CHOCOLATE AGAR: BATAYAN, GAMIT AT PAGHAHANDA - BIOLOGY - 2025

Ang agar para sa tsokolate ay isang solidong daluyan ng kultura, pinayaman, hindi pumipili at di - pagkakaiba. Ginagamit ito lalo na para sa paghihiwalay ng mga microorganism na hinihingi mula sa nutritional point of view, kahit na ang anumang uri ng bakterya ay maaaring lumago dito.

Para sa kadahilanang ito, ang pagiging kapaki-pakinabang nito ay nagdaragdag lalo na sa pag-aanak ng mga sample na normal na sterile, tulad ng CSF at magkasanib na likido. Kahit na kasama rin ito sa loob ng napiling paraan para sa paghahasik ng mga sample ng polymicrobial, ngunit sa mga kasong ito kinakailangan upang magdagdag ng mga antibiotics na pumipigil sa magkakasunod na flora.

Chocolate agar na may paglaki ng bakterya

Ang daluyan na ito ay may katangian na kulay ng kayumanggi na katulad ng tsokolate, samakatuwid ang pangalan nito. Ang paghahanda ay halos kapareho ng dugo agar, sa kasong ito ang dugo ay dapat na pinainit upang ang mga pulang selula ng dugo ay masira.

Ang paghahanda nito, tulad ng agar agar ng dugo, ay napaka maselan, dahil madali itong nahawahan. Para sa kadahilanang ito, ginusto ng maraming mga laboratories na makuha ang medium na ito na inihanda ng mga komersyal na kumpanya na ginagarantiyahan ang kalidad nito.

Batayan

Ang daluyan na ito ay binubuo ng isang base na may nutrisyon na mayaman sa nutrisyon at pinainit na dugo. Ang hemolysis ng mga pulang selula ng dugo ay nagbibigay ng kadahilanan X (hemin) at factor V (NAD), kinakailangan para sa paglaki ng ilang mga microorganism, tulad ng genus Haemophilus. Kapaki-pakinabang din ito para sa paghihiwalay ng Neisserias sp.

Tulad ng dugo agar, iba't ibang media ang maaaring magamit bilang base agar depende sa pangangailangan. Kabilang sa mga media na ginamit ay ang pagbubuhos ng utak sa puso at trypticase soy agar, bagaman ang pinapayong inirerekumenda ay ang Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar at Thayer Martin agar.

Ang ilang mga variant ng agar para sa tsokolate ay kinabibilangan ng isang komersyal na magagamit na pinatibay na suplemento na tinatawag na Isovitalex o Polivitex.

Ang mga suplemento na ito ay naglalaman ng bitamina B ₁₂ , L-glutamine, adenine, guanine hydrochloride, p-aminobenzoic acid, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), thiamine pyrophosphate, ferric nitrate, thiamine hydrochloride, cysteine ​​hydrochloride, L-cystine, at glucose.

Mahalagang tandaan na ang agar para sa tsokolate ay mas mayaman kaysa sa agar agar ng dugo, ngunit hindi pinapayagan ang pagmamasid sa mga pattern ng hemolysis.

Aplikasyon

Pinagmulan: pixnio.com. May-akda:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Inihanda ang Chocolate agar with Columbia agar

Ang daluyan na ito ay naglalaman ng pancreatic digest ng casein at puso, peptic digest ng karne, sodium chloride, agar, yeast extract at cornstarch. Mayaman din ito sa mga bitamina, mineral at mahahalagang amino acid.

Ang pinainit na base ng dugo ay mainam para sa paghihiwalay ng mga bakterya ng genus Neisseria. Sa kabilang banda, kung ang isang suplemento para sa Brucella ay idinagdag din sa medium, ang nabanggit na microorganism ay maaaring ihiwalay. Ang mga resulta ay pinabuting gamit ang dugo ng kabayo.

Chocolate agar na inihanda gamit ang GC base agar (para sa gonococci)

Ang daluyan na ito ay naglalaman ng mga peptones, cornstarch, monobasic at dibasic buffers, sodium chloride, at agar.

Karamihan sa mga komersyal na inihanda na tsokolate para sa mga presentasyon ay kasama ang batayang ito at hindi naglalaman ng pinainit na dugo, ngunit sa halip isang synthetic halo ng hemin at isang kemikal na suplemento ng mga kadahilanan ng paglago, bitamina, mineral, amino acid, factor V, at glucose.

Inihanda ang Chocolate agar with Müeller Hinton agar

Ginagamit ito upang subukan para sa antimicrobial pagkamaramdamin ng mabilis na microorganism, tulad ng Streptococcus pneumoniae gamit ang 5% pinainit na tupa ng dugo.

Ginagamit din ito para sa pangunahing paghihiwalay ng Neisserias at Haemophilus, ngunit sa partikular na kaso ng paghihiwalay ng Haemophilus, ang paggamit ng dugo ng kabayo ay ginustong, dahil ito ay isang mayamang mapagkukunan ng kadahilanan X at V.

Sa kabilang banda, kung ang sample na itinanim ay nagmula sa isang di-mabubuong lugar, inirerekumenda ang pagdaragdag ng mga antibiotics upang mapigilan ang normal na flora ng lugar.

