BHI AGAR: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang BHI agar o Brain Heart Infusion agar medium ay isang nakapagpapalusog na solidong kultura. Sa Espanyol tinutukoy namin ito bilang utak sa pagbubuhos ng utak. Ito ay isang di-pumipili na daluyan ng kultura, na nangangahulugang ang lahat ng mga uri ng Gram na positibo at negatibong bakterya ng Gram ay maaaring umunlad, pati na rin ang ilang mga lebadura at filamentous fungi.

Binubuo ito ng isang pagbubuhos ng utak at puso ng guya, peptic hydrolyzate mula sa mga tisyu ng hayop, pancreatic hydrolyzate ng casein, sodium chloride, glucose, disodium phosphate at agar.

Mga plaka ng BHI. Pinagmulan: Larawan na kinunan ng may-akda na si MSc. Marielsa Gil.

Dapat pansinin na ang BHI agar ay isa sa mga madalas na ginagamit na media media sa mga laboratoryo ng bacteriology. Maaari itong magamit nang walang mga suplemento bilang pangunahing kultura, subculture ng mga kolonya na nakuha sa iba pang napiling media o para sa pagpapanatili ng mga strain sa laboratoryo.

Sa kabilang banda, ito ay isang mainam na daluyan na gagamitin bilang isang batayan sa paghahanda ng enriched media, tulad ng agar agar at tsokolate. Parehong mainam para sa paghiwalayin ang hinihiling na mga microorganism mula sa isang nutritional point of view. Gayunpaman, dapat itong tandaan na dahil naglalaman ito ng glucose ay hindi angkop para sa pagmamasid sa mga pattern ng hemolysis.

Gayundin, ang BHI agar ay maaaring magamit para sa paghahanda ng mga espesyal na media para sa paghihiwalay ng mga mahirap na umunlad na mga pathogen microorganism sa karaniwang media, kasama sa mga ito: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae at Histoplasma capsulatum.

Gamit ang karagdagan sa antibiotic, ang BHI agar ay nagiging isang pumipili daluyan para sa paghihiwalay ng fungi.

Batayan

Ito ay isang medium na masustansiyang kultura upang ihiwalay ang moderately na hinihingi ang mga microorganism, at ang pagpapayaman nito ay maaaring dagdagan sa pagdaragdag ng dugo at iba pang mga suplemento sa nutrisyon.

Ito ay isang di-pumipili na daluyan ng kultura, samakatuwid pinapayagan ang paglaki ng karamihan sa Gram na positibo at negatibong bakterya ng Gram, pati na rin ang ilang mga fungi. Gayunpaman, maaari itong mapili sa pagdaragdag ng mga antibiotics.

Ang medium ay naglalaman ng pagbubuhos ng utak at puso ng guya, peptic hydrolyzate ng mga tisyu ng hayop at pancreatic hydrolyzate ng casein; Ang lahat ng mga compound na ito ay kumikilos bilang mga mapagkukunan ng mga bitamina, amino acid, nitrogen, at carbon.

Ang Glucose ay isang karbohidrat na nagbibigay ng enerhiya sa mga microorganism sa sandaling natapos nila ito. Samantala, ang sodium chloride at disodium phosphate ay nagpapanatili ng osmotic balanse at nagbibigay ng isang pH malapit sa neutralidad. Sa wakas, ang agar ay nagbibigay ng daluyan na solidong pare-pareho.

Paghahanda

Tumimbang ng 52 gramo ng dehydrated medium at matunaw sa isang litro ng distilled water. Dalhin ang pinaghalong sa isang mapagkukunan ng init hanggang sa kumukulo, pagpapakilos nang madalas sa proseso ng paglusaw.

Ang mga BHI agar plate o wedge ay maaaring ihanda nang walang mga additives.

Mga wedge

Para sa paghahanda ng mga wedge, maglingkod sa paghahanda hanggang sa kalahati ng bawat tubo ay napuno, takpan at isterilisado sa isang autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto, kapag umalis, maglatag sa isang base hanggang sa solidong ito. Mamaya mag-imbak sa ref hanggang sa gamitin.

Ang mga wedder ng BHI para sa bacterioteca. Pinagmulan: Larawan na kinunan ng may-akda na si MSc. Marielsa Gil.

Mga plate

Ang natunaw na halo ay autoclaved sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto, kapag iniwan ito, pinahihintulutan na palamig sa 50 ° C at 20 ml ng daluyan ay ihahain sa mga sterile pinggan. Pinapayagan silang magpapatibay, ibinalik at itago sa ref hanggang magamit. Payagan ang mga plate na dumating sa temperatura ng silid bago mag-seeding.

Ang pH ng daluyan ay dapat manatili sa 7.4 ± 0.2.

Ang raw medium ay beige na kulay at ang handa na daluyan ay light amber na kulay.

Paghahanda ng agar agar ng dugo

Matapos isterilisado ang daluyan, cool sa isang temperatura na humigit-kumulang na 45 hanggang 50 ° C, pagkatapos ay idagdag ang dugo (50 ml), ihalo nang malumanay sa homogenize, at aseptically maghatid ng 20 ML sa bawat ulam na Petri. Kung ang mga bula ay bumubuo sa plato, ang mas magaan na siga ay dapat na maipasa nang mabilis sa mga bula upang maalis ang mga ito.

Gayundin, ang mga espesyal na media ay maaaring ihanda sa pamamagitan ng pagdaragdag ng kaukulang mga additives kapag ang halo ay umabot sa temperatura na 45 hanggang 50 ° C.

Ang daluyan ay nananatiling kulay pula.

Aplikasyon

Gumamit nang walang mga pandagdag

Ang BHI agar na walang mga additives ay kapaki-pakinabang bilang isang pangunahing kultura at para sa paghahasik ng mga purong galay ng mababang o daluyan na hinihingi ang mga microorganism para sa kanilang kasunod na pagkakakilanlan.

