.

- Ito ay isang murang pamamaraan.

- Ang pamamaraang ito ay hindi hinihiling na ang smear ay maayos upang maiinit o may mga kemikal; samakatuwid, ang mga microorganism ay sinusunod nang walang mga pagbaluktot.

- Ang sariwang paghahanda ay hindi kailangang matuyo, kaya maaari itong sundin kaagad, pagbuo ng mga resulta nang mabilis.

Kawalang-galang

Kapag natipon, ang mga sariwang paghahanda ay dapat na sundin kaagad; kung pinapayagan silang matuyo ito ay hindi na posible na obserbahan ang mga ito at dapat na mai-install ang isang bago.

Paglamlam ng tissue sa tinta ng India

Ang isa pang pag-andar na maaaring matupad ng tinta ng India ay sa mga laboratoryo ng patolohiya. Ito ay inilalapat sa mga kirurhiko na nakuha ng mga sample ng tissue upang markahan ang mga margin ng resection ng tumor.

Ang minarkahang tisyu ay sprayed na may acetic acid. Ito ay kumikilos bilang isang mordant at pinipigilan ang tinta mula sa paglabas kapag ang tisyu ay sumailalim sa nakagawiang pagproseso para sa paghahanda ng biopsy.

Ang pamamaraan ay binubuo ng pagligo ng tisyu sa alkohol at xylene, at pagkatapos ay mababad ito sa paraffin wax. Ang pagmamarka na ito ay gumagabay sa pathologist kapag pinagmamasdan ang tisyu, na nagpapahiwatig kung nasaan ang kirurhiko sa resection margin o iba pang punto ng interes.

Mga Sanggunian

1. «Nigrosina». Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 11 Jul 2017, 22:46 UTC. 6 Jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Intsik tinta". Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 1 Oktubre 2018, 03:08 UTC. 6 Jan 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J at mga nakikipagtulungan. (2006). Mga Tauhan ng Trabaho ng autonomous na komunidad ng Extremadura. Tukoy na agenda Dami IV. Editoryal MAD. Seville-Spain, pp 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006) .Sukhang tekniko ng laboratoryo ng espesyalista, Galician Health Service (SERGAS). Tukoy na dami ng paksa ng paksa 2. Editoryal na MAD. Seville-Spain, pp 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editoryal Panamericana SA