BILE ESCULIN AGAR: MAKATUWIRAN, PAGHAHANDA, AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang bile esculin agar ay isang pumipili at kaugalian medium solid culture. Ginagamit ito bilang isang diagnostic test upang matukoy ang kakayahan ng isang tiyak na microorganism na lumago sa isang daluyan na naglalaman ng apdo at pinapabagsak din ang glucoside esculin sa esculetin at glucose.

Ang diagnostic test na ito ay ginagamit upang magkakaibang mga species ng genus Streptococcus na kabilang sa pangkat D (bile esculin positibo), mula sa iba pang mga pangkat ng Streptococcus na negatibo sa reaksyon sa pagsubok na ito.

Bile esculin agar plate, binhing may Enterococcus strain (pagsubok na positibo). Pinagmulan: Walang ibinigay na may-akda na nababasa ng makina. Ipinagpalagay ni Philippinjl (batay sa mga paghahabol sa copyright).

Dapat pansinin na ang ilang Streptococci ng grupong viridans ay maaaring mag-hydrolyze ng esculin, ngunit hindi sila may kakayahang lumaki sa pagkakaroon ng apdo sa isang konsentrasyon ng 40%, samakatuwid, sa daluyan na ito ang reaksyon para sa pangkat na ito ay negatibo.

Sa kabilang banda, ang medium ng bile esculin ay kapaki-pakinabang din para sa pagsusuri ng Listeria monocytogenes o Aerococcus sp species, dahil ang mga microorganism na ito ay positibo sa apdo esculin.

Ang Esculin Bile Agar ay binubuo ng peptone, extract ng karne, bile ng baka, esculin, iron citrate, agar at distilled water. Ang ilang mga komersyal na bahay ay kinabibilangan ng sodium azide sa loob ng komposisyon ng daluyan.

Ang daluyan ay maaaring ihanda sa laboratoryo kung mayroon kang lahat ng mga compound nang hiwalay o maaari itong maghanda mula sa komersyal na dehydrated medium.

Batayan

Ang dile esculin medium ay naglalaman ng mga peptones at katas ng karne, ang parehong mga compound ay nagbibigay ng kinakailangang mga nutrisyon para sa paglaki ng mga microorganism.

Naglalaman din ito ng esculin; Ang tambalang ito ay isang glycoside na nabuo ng unyon ng isang simpleng monosaccharide (glucose) na may isang tambalang tinawag na 6,7-dihydroxycoumarin o esculetin (aglucone), na naka-link sa pamamagitan ng isang acetal o glucosidic bond.

Ang pagsubok ay batay sa pagpapakita kung ang mga bakterya ay may kakayahang mag-hydrolyzing esculin. Kung nangyari ito, ang esculin ay bumabagsak sa esculetin at glucose. Ang reaksyon ni Esculetina sa iron na naroroon sa daluyan, na bumubuo ng isang madilim na kayumanggi, halos itim na tambalan.

Nangangahulugan ito na ang ferric citrate ay kumikilos bilang isang developer ng reaksyon. Ang katangian na ito ay gumagawa ng Bile Esculin Agar isang medium medium.

Para sa bahagi nito, ang apdo ay isang inhibitor na pinipigilan ang paglaki ng ilang mga microorganism, samakatuwid, ang bakterya, bago paghatiin ang esculin, ay dapat na lumago sa pagkakaroon ng apdo. Samakatuwid, ang daluyan na ito ay itinuturing na pumipili.

Ang bakterya na maaaring umunlad sa kapaligiran na ito ay pangunahin sa mga nakatira sa kapaligiran ng bituka.

Sa kahulugan na ito, ang ilang mga komersyal na kumpanya ay nagdaragdag ng sodium azide sa daluyan upang higit na mapigilan ang paglaki ng negatibong bacam ng negatibong Gram, na pinatataas ang pagpili ng daluyan para sa paglago ng Streptococcus.

Sa wakas, ang agar ay nagbibigay ng solidong pare-pareho sa medium at tubig ay ang solvent ng mga compound.

Paghahanda

Paghahanda ng gawang bahay ng bile esculin agar

Timbangin:

5 g peptones

3 g ng katas ng karne

40 g baka ng baka

1 g ng esculin

0.5 g ng bakal na citrate

15 g agar

1000 ml ng distilled water

Sa kaso ng pagdaragdag ng sodium azide, ang 0.25 g / litro ay timbang at idinagdag sa halo.

I-dissolve ang mga sangkap sa litro ng distilled water, init hanggang sa ganap na matunaw ang mga compound. Ipamahagi ang 5 ml sa 16 x 125 mm na mga tubo ng pagsubok sa takip. Ang Autoclave sa 121 ° C, 15 pounds ng presyon para sa 15 minuto.

Alisin mula sa autoclave at ikiling ang mga tubo sa isang suporta, upang ang agar ay matatag sa isang malawak na tuka ng plauta.

