HEMATOXYLIN-EOSIN STAINING: MGA KATANGIAN, GAMIT, PAMAMARAAN - CHEMISTRY - 2025

Ang hematoxylin - eosin ay isang pamamaraan ng paglamlam gamit ang kumbinasyon ng mga dyes hematoxylin at eosin. Ang pares ng mga tina na ito ay gumagawa ng isang perpektong duo, dahil ang hematoxylin ay kumikilos bilang isang pangunahing pangulay at eosin ay isang acid dye.

Ang pagtatalaga ng mga pangunahing o acid dyes ay hindi tumutukoy sa pH na nakukuha nila sa solusyon, ngunit sa halip ay nagsasalita ng umiiral na proporsyon sa mga tuntunin ng mga anionic o cationic na mga taglay nila o sa lokasyon ng pangkat ng chromophore.

Hematoxylin - eosin (HE) marumi ciliated columnar epithelium Pinagmulan: Todd Straus at Vladimir Osipov

Sa ganitong kahulugan, ang hematoxylin ay itinuturing na isang pangunahing (kationic) na pangulay at samakatuwid ay may isang pagkakaugnay sa mga istruktura ng acid, tulad ng nucleus ng mga cell. Habang ang eosin, pagiging isang acid (anionic) dye, ay may isang ugnayan para sa alkalina o pangunahing mga istruktura, tulad ng cell cytoplasm.

Para sa kadahilanang ito, ang kumbinasyon ng mga tina na ito ay malawakang ginagamit para sa paglamlam ng tisyu, dahil pinapayagan nito ang mga nuclei at cytoplasms na malinaw na makilala. Ang nuklear na mantsa ng madilim na asul o lila at ang cytoplasm pink.

Ang hematoxylin-eosin staining ay isa sa mga pinaka-malawak na ginagamit na pamamaraan ng paglamlam sa lugar ng histology at cytology, dahil sa madaling paghawak at mababang gastos. Ginagamit ito upang mailarawan ang mga selula, makapal na mga fibre ng nerve at ang pagkakaroon ng ilang mga microorganism sa mga tisyu, tulad ng: mga parasito, fungi at bakterya, bukod sa iba pa.

katangian

Hematoxylin

Ang Hematoxylin ay isang neutral na pangulay. Gayunpaman, ang sangkap na nagbibigay ng kulay (chromophore) ay matatagpuan sa cationic o pangunahing sentro ng molekula. Samakatuwid ang pagkakaugnay nito para sa mga istruktura ng acid. Ang formula ng kemikal na ito ay C ₁₆ H ₁₄ O ₆ at ang pang-agham na pangalan ay 7,11b-dihydroindeno chromene-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Pangunahin nito ang mga nuclei ng mga cell, dahil mayaman sila sa mga nucleic acid. Maaari rin itong makintab ng mga inclusions ng cytoplasmic ng pinagmulan ng viral.

Upang ang hematoxylin ay mantsang, dapat itong nasa isang oxidized state at nakatali sa isang metal. Ang huli ay magsisilbi upang ayusin sa tisyu, iyon ay, ito ay kumikilos bilang isang mordant.

Kapag ang hematoxylin ay na-oxidized ito ay tinatawag na hematein. Ang oksihenasyon ay nakamit sa pamamagitan ng pagkakalantad sa oxygen (pagtanda) ng reagent o sa pamamagitan ng mga sangkap na makakatulong sa oksihenasyon (kemikal na oksihenasyon).

Eosin

Ang Eosin ay isang pangulay na namumula ng pula o kulay-rosas. Ito ay hindi matutunaw sa tubig bagaman mayroong bersyon na natutunaw ng tubig. Karaniwan, ang eosin ay inihanda sa pamamagitan ng pag-dissolve sa alkohol (95 ° ethanol).

Nagtataglay ito ng mga cytoplasma, mga fibre ng kalamnan, mga organopiya ng cytoplasmic, at collagen, ngunit hindi ito namantsahan ng cell nuclei. Ito ay dahil negatibong sisingilin, samakatuwid, mayroon itong isang pagkakaugnay sa mga positibong sisingilin na istruktura.

