CLED AGAR: MAKATUWIRAN, GAMIT, AT PAGHAHANDA - BIOLOGY - 2025

Ang CLED agar (Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient) ay isang solidong medium medium na kaugalian, na ginagamit para sa diagnosis ng mga impeksyon sa ihi. Ang komposisyon ng medium medium ay idinisenyo para sa mahusay na paglaki ng mga pathogen ng ihi at mainam para sa dami ng mga yunit na bumubuo ng kolonya (CFU).

Ang medium na kultura ng CLED ay hindi pumipili, dahil negatibo ang Gram at positibong mga mikroorganismo ng Gram. Ngunit hindi ito isang problema, dahil ang karamihan sa mga UTI ay sanhi ng isang uri lamang ng microorganism.

CLED agar

Sa kaso ng mga impeksyong polymicrobial, maaaring makuha ang 2 o 3 iba't ibang mga bakterya, ngunit napakabihirang ito at karamihan sa oras ay nahawahan ang mga sample.

Kabilang sa mga negatibong bakterya ng Gram na maaaring lumaki sa daluyan na ito ay ang bacilli na kabilang sa pamilyang Enterobacteriaceae at iba pang mga bacic na enteric, ang mga uropathogens na madalas na ihiwalay sa mga sample ng ihi na ang mga sumusunod: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, bukod sa iba pa.

Gayundin, sa mga positibong bakterya ng Gram na maaaring lumaki sa daluyan na ito ay ang Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp at kahit na mga lebadura, tulad ng komplikadong Candida albicans, maaaring tumubo.

Gayunpaman, dahil sa kemikal na komposisyon ng daluyan, hindi pinapayagan ang paglaki ng ilang hinihingi na genogourinary pathogens, tulad ng Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, bukod sa iba pa.

CLED Agar Rationale

Ang medium ng kultura ng CLED ay may katas ng karne, pancreatic hydrolyzate ng casein at hydrolyzate ng gelatin bilang isang mapagkukunan ng enerhiya. Nagbibigay sila ng mga sustansya para sa pagpapaunlad ng mga undemanding bacteria.

Naglalaman din ito ng cystine, isang amino acid na nagbibigay-daan sa paglaki ng mga coliform, na nakikilala sa pamamagitan ng kanilang maliit na sukat.

Gayundin, naglalaman ito ng lactose bilang isang fermentable na karbohidrat, dahil sa kadahilanang ito ay ang pagkakaiba-iba; kakayahang makilala ang mga fermenting na bakterya sa non-lactose fermenting.

Ang Fermenting bacteria ay nagdudulot ng pH ng daluyan dahil sa paggawa ng mga acid, pagbuo ng mga dilaw na kolonya, habang ang mga bakterya na hindi nag-ferment ay hindi nakakagawa ng mga pagbabago sa daluyan, samakatuwid ay kinukuha nila ang kulay ng orihinal na agar, berde.

Ang reaksyon ng pagbuburo ay ipinahayag salamat sa pagkakaroon ng tagapagpahiwatig ng pH, na sa daluyan na ito ay bromothymol asul.

Sa kabilang banda, ang mababang konsentrasyon ng electrolyte ng daluyan ay pumipigil sa tipikal na nagsasalakay na paglaki ng genus na Proteus, na tinatawag na epekto ng swarming. Nagbubuo ito ng isang kalamangan sa iba pang media, dahil pinapayagan nito ang pagbibilang ng CFU, kabilang ang kung ang genus ng Proteus.

Gayunpaman, ang mababang konsentrasyon ng mga electrolyte ay pumipigil sa paglaki ng ilang mga species ng genus Shigella, ito ay isang kawalan kumpara sa iba pang media.

Rationale para sa CLED agar (Bevis)

Mayroong isang variant o pagbabago ng daluyan na ito na ginawa ni Bevis, na isinama ang acid fuchsin (tagapagpahiwatig ng Andrade) sa orihinal na komposisyon. Gumagana ito kasabay ng bromothymol asul upang maiba-iba ang pagbuburo mula sa mga di-pagbuburo na bakterya.

Ang pagkakaiba sa pagitan ng maginoo at nabagong daluyan ay ang kulay na kinukuha ng mga kolonya. Sa kaso ng bakterya ng lactose-fermenting, ang mga kolonya ay namumula-pula-orange na may isang kulay-rosas o pulang halo, habang ang mga di-pagbuburo ay mga mala-bughaw na kulay-abo.

Aplikasyon

Ang CLED agar ay ginagamit ng eksklusibo para sa pag-aanak ng mga sample ng ihi. Ang paggamit ng daluyan na ito ay lalong madalas sa mga laboratoryo sa Europa, habang sa Amerika ito ay hindi gaanong ginagamit.