Pagtabi sa isang refrigerator hanggang sa gamitin. Dalhin sa temperatura ng silid bago ang paghahasik.

Maaari ding ihanda ang mga plato esculin agar plate; sa kasong ito, ang buong halo ay autoclaved sa isang basahan at kasunod na ipinamamahagi sa mga sterile pinggan. Hayaang patatagin sila at mag-imbak sa refrigerator.

Ang pH ng daluyan ay dapat na 6.6 ± 0.2.

Paghahanda ng bile esculin agar mula sa isang komersyal na daluyan

Timbangin ang halagang tinukoy ng insert. Maaari itong mag-iba mula sa isang bahay ng negosyo patungo sa isa pa. Kasunod nito, magpatuloy sa katulad ng ipinaliwanag sa pamamaraan.

Ang pH ng daluyan ay dapat na 6.6 ± 0.2. Ang kulay ng dehydrated medium ay light beige at ang handa na daluyan ay madilim na amber.

Daluyan ng apdo ng komersyal na apdo. Pinagmulan: Larawan na kinunan ng may-akda na si MSc. Marielsa Gil.

Aplikasyon

Ang bile esculin medium ay pangunahing ginagamit upang maibahin ang Group D Streptococcus (bile esculin positibo), mula sa natitirang mga pangkat ng Streptococcus (bile esculin negatibo).

Sa pamamagitan ng pagsasama ng pagsubok ng paglago ng sabaw ng hypersalted sa pagsubok ng bile esculin, maaaring makilala ang isang espesyal na pangkat ng pangkat na D Streptococcus na tinatawag na Enterococcus.

Ang espesyal na grupong ito ng Streptococcus ay kabilang sa pangkat D ng nabanggit na genus at may kakayahang mag-hydrolyzing esculin sa pagkakaroon ng apdo tulad ng ginagawa ng iba pang mga miyembro ng pangkat D, ngunit sila ay may kakayahang umunlad din sa isang hypersalted medium (BHI na may klorido ng 6.5% sodium), isang pag-aari na gumagawa ng pagkakaiba.

Samakatuwid, ang Streptococci na nag-hydrolyze ng esculin bile ngunit hindi lumalaki sa hypersalted na sabaw ay tinatawag na non-enterococci Group D Streptococci.

Sown

Inoculate ang medium mas mabuti mula sa isang purong Todd-Hewitt 24 na sabaw.

Magdagdag ng 2 patak sa ibabaw ng daluyan na may isang Pasteur pipette at kumalat sa medium na may isang platinum loop.

Mag-incubate sa 35 ° C sa loob ng 48 oras, habang natutugunan ang oras ng pagpapapisa ng itlog, maaari itong masubaybayan upang makita kung mayroong positibong reaksyon. Kung sa pagtatapos ng oras ay nananatiling negatibo ang reaksyon, maaari itong mai-incubated hanggang sa 72 oras.

Pagbibigay kahulugan

Positibong reaksyon : paglitaw ng isang madilim na kayumanggi, halos itim na kulay sa tela ng plauta (sa kaso ng pagsubok ng tubo) o pag-blackening ng agar sa paligid ng mga kolonya (sa kaso ng pagsubok sa plato).

Negatibong reaksyon : walang pagdidilim ng daluyan ang nangyayari o mayroong isang itim na hitsura sa mas mababa sa kalahati ng tubo pagkatapos ng 72 oras ng pagpapapisa ng itlog. Sa kabilang banda, ang paglaki ng bakterya sa daluyan nang walang hitsura ng itim na kulay ay dapat isaalang-alang ng isang negatibong pagsubok.

QA

Upang masuri ang kalidad ng daluyan, ang isang Enterococcus faecalis ATCC 29212 strain ay dapat na magamit bilang isang positibong kontrol at isang Streptococcus na pilay na hindi kabilang sa pangkat D bilang isang negatibong kontrol.

Mga Limitasyon

-Media na hindi naglalaman ng sodium azide ay pinahihintulutan ang paglaki ng mga negatibong bacam na negatibong Gram. Ang ilan sa kanila ay maaaring maitim ang gitna.

- Ang ilang mga komersyal na bahay ay nagdaragdag ng mababang konsentrasyon ng apdo (10%) at sa kadahilanang ito ang ilang Streptococcus na hindi kabilang sa pangkat D ay maaaring bumuo sa medium at hydrolyze esculin, na maaaring makabuo ng mga pagkakamali sa interpretasyon.

Mga Sanggunian

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Mga pagsubok sa biochemical para sa pagkilala ng mga bakterya na kahalagahan ng klinikal. 3rd ed. Editoryal Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Lab. Britannia. Esculin apdo na may azide agar. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 22 Ago 2017, 17:30 UTC. 22 Abr 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015.Magagamit sa: bd.com
7. Neogen Laboratories. Bile esculin agar. Magagamit sa: foodsafety.neogen.com