Halimbawa para sa mga sample ng paghinga kung saan ang pagkakaroon ng bakterya ng genus Haemophilus ay pinaghihinalaang, ang bacitracin ay ginagamit upang mapigilan ang paglaki ng Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus at saprophytic Neisserias.

Sa kaso ng mga halimbawa ng genital chancre, kung saan pinaghihinalaang ang Haemophilus ducreyi, ang isang agar para sa tsokolate na inihanda tulad ng mga sumusunod ay matagumpay na ginamit: Müeller - Hinton agar na may 5% tsokolate na dugo ng kabayo, 1% Isovitalex enrichment at 3 µg / ml vancomycin.

Chocolate agar na inihanda sa Thayer Martin agar

Ang daluyan na ito ay espesyal para sa paghihiwalay ng Neisseria gonorrhoeae. Dapat itong maglaman ng antibiotics upang mapigilan ang kasamang flora. Ginagamit ang dugo ng kordero.

Paghahanda

Dapat mong makita ang mga indikasyon para sa paghahanda ng base agar na gagamitin. Ang mga ito ay matatagpuan sa likod ng lalagyan ng dehydrated medium. Karaniwan nilang inilarawan kung magkano ang dapat mong timbangin upang maghanda ng isang litro ng daluyan ng kultura.

Ang eksaktong dami na kinakailangan ay maaaring ihanda sa laboratoryo, maaari itong higit o mas mababa sa isang litro.

Pagkalkula

Ang isang patakaran ng tatlo ay ginagamit upang makalkula kung magkano ang timbangin upang ihanda ang nais na dami. Halimbawa:

Kung para sa 1 litro kinakailangan na timbangin ang 40 gr at ang laboratoryo ay nangangailangan ng 800 ml, sinasabing:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml ----------- - X

Ang pormula ay ang mga sumusunod:

X = 32 gr (dami na timbangin para sa 800 ml).

Timbang at matunaw

Ang kinakailangang dami ay tinimbang at inilagay sa isang basahan ng tubig.

Init sa ibabaw ng katamtamang init at ihalo nang malumanay sa rotary na paggalaw hanggang sa ang dehydrated medium ay ganap na natunaw, na pinapayagan itong kumulo ng 1 minuto.

Sterilize

Ang flask ay inilalagay sa autoclave upang i-sterilize ang medium sa 121 ° C sa loob ng 20 minuto.

Ang pagsasama-sama ng dugo

Kapag umalis sa autoclave, pinapayagan itong tumayo hanggang ang temperatura ng daluyan ay humigit-kumulang sa pagitan ng 56 hanggang 70 ° C upang ilagay ang dugo at ihalo hanggang sa maging medium ang brown.

Kung nagdaragdag ka ng mga pandagdag, ito ang oras upang gawin ito. Kasunod nito ihalo at maghatid ng 20 ml sa bawat sterile pinggan Petri.

Ang buong pamamaraan ay dapat gawin sa isang laminar flow hood o sa paligid ng Bunsen burner.

Hayaang tumayo hanggang mapapatibay nila at mag-imbak ng baligtad sa refrigerator.

Ang isa pang paraan upang maghanda ng agar para sa tsokolate nang hindi gumagamit ng dugo

Ang base medium ay inihanda tulad ng inilarawan sa itaas, ang komersyal na nakuha na nakatuon na hemoglobin ay natunaw at isterilisado sa autoclave.

Ang parehong mga solusyon ay pinapayagan na palamig sa 50 ° C, ay sumali at idinagdag ang karagdagan. Paghaluin sa ilalim ng mga kondisyon ng aseptiko at pagkatapos ay maglingkod sa mga sterile pinggan Petri.

QA

Mahalaga na ang dugo ay nakalagay sa ipinahiwatig na temperatura, dahil ito ang mainam na ihiga ang mga pulang selula ng dugo at sa parehong oras mapanatili ang kadahilanan V, na sensitibo sa init.

Walang mga bula ang dapat manatili sa ibabaw ng agar. Mula sa bawat batch na 100 plate, ang isa o dalawang plate ay dapat na ma-incubated sa oven sa 37 ° C para sa 24 na oras upang mapatunayan ang kanilang tibay.

Para sa pinakamahusay na mga resulta, ang agar para sa tsokolate ay dapat gamitin sa ilang sandali pagkatapos ng paghahanda.

Ang kontrol sa mga bakterya ng bakterya ay dapat na itago sa laboratoryo upang masuri ang pagiging epektibo ng sariwang daluyan para sa paglaki ng pangunahing mabilis na microorganismo ng klinikal na kahalagahan.

Mga Sanggunian

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktikal na klinikal na microbiology. Unibersidad ng Cadiz, ika-2 edisyon. Serbisyo sa Publication ng UCA.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Argentina. Editoryal Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. (Ika-5 ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Kakayahang magamit ang daluyan ng kultura ng batayang GC-Biocen Agar sa Microbiology Laboratory. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Magagamit sa: scielo.sld.
5. Mga nag-aambag sa Wikipedia. Chocolate agar. Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. Disyembre 17, 2018, 19:54 UTC. Magagamit sa: en.wikipedia.org.