CZAPEK AGAR: MAKATUWIRAN, PAGHAHANDA, PAGGAMIT AT MGA LIMITASYON - BIOLOGY - 2025

Ang Czapek (CZA) ay isang pumipili solidong daluyan na partikular na idinisenyo para sa lumalagong saprophytic bacteria at fungi. Ito ay nilikha ng botanist na si Friedrich Johann Franz Czapek, ng pinanggalingan ng Poland, at chemist ng American na si Arthur Wayland Dox; sa kadahilanang ito, ang agar na ito ay kilala rin bilang Czapek-Dox medium.

Ang orihinal na daluyan ay likido, ngunit ang agar ay naidagdag sa ibang pagkakataon upang gawin itong isang solidong daluyan. Ang Czapek medium ay binubuo ng sodium nitrate, bipot potassium phosphate, magnesium sulfate, potassium chloride, ferrous sulfate, sucrose, agar, at distilled water.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Pinagmulan: A. Medmyco / B. Larawan: Dr David Midgley. Wikipedia.com

Ang pH ng Czapek agar ay 7.3, ngunit mayroong isang variant kung saan idinagdag ang 10% na lactic acid, ang pH na kung saan ay nananatili sa 3.5. Ang medium medium na ito ay ginagamit para sa paglilinang ng mga acidophilic microorganism.

Sa kabilang banda, binago ng ilang mga komersyal na bahay ang komposisyon ng Czapek agar sa pamamagitan ng pagbabago ng magnesium sulfate at bipot potassium phosphate ng glycerophosphate; pinipigilan ng pagbabagong ito ang pag-aayos ng magnesiyo pospeyt na sinusunod kasama ang maginoo na pormula mula sa pagbuo. Gayundin, mayroong isa pang variant kung saan idinagdag ang lebel ng lebadura.

Sa wakas, ang Czapek agar ay inirerekomenda ng American Public Health Association APHA para sa pag-aaral ng Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp at Penicillium sp. Ang mga species na ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng pagiging microorganism ng kalikasan at oportunistikong mga pathogen.

Batayan

Ang daluyan na ito ay naglalaman ng sukrosa; Ang karbohidrat na ito ay nagsisilbi bilang mapagkukunan ng carbon, habang ang sodium nitrate ay ang mapagkukunan ng nitrogen, ngunit hindi tulad ng iba pang media na ibinigay ng nitrogen ay hindi anino.

Para sa kadahilanang ito, ang medium ng Czapek ay itinuturing na pumipili, dahil ang mga microorganism lamang na may kakayahang gumamit ng mga tulagay na compound bilang nag-iisang mapagkukunan ng nitrogen ay maaaring lumago.

Bilang isang regulate na sangkap ng osmolarity ng medium ay bipot potassium phosphate. Para sa kanilang bahagi, ang magnesiyo sulpate, potasa klorido at ferrous sulfate ay nagbibigay ng mahahalagang mineral para sa paglaki ng saprophytic (walang buhay) na mga microorganism. Ang pormula na ito ay bumubuo ng isang pag-unlad ng magnesiyo pospeyt.

Sa wakas, ang agar-agar ay ang compound na nagbibigay ng solidong pare-pareho sa medium at tubig ay ang solvent para sa lahat ng mga sangkap.

Sa binagong formula ng Czapek agar, walang pagbubuo ng pag-unlad at pinapabuti nito ang pagganap ng paglago ng ilang fungi.

Ang matinding kaasiman ng Acid Czapek Agar ay ginagawang isang mas pumipili na daluyan, na pinapayagan lamang ang paglaki ng acidophilic microorganism, na may kakayahang magamit ang mga organikong nitrogen. Samantala, pinapabuti ng Czapek-yeast agar ang pagganap ng ilang mga kabute.

Paghahanda

Katamtamang Czapek-Dox

Timbang 49 g ng dehydrated medium medium at matunaw sa distilled water. Mag-apply ng init hanggang sa kumukulo. Palaging iling ang halo hanggang sa ganap na matunaw.

-Czapek Agar Wedges

Ipamahagi ang natunaw na halo sa mga tubes at autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto. Kapag tinanggal mula sa autoclave, homogenize bago itabi ang mga tubes at payagan na matatag.

-Czapek agar plate

Autoclave ang natunaw na halo sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto at iwanan ito upang palamig sa 50 ° C, homogenize at ibuhos ang 20 ml sa sterile pinggan. Hayaan ang pagpapatibay, ibalik at mag-imbak sa refrigerator hanggang sa gamitin.

Ang pH ay dapat manatili sa 7.3 ± 0.2. Ang kulay ng dehydrated medium ay puti at ang handa na daluyan ay light amber, bahagyang maulap dahil sa pagkakaroon ng isang flocculating precipitate.

Czapek medium sa acidic pH

Maghanda tulad ng na inilarawan, ngunit ang pagdaragdag ng 10 ml ng sterile 10% lactic acid para sa bawat litro ng daluyan na handa. Ang nabago na Czapek medium ay dapat nasa pH 3.5 ± 0.2.

Binagong Czapek Medium

Tumimbang ng 45.4 g ng dehydrated medium at matunaw sa 1 litro ng tubig. Ang natitirang bahagi ng paghahanda ay pareho tulad ng inilarawan sa itaas. Ang kulay ng dehydrated medium ay puti at ang handa na daluyan ay maputi. Ang pangwakas na pH ng daluyan ay 6.8 ± 0.2.

