Ang agar BIGGY ay isang solidong medium na pumipili at kaugalian na kultura. Ito ay dinisenyo upang ibukod at tulungan sa pagkilala sa pangunahing species ng Candida. Ang pangalan nito BIGGY ay nagmula sa acronym sa English Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Ang orihinal na pormula ay nilikha ni Nickerson, na ang dahilan kung bakit ang daluyan na ito ay kilala rin bilang Nickerson agar. Sa kasalukuyan ay binubuo ito ng yeast extract, glycine, dextrose, ammonium citrate, bismuth citrate, sodium sulphite at agar.
Graphic na representasyon ng BIGGY agar. Pinagmulan: Flickr.com
BIGGY agar ay nabalangkas para sa pagkita ng kaibhan ng mga species Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei at C. kefyr, ngunit ang iba pang mga species ay lumalaki din tulad ng Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum at Saccharomyces cerevisiae.
Mayroon itong magandang sensitivity at pagtutukoy, gayunpaman, kung ihahambing sa iba pang media na may katulad na pag-andar, nasa pangalawang lugar ito, na nalampasan ng CHROMagar. Para sa kadahilanang ito, ginusto ng maraming mga laboratoryo ang huli, bagaman mas mahal ito.
Dapat malinaw na ang paggamit ng BIGGY agar, pati na rin ang iba pang magkatulad na paraan, ay nakakatulong sa isang mabilis na pagkilala sa pagkilala, ngunit hindi nagpapatunay. Samakatuwid, dapat makuha ang mga karagdagang pamamaraan sa pagkakakilanlan; halimbawa, ang mga sistema ng pagkilala sa Vitek 32 at API 20.
Batayan
Ang BiGGY agar ay itinuturing na isang bahagyang pumipili daluyan para sa paghihiwalay ng mga lebadura, lalo na ng genus Candida, kahit na ang iba pang mga genera ay maaaring lumago.
Ito rin ay isang daluyan ng pagkakaiba-iba dahil depende sa mga species na kasangkot, magkakaibang mga katangian ang masusunod sa mga tuntunin ng hitsura, kulay, hugis at laki. Ito ay itinuturing na isang chromogen medium, dahil sa pag-unlad ng iba't ibang kulay sa mga kolonya.
Ang kulay ng mga kolonya ng lebadura ay dahil sa pagkakaroon ng bismuth sulfite sa agar. Napagtanto ni Nickerson na ang mga lebadura ng genus na Candida ay nagsasagawa ng isang extracellular na pagbawas ng bismuth sulfite, na binabago ito ng bismuth sulfide (isang hindi matutunaw na itim na sangkap). Nagreresulta ito sa murang kayumanggi hanggang sa itim na kolonya.
Ang agar na ito ay naglalaman ng yeast extract at dextrose, na nagbibigay ng mapagkukunan ng mga pangunahing sustansya at enerhiya para sa pagbuo ng lebadura. Ang Glycine ay isang pampalubag ng paglago ng lebadura, habang pinipigilan ang paglaki ng ilang mga bakterya.
Sa parehong kahulugan, ang ammonium at bismuth citrate, pati na rin ang sodium sulfite na kumikilos bilang mga inhibitor ng paglago ng bakterya. Ang Agar ay ang ahente na nagbibigay ng medium solid consistency.
Paghahanda
Tumimbang ng 45 g ng dehydrated medium medium at matunaw sa isang litro ng distilled water. Iling at painitin ang pinaghalong, kumukulo ng 1 minuto hanggang sa kumpletong pagkabulok. Ang medium medium na ito ay hindi mai-autoclavable.
Sa paglamig ng humigit-kumulang na 45 ° C sa isang paliguan ng tubig, ibuhos ang 20 ml papunta sa sterile pinggan Petri.
Ang kulay ng dehydrated medium ay madilaw-dilaw na kulay-abo at handa ay isang madilaw-dilaw na puting gel, kung saan maaaring sundin ang isang bahagyang pag-flocculating precipitate.
Ang pH ay dapat na 6.8 ± 0.2.
Ang handa na daluyan ay dapat na naka-imbak sa isang ref (4 ° C) at protektado mula sa ilaw. Dahil ito ay isang daluyan na hindi ma-autoclaved, dapat itong magamit sa lalong madaling panahon. Inirerekomenda ang paggamit nito bago ang 3 araw pagkatapos ng paghahanda nito.