Mayroong dalawang uri ng eosin "Y" at "B". Ang Eosin "Y" ay kilala bilang dilaw na eosin. Ang pang-agham na pangalan nito ay tetrabromo fl uorescein at ang kemikal na formula ay C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

Sa kabilang banda, ang eosin "B" ay kung minsan ay tinatawag na bluish erythrosine B. Ang pang-agham na pangalan nito ay dibromodynitro fl uorescein at ang pormula ay C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Parehong magkapareho at ang pagkakaiba sa pagitan ng paggamit ng isa o iba pa ay hindi talaga napapansin. Gayunpaman, ang pinakasikat ay ang eosin "Y".

Ang Eosin ay may pag-aari ng pagkakaiba sa pagitan ng isang buhay na cell at isang patay, dahil ito ay may kakayahang tumawid sa lamad upang mantsahan ang cytoplasm nito kapag ang mga cell ay patay, naiiwan ang cytoplasm ng cell na walang kulay kung mananatiling buhay.

Aplikasyon

Paglamlam ng hibla ng hibla

Ang mga makapal na nerve fibers ay maaaring mantsang at makikilala sa hematoxylin-eosin. Gayunpaman, hindi ito kapaki-pakinabang para sa paglamlam ng manipis na mga nerve nerve, dahil ang isang paglamlam ng pilak ay kinakailangan upang mailarawan ang huli.

Mga mantsa ng seksyon ng balat

Sa paglamlam ng malibog na layer ng balat, ang pangulay na kumikilos ay eosin, dahil sa antas na ito ang mga cell ay walang nucleus.

Sa butil-butil na layer ng balat, ang hematoxylin ay mariing itinutuon ang mga keratohyalin na mga butil sa loob ng mga cell ng granule. Sa kabaligtaran, ang madulas na layer ng balat ay mahina na may mantsa ng hematoxylin, habang ang basal o germinal layer ay medyo may mantsa.

Ang mantsa ng Eosin ay ang cytoplasm ng lahat ng mga cell at ang intensity ng kulay ay maaaring magkakaiba-iba mula sa layer hanggang layer.

Hematoxylin-eosin paglamlam ng mga sample ng dumi

Ang Gómez et al., Noong 2005 ay nagpakita na ang paglamlam ng hematoxylin-eosin ay mas epektibo sa pagkilala sa mga kaso ng amoebiasis dahil sa Entamoeba histolytica at Entamoeba dispar kaysa sa sariwang pamamaraan ng pag-visualize (asin at lugol) sa mga pasyente na may talamak na diarrheal disease.

Naipakita rin ito na maging sensitibo sa pag-tiklop ng erythrophagocytosis (amoebae na nagbalot ng mga erythrocytes).

Pagpapanatili ng mga seksyon ng histological para sa diagnosis ng impeksyon

Walwyn et al., Noong 2004 iminungkahi ang paggamit ng mga static ng histological upang makita ang mga impeksyong sanhi ng mga microorganism.

Gamit ang paglamlam ng hematoxylin-eosin, nagawa nilang mailarawan ang mga impeksyong dulot ng Clostridium, Actinomyces, spirillae o Candida. Nagawa din nilang obserbahan ang pagkakaroon ng parasito na Sarcoptes escabiei sa mga seksyon ng balat at mga pagsasama ng viral sa pamamagitan ng cytomegalovirus at herpes sa mga seksyon ng iba't ibang mga tisyu.

Mga pamamaraan

Para sa mga sample ng histological

Ang paglamlam sa seksyon ng kasaysayan ay dumadaan sa isang serye ng mga hakbang. Ang unang bagay ay upang makuha ang seksyon ng kasaysayan. Ito ay dapat na maging waxed upang makuha ang paglaon (ultra-fine) na may isang microtome. Ang pamamaraan ay binubuo ng mga sumusunod na hakbang:

1-Pag-aalis ng labis na paraffin : para dito maaari mong gamitin ang xylol o Heme-D, isawsaw sa loob ng 3-5 minuto.

2-Pag-aalis ng tubig ng sample: ito ay nakamit sa pamamagitan ng paglulubog ng sample sa iba't ibang mga konsentrasyon ng mga alkohol (ethanol) sa pababang pagkakasunud-sunod (100 °, 90 °, 70 °). Sa lahat ng mga kaso para sa 7 minuto.

3-Pag-aalis ng labis na alkohol: para dito ito ay nalubog sa tubig sa loob ng 7 minuto.