Czapek-lebadura na daluyan

Tinatawag din ang Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Naglalaman ito ng mga elemento ng klasikong Czapek agar plus yeast extract.

Gumamit

Ang medium na Czapek ay ginagamit upang maghanap para sa mga saprophytic microorganism sa mga sample ng lupa, gulay, butil, hangin, insekto, bukod sa iba pa.

Ang Czapek agar sa acidic pH ay ginagamit para sa paglaki ng acidophilic microorganism, habang binago ang Czapek agar lalo na kapaki-pakinabang para sa pagbuo ng mga chlamydospores sa mga species ng Candida albicans complex.

Sa wakas, ang Czapek-yeast agar ay kapaki-pakinabang para sa paghihiwalay ng Aspergillus at Penicillium.

Sown

-Czapek agar

Upang maghanap para sa Actinomycetes sa lupa, magpatuloy tulad ng sumusunod: ang sample ay itinuturing na may phenolized na tubig sa loob ng 30 min at pagkatapos ay 1 ML ng suspensyon ay nahasik sa Czapek agar. Mag-incubate sa 28 ° C sa loob ng 5 hanggang 7 araw.

Para sa mga gulay, butil at insekto na mga halimbawa ay inilalagay nang direkta sa agar. Maaari ka ring gumawa ng mga panlabas at binhi 0.1 ml sa ibabaw ng agar.

-Modified Czapek agar

Para sa punla, isang tuwid na loop o karayom ​​ang ginagamit, pinapagbinhi kasama ang pamunas at ang agar ay inoculated na gumawa ng isang pagbutas hanggang sa hawakan nito ang base ng plato. Mag-incubate ng 24 na oras sa 28 ° C at suriin sa ilalim ng isang mikroskopyo sa itaas at sa ibaba ng plato upang makita kung nabuo ang mga chlamydospores.

Ang temperatura ng pagpapapisa at oras

Ang temperatura ng pagpapapisa ng itlog at oras ay nag-iiba depende sa uri ng microorganism na ihiwalay. Ang mga plate ay pangkalahatang natutuyo para sa isa hanggang dalawang linggo sa isang saklaw ng temperatura na 20 hanggang 25 ° C.

Gayunpaman, may mga tiyak na kundisyon para sa ilang mga galaw. Halimbawa, ang karamihan sa mga species ng genus Aspergillus ay mabilis na lumago sa 30 ° C; gayunpaman A. ang fumigatus ay lumalaki sa 50 ° C.

Tungkol sa oras ng pagpapapisa ng isa o dalawang linggo ay normal, gayunpaman, ang Candida albicans ay maaaring umunlad sa 24 hanggang 48 na oras sa 25 ° C.

Mga katangian ng ilang mga kolonya sa daluyan na ito

-Penicillium atrovenetum

Bumubuo ito sa 12 araw ng pagpapapisa ng itlog sa 27 ° C. Ang kanilang mga kolonya ay maliit (25 mm).

Ang mga kolonya ay may malaswang hitsura, na may isang tinukoy na puting hangganan at isang asul-berde na kulay sa gitna na nagiging kulay-abo habang ito ay edad. Ang baligtad na bahagi ng kolonya ay orange, na ginagawa ang gitna ng parehong kulay dahil sa paggawa ng pigment.

-Aspergillus niger

Bumubuo ito ng puti hanggang dilaw na mycelium at black spores.

-Candida albicans

Ang mga creamy light beige colony ay bubuo. Sa binagong Czapek agar ay bumubuo ito ng mga chlamydospores.

-Aspergillus parasiticus

Ang isang madilim na berdeng mycelium ay bubuo sa 7 araw sa 25 ° C.

QA

Upang masuri ang kalidad ng medium medium, ang mga sertipikadong control strains ay maaaring itanim, tulad ng: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Ang Aspergillus niger ay bubuo ng puti hanggang dilaw na mycelium at black spores sa halos 5 araw, habang ang mga Candida albicans ay magkakaroon ng kasiya-siyang paglago sa 24 na oras ng pagpapapisa ng itlog sa 25 ° C; ang mga kolonya ay may kulay na cream.

Mga Limitasyon

Ang ilang mga pag-aaral ay nagpahayag na para sa pagbawi ng Actinomycetes, ang agar na may pinakamahusay na ani ay patatas dextrose agar, na may Czapek agar sa pangalawang lugar, ngunit para sa pagbawi ng Aspergillus at Penicillium, ang Czapek agar ay ang nagbibigay ng pinakamataas na rate ng pagbawi.

Mga Sanggunian

1. Dávila M, et al. Antagonistic actinomycetes laban sa phytopathogen fungi ng kahalagahan ng agrikultura. Rev. Science. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Magagamit sa: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Wheats Á. Ang paghihiwalay ng mga strain ng Aspergillus niger, na gumagawa ng ochratoxin A, sa naka-imbak na berdeng kape (Coffea arabica). Rev. Mic. 2010; 32: 63-68. Magagamit sa.scielo.org.
3. Mga nag-aambag sa Wikipedia. Daluyan ng Czapek. Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. Enero 13, 2019, 20:30 UTC. Magagamit sa: en.wikipedia.org
4. Mga Laboratories ng Conda. Binago ang Czapek-Dox Agar. Magagamit sa: condalab.com
5. Media Media Microkit. Czapek-Dox Agar. Diosponible sa: Medioscultivo.com