Dahil ito ay isang medium na may kulay na ilaw, mainam para sa pagmamasid sa mga pigment at, dahil hindi ito naglalaman ng mga nakakasagabal na sangkap, ang ilang mga pagsubok sa biochemical, tulad ng oxidase at catalase, ay maaaring isagawa sa ito, o iba pang mga pagsubok na biochemical ay maaaring mai-mount mula sa mga kolonya mula rito agar.

Gayundin, ang BHI agar wedges ay malawakang ginagamit para sa pagpapanatili ng mga strain sa isang tiyak na oras sa laboratoryo (bacterioteca).

Ang mga plato o mga wedge na pinagmulan ng ibabaw na may mga bakterya na galaw ay natupok sa 37 ° C sa loob ng 24 hanggang 48 na oras. Samantala, sa fungi ang temperatura at oras ng pagpapapisa ng itlog ay depende sa uri ng fungus na hinahanap.

Bilang base agar para sa paghahanda ng iba pang media

Gamit ang batayang ito, maaaring maging handa ang enriched at selective media.

Nagpayaman

Ang pangunahing pagpapaandar nito ay upang magsilbi bilang batayan para sa paghahanda ng agar agar ng dugo para sa nakagawiang paggamit sa mga laboratoryo ng microbiology. Lalo na, ang base ng BHI ay naaayon sa paghihiwalay ng Streptococcus sp. Gayunpaman, mayroon itong disbentaha na hindi angkop para sa pagmamasid sa mga pattern ng hemolysis dahil naglalaman ito ng glucose.

Ginagamit din ito sa paghahanda ng kuneho o agar para sa dugo ng kabayo para sa paghihiwalay ng Haemophilus sp. Para sa pinakamahusay na mga resulta, maaaring dagdagan ang isang enrichment supplement (IsoVitaleX).

Kung ang mga sample ay nagmula sa respiratory tract, ang bacitracin ay maaaring idagdag sa agar upang mapigilan ang kasamang flora at dagdagan ang posibilidad na mabawi ang Haemophilus sp.

Bilang kahalili, ang agar agar ng dugo (kordero o tao) na may cystine tellurite ay maaaring ihanda upang ibukod ang Corynebacterium diphtheriae. Gayundin, ito ay kapaki-pakinabang upang maghanda ng kuneho dugo agar, kasama ang pagdaragdag ng cystine at glucose para sa paghihiwalay ng Francisella tularensis.

Ang pag-seeding ng mga plate para sa dugo ay ginagawa sa pamamagitan ng pagkapagod at nahumok sila sa 35-37 ° C para sa 24-48 na oras sa microaerophilicity (5-10% CO ₂ ).

Pinili

Ang daluyan na ito sa pagdaragdag ng mga antibiotics ay maaaring palitan ang Sabouraud agar para sa paghihiwalay ng fungi.

Ang kumbinasyon ng BHI agar na may chloramphenicol - gentamicin o penicillin -, ang streptomycin at dugo ng kabayo ay mainam para sa paghihiwalay ng Histoplasma capsulatum.

Depende sa microorganism na ihiwalay, ang pagpapapisa ng itlog sa 35-37 ° C o sa temperatura ng silid sa aerobiosis ay inirerekomenda. Minsan kinakailangan ang pagpapapisa ng itlog sa parehong mga saklaw ng temperatura, gamit ang 2 plate para dito.

Ang ilang mga fungi tulad ng Trichophyton mentagrophytes ay dapat na mapunan sa temperatura ng silid ng hanggang sa 7 araw.

QA

Mula sa bawat batch na inihanda, inirerekumenda na mag-incubate ng 1 plate o kalso sa 37 ° C para sa 24 na oras at i-verify na walang paglaki; Ito ay lalong mahalaga kapag naghahanda ng agar agar ng dugo, sapagkat ito ay isang madaling kontaminadong daluyan.

Sa kabilang banda, ang kalidad ng daluyan ay maaaring masuri sa pamamagitan ng inoculate na kilala o sertipikadong standard na mga strain at pagmamasid sa kanilang pag-unlad.

Sa kahulugan na ito, upang suriin ang BHI agar nang walang mga additives, ang mga strain ng Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 o Candida albicans ATCC 10231 ay maaaring magamit.May incubated sila sa 37 ° C sa aerobiosis sa loob ng 24 hanggang 48 na oras. Sa lahat ng mga kaso, inaasahan ang kasiya-siyang paglago.

Ang mga Strains ng Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, o Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 ay maaaring punla upang suriin ang mga agar agar plate ng dugo.

Ang mga bakterya ng bakterya ay natupok sa 37 ° C sa microaerophilicity sa loob ng 24 na oras, habang ang fungus ay natubuan sa temperatura ng silid sa isang kahalumigmigan na silid hanggang sa 7 araw. Inaasahan ang kasiya-siyang paglago sa lahat ng mga kaso.

Mga Sanggunian

1. Britannia Laboratories. Agar sa Infusion ng Brain ng Brain. 2015. Magagamit sa: britanialab.com.
2. Mga Laboratoryo ng BD. Utak sa Brain ng Brain (BHI) Agar. 2013.Magagamit sa: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
4. Laboratory ng Neogen. Agar sa Infusion ng Brain ng Brain. Magagamit sa: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Dugo agar: pundasyon, gamit at paghahanda. 2018.Magagamit sa: lifeder.com.
6. Mga nag-aambag sa Wikipedia. Pagbubuhos ng utak sa utak. Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. Setyembre 19, 2018, 03:58 UTC. Magagamit sa: wikipedia.org. Na-access Marso 2, 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.