Gumamit
Ang mga plato ay natupok sa temperatura ng silid (25 ° C) sa loob ng 24, 48 at 72 na oras, at ang oras ng pagpapapisa ng itlog ay maaaring pahabain ng hanggang sa 5 araw.
Ang bawat species ng Candida ay nagkakaroon ng ilang mga katangian na nagpapakilala sa isa't isa. Ang mga tagagawa ng daluyan ay naglalarawan ng mga sumusunod na katangian para sa bawat species:
-Candida albicans complex: bubuo sa agar na ito bilang makinis, bilog, kayumanggi o itim na kolonya, na may isang bahagyang hangganan ng mycelial. Sa pagbubukod na ang madilim na kulay ay hindi nagkakalat sa gitna.
-Candida tropicalis: maliwanag, maliit, madilim na kayumanggi na kolonya na may itim na sentro at isang bahagyang hangganan ng myrraial. Ang madilim na kulay ay nagkakalat patungo sa gitna, isang katangian na pangkaraniwan sa species na ito, matapos na ma-incubated sa loob ng 72 oras.
-Candida krusei bubuo ng malaki, flat, magaspang na mukhang kolonya na may kayumanggi hanggang sa maitim na hangganan.
-Candida parakrusei: medium-sized na kolonya, karamihan sa oras magaspang, flat. Ang kulay ay maaaring mag-iba mula sa maliwanag na madilim na mapula-pula kayumanggi hanggang sa mapula-pula na kayumanggi. Ang hangganan ng mga kolonya ay may malawak, madilaw na mycelium.
-Candida stellatoidea: bubuo ng medium, flat colonies, madilim na kayumanggi, halos itim. Ang aking pag-unlad ng maliliit ay napakahirap.
Ang isang pag-aaral na isinagawa nina Yücesoy at Marol noong 2003, ay nagpakita na ang daluyan ng CHROMagar ay may mas mahusay na pagkasensitibo at pagtukoy para sa pagkita at pagkilala sa iba't ibang species ng Candida kaysa sa BIGGY agar.
QA
Para sa control ng sterility, ang mga walang plate na plate ay natupok sa 25 ° C, sa dilim sa loob ng 24 hanggang 48 na oras, inaasahan na walang paglaki ng anumang uri, o pagbabago ng kulay.
Ang ATCC strains na inirerekomenda para sa kalidad ng kontrol ng daluyan ay:
Candida albicans ATCC 60193 complex, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Sa lahat ng mga ito ay inaasahan ang paglago tulad ng inilarawan sa itaas.
Ang mga sumusunod na mga galaw ay maaari ding magamit:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 at Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Sa unang dalawa, inaasahan ang kabuuang pagsugpo, ngunit kung sakaling bahagyang lumalaki ang mga kolonya ay magiging kulay ng cream.
Sa kaso ng S. aureus, inaasahan na lubos na mapigilan, ngunit kung lumalaki ito nang bahagya, ang mga kolonya nito ay puti.
Mga Limitasyon
Ang ilang mga bakterya ay may kakayahang lumaki sa daluyan na ito at maaari ring maging madilim ang kulay, gayahin ang isang kolonya ng Candida, ngunit kapag ang smearing ang kolonya at pagmasid ito sa ilalim ng isang mikroskopyo, madaling itatapon.
Talahanayan: Mga katangian ng mga kolonya ng ilang mga lebadura sa BIGGY agar ayon sa gawain nina Yücesoy M at Marol S.
Pinagmulan: Yücesoy M, Marol S. Pagganap ng CHROMAGAR candida at BIGGY agar para sa pagkilala sa mga lebadura. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Mga Sanggunian
- Yücesoy M, Marol S. Pagganap ng CHROMAGAR candida at BIGGY agar para sa pagkilala ng mga lebadura. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Teknikal na Sheet ng Data MALIGING Agar. Magagamit sa: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Magagamit sa: foodsafety.neogen.com
- Mga Laboratories ng Conda. BIGGY agar. Magagamit sa: condalab.com
- Mga Laboratoryo ng BD. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine yeast Agar). 2011.Magagamit sa: bd.com