4-Paglamlam na may hematoxylin: ang halimbawang ay nalubog para sa 6-10 minuto sa isang tray na naglalaman ng hematoxylin. Ang oras ng pagkakalantad ay nakasalalay sa laki at kapal ng sample.

5-Pag-aalis ng labis na hematoxylin: hugasan ito ng tubig ng 5 minuto at pagkatapos ay isang mabilis na daanan (10-20 segundo) ay isinasagawa sa pamamagitan ng alkohol na alkohol. Kalaunan ay hugasan muli ng tubig sa loob ng 5 minuto. Pagkatapos ay ito ay nalubog sa ethanol sa 96 ° para sa 1 minuto.

6-Paglamlam na may eosin: para dito, ang sample ay ibabad sa 5 minuto sa tray ng eosin.

7-Pag-aalis ng tubig ng sample : upang gawin ito, dumadaan ito sa mga tray ng alkohol (ethanol), ngunit sa oras na ito sa pataas na pagkakasunud-sunod. (70 °, 90 °, 100 °). (Para sa 5 segundo, 5 segundo, 1 minuto ayon sa pagkakabanggit).

8-Paglilinaw ng halimbawang : para dito, nakalantad ito sa xylol sa loob ng 5-10 minuto at pinatuyong upang mai-seal nang permanente sa Canada balsam o iba pang katulad na materyal.

Para sa mga sample ng dumi na hinahanap

Ang isang smear ay ginawa sa isang slide na may dumi ng pasyente at naayos na may 80% na alkohol sa loob ng 5 minuto. Ang sheet ay nalubog sa hematoxylin sa loob ng 5 minuto at agad na hugasan ng tubig.

Kasunod nito, mabilis itong isawsaw sa acidic na alkohol at pagkatapos ay sa tubig na ammonia. Ito ay hugasan ng tubig. May kulay ito ng 5 minuto sa eosin. Ang sample ay dehydrated tulad ng ipinaliwanag sa naunang sining at sa wakas ay napuno ng xylene.

Paghahanda ng reagents

- Hematoxylin

Sa isang litro ng distilled water ay natunaw ang 50 gramo ng potasa o ammonium aluminyo sulpate. Kapag ganap na natunaw, magdagdag ng 1 gramo ng crystallized hematoxylin. Kapag ganap na natunaw, ang 1 g ng sitriko acid ay idinagdag kasama ang 50 g ng chloral hydrate at 0.2 g ng sodium iodate.

Ang pinaghalong ay pinakuluang para sa 5 minuto, pagkatapos ay naiwan upang palamig at sinala upang alisin ang anumang solidong mga partikulo na naiwan. Ang reagent kaya inihanda ay maaaring magamit agad.

- Eosin

Maaari itong ihanda sa isang base sa alkohol o may isang base ng tubig.

Alkoholong eosin

Sa 100 ml ng ethanol sa 95 ° matunaw ang 0.5 gramo ng eosin "Y". Pagkatapos ay magdagdag ng ilang patak ng glacial acetic acid.

2% may tubig na eosin

Sa 1250 ml ng distilled water ay natunaw ang 25 gramo ng tubig na natutunaw na "Y". Pagkatapos ay magdagdag ng ilang patak ng glacial acetic acid.

Alak na asido

Sukatin ang 0.5 ml ng puro hydrochloric acid at gumawa ng hanggang sa 100 ML na may ganap na alkohol.

Ammonia tubig

Sukatin ang 0.5 ML ng puro na ammonia at gumawa ng hanggang sa 100 ML na may distilled water.

Mga Sanggunian

1. Navarrete, G. Kasaysayan ng balat. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Magagamit sa: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Pagkilala sa Entamoeba histolytica / E. Natutukoy sa pamamagitan ng sariwang pamamaraan ng amoeba kumpara sa paglamlam nito na may hematoxylin-eosin sa talamak na pagtatae. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Magagamit sa: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Paggamit ng mga teknolohiyang pamamaraan para sa pagsusuri ng impeksyon sa mga anatomical specimens. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Magagamit sa: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW Reagents. Hematoxylin-eosin mantsang. 2017, Spain. Magagamit sa: itwreagents.com
6. Eosin. Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 7 Nov 2018, 08:18 UTC. 4 Ago 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. "Hematoxylin." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 3 Mayo 2019, 11:23 UTC. 4 Ago 2019, 22:48 wikipedia.org