Ang mga sample na koleksyon ay dapat matugunan ang ilang mga parameter upang makakuha ng maaasahang mga resulta, kabilang ang:

• Huwag uminom ng antibiotics bago mag-sampol.
• Mas pinipili ang unang bagay sa ihi sa umaga, dahil mas puro, kapag hindi posible na kunin ang sample sa pamamagitan ng nagsasalakay na mga pamamaraan.
• Hugasan nang mabuti ang maselang bahagi ng katawan bago kumuha ng sample.
• Itapon ang unang stream ng pag-ihi at pagkatapos ay ilagay ang lalagyan.
• Kolektahin ang 25 hanggang 30 ml ng ihi sa isang mahusay na may label na sterile container.
• Dumaan kaagad sa laboratoryo na napapaligiran ng yelo.
• Dapat itong maproseso sa loob ng 2 oras na isyu o palamig sa 4 ° C para sa maximum na 24 na oras.

Pagkuha ng mga sample ng ihi

Ang sample ng ihi ay dapat na diluted 1:50.

Para sa pagbabanto, ilagay ang 0.5 ml ng ihi ng pasyente at palabnawin ang 24.5 ml ng sterile na physiological solution.

Sukatin ang 0.1 ml ng diluted na ihi at ibabaw na kumakalat na may drigalski spatula sa medium na CLED. Ito ang pinakamahusay na paraan ng pag-seeding para sa pagbibilang ng mga kolonya. Para sa kadahilanang ito ay ginagamit ito sa mga sample ng ihi, dahil ang mga resulta ay dapat ipahayag sa CFU / ml.

Upang mabuo ang mga nakuha na kolonya, magpatuloy tulad ng sumusunod: bilangin ang mga kolonya sa plato at dumami ng 10 at pagkatapos ng 50. Nagbibigay ito sa iyo ng halaga ng CFU / ml ng ihi.

Pagbibigay kahulugan

Nagbibilang nang higit sa 100,000 CFU / ml -– Nagpapahiwatig ng impeksyon sa ihi

Mga bilang sa ibaba 1000 CFU / ml- Walang impeksyon

Mga bilang sa pagitan ng 1000-10,000 CFU / ml -– Duda, posibleng kontaminasyon, ulitin ang sampling.

ID

Ang mga kolonya na lumaki sa CLED agar ay dapat magkaroon ng Gram at depende sa mga katangian ng morphotintorial ng microorganism, isang tiyak na subculture ang isinasagawa.

Halimbawa, kung ito ay isang negatibong bacillus na Gram, itatanim ito sa isang MacConkey agar, kung saan nakumpirma ang pagbuburo o hindi ng lactose. Bilang karagdagan, ang isang nutrient agar ay nakakabit upang maisagawa ang pagsubok sa oxidase.

Kung sakaling ibunyag ng Gram ang positibong cocci, maaari itong ma-subcultured sa maalat na mannitol agar at sa nutrient agar. Sa huli, isinasagawa ang catalase test. Sa wakas, kung ang mga lebadura ay sinusunod, ito ay itatanim sa Sabouraud agar.

Iniiwasan ng maraming mga laboratoryo ang paggamit ng daluyan ng CLED at ginusto lamang na gumamit ng agar agar ng dugo, MacConkey at nutrient agar sa mga sample ng ihi.

Paghahanda

Sa isang flask na may isang litro ng distilled water na natunaw 36.2 g ng CLED agar powder. Matapos ang 5 minuto na nakatayo, painitin ang resuspended agar, halo-halong patuloy na pakuluan ng 1 minuto.

Pagkatapos ay isterilisado sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto sa autoclave. Sa pagtatapos ng oras, tinanggal ito mula sa autoclave at pinapayagan na palamig sa temperatura na 45 ° C. Kasunod nito, ang 15-20 ML ay ihahain sa bawat sterile dish na Petri.

Ang pamamaraan ng paghahatid ng plato ay dapat isagawa sa loob ng isang laminar flow hood o sa harap ng Bunsen burner upang maiwasan ang kontaminasyon.

Ang mga plate na naihatid ay naiwan upang matibay, isagawa sa isang baligtad na rack at nakaimbak sa isang ref (2-8 ° C) hanggang sa gamitin.

Ang pangwakas na pH ng handa na daluyan ay dapat na 7.3 ± 0.2.

Mga Sanggunian

1. Mga rekomendasyon para sa diagnosis ng microbiological ng impeksyon sa ihi. bata. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Magagamit sa: scielo.org.
2. Panchi J. Pagkilala sa microbial agent na nagdudulot ng impeksyon sa ihi sa mga inpatients na sumasailalim sa catheterization ng pantog. 2016. Ang undergraduate na trabaho upang maging kwalipikado sa degree ng Bachelor sa Clinical Laboratory. Teknikal na Unibersidad ng Ambato. Ecuador.
3. Britannia Laboratories. CLED medium. Magagamit sa: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Mga tagubilin para magamit, CLED Agar. 2013 Magagamit sa: es.renylab.ind.br.
5. Mga Pinagmulan na Laboratories. Pangunahing Manwal ng Mikrobiolohiya. Magagamit sa: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Ang pagpipilian para sa CLED agar sa nakagawiang kultura ng ihi. Isang prospective at paghahambing na pagsusuri. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktikal na klinikal na microbiology. Unibersidad ng Cadiz, ika-2 edisyon. Serbisyo sa Publication ng UCA.