Ang agar Hektoen o Hektoen enteric agar solid medium ay isang pumipili at kaugalian na kultura. Ito ay nilikha sa Hektoen Institute ni King at Metzger para sa paghihiwalay ng mga enteropathogenic na bakterya ng Shigella at Salmonella genera.
Ang medium ay binubuo ng proteose peptone, yeast extract, bile salts, lactose, sucrose, salicin, sodium thiosulfate, sodium chloride, iron citrate, ammonium citrate, bromothymol asul, acid fuchsin at agar. Ang pagbabalangkas na ito ay posible upang makilala ang pagkakaiba-iba ng Shigella at Salmonella genera mula sa natitirang mga bakterya na may kakayahang lumago sa daluyan na ito.
A. Virgin Hektoen agar B. Binhi Hektoen agar. Pinagmulan: Flickr.com/Ang orihinal na uploader ay si Philippinjl sa French Wikipedia.
Bagaman mayroong iba pang media na may parehong pag-andar bilang Hektoen agar, mayroon itong mas malaking kalamangan kumpara sa iba pang media, lalo na kung nais mong mabawi ang mga species ng Shigella.
Ang mga species ng parehong kasarian ay nagdudulot ng matinding problema sa gastrointestinal sa mga tao dahil sa pagkonsumo ng kontaminadong pagkain; samakatuwid ang paghahatid ay fecal - oral. Iyon ang dahilan kung bakit ang paggamit ng Hektoen agar higit sa lahat ay ipinahiwatig sa microbiological analysis ng mga dumi ng tao at mga sample ng pagkain.
Batayan
Naglalaman si Hektoen Agar ng mga peptones at yeast extract bilang isang mapagkukunan ng mga nutrisyon, na nagbibigay ng mga mahahalagang elemento para sa pag-unlad ng microbial.
Gayunpaman, mayroon din itong mga asing-gamot na apdo na kumikilos sa pamamagitan ng pagpigil sa paglaki ng ilang mga bakterya, lalo na ang positibong Gram at negatibo ang Gram. Ito ay para sa kadahilanang ito ay itinuturing na isang napiling daluyan.
Sa kabilang banda, ang Hektoen agar ay isang medium medium. Ang pag-aari na ito ay ipinagkaloob sa pamamagitan ng pagkakaroon ng mga mabubuong karbohidrat tulad ng lactose, sukrosa at salicin, kasama ang pH indicator system, na kinakatawan ng bromothymol na asul at acid fuchsin.
Ang lahat ng bakterya na may kakayahang lumaki sa daluyong ito na hindi kabilang sa genus na Salmonella at Shigella ay bubuo ng mga kolonya ng salmon o orange na maliban sa genus na Proteus. Ito ay dahil sa pagbuburo ng isa o higit pa sa mga karbohidrat na naroroon, na acidify ang daluyan, na ginagawang pagliko ang tagapagpahiwatig ng pH.
Para sa bahagi nito, ang genus na Shigella at Salmonella ay hindi may kakayahang mag-ferment ng alinman sa mga karbohidrat na naroroon, gamit lamang ang mga peptones bilang isang mapagkukunan ng enerhiya, na alkalize ang daluyan at samakatuwid ang kanilang mga kolonya ay asul-berde.
Ang bakterya na may kakayahang bumubuo ng hydrogen sulfide (walang kulay na gas) ay maaari ding makilala sa daluyan na ito. Ang sodium thiosulfate ay kumikilos bilang mapagkukunan ng asupre habang ang bakal citrate ay ang nag-develop. Ang parehong mga compound ay ginagawang posible ang pagbuo ng isang itim na pag-ayos ng iron sulfide na nagpapakita ng reaksyon.
Ang itim na pag-urong sa gitna ng kolonya na may isang malinaw na halo sa paligid nito ay nagbibigay ng hitsura ng isang mata-isda. Ang katangian na ito ay nagmumungkahi ng pagkakaroon ng genus na Salmonella.
Sa wakas, pinapanatili ng sodium chloride ang balanse ng osmotic at ang agar ay nagbibigay ng solidong pare-pareho sa medium.
Paghahanda
Timbang 76 g ng dehydrated medium at matunaw sa isang litro ng distilled water. Masigla ang ihalo at pagkatapos ay hayaan itong magpahinga ng 10 hanggang 15 minuto. Maaari itong pinainit at pinakuluang, na nagbibigay ng rotary na paggalaw hanggang sa kabuuang pagkabulok nito. Ang daluyan na ito ay hindi autoclaved.
Kapag ang daluyan ay umabot sa isang temperatura na humigit-kumulang na 45 ° C, isang dami ng 20 ml ay ibinuhos nang direkta sa mga sterile pinggan.
Ang agar ay pinapayagan na palakasin. Sa oras na ito ay handa na silang gamitin. Inirerekomenda na gamitin agad ito. Kung hindi ito posible, sila ay pinananatiling nasa refrigerator hanggang sa gamitin.
Ang mga plate ay dapat na tinanggal mula sa ref bago ma-seeding upang dalhin ang mga ito sa temperatura ng silid.
Ang pH ng daluyan ay dapat na 7.5 ± 0.2. Ang kulay ng dehydrated medium ay lila at ang handa na daluyan ay brownish-green.
Gumamit
Ang paggamit ng Hektoen agar ay inirerekumenda para sa paghahanap para sa mga bakterya ng Shigella at Salmonella genus sa dumi at mga sample ng pagkain.
Ang posibilidad na paghiwalayin ang mga bakterya na ito ay malaki na nadagdagan kung ang sample ay dati nang pinayaman sa mga espesyal na sabaw, tulad ng selenite na sabaw, sabaw ng cystine, sabaw ng tetrathionate, atbp.
Ang inoculum ay dapat na malakas at ang paghahasik ay ginagawa sa pamamagitan ng pag-ikot. Ang mga plate ay incubated sa 37 ° C sa loob ng 24 hanggang 48 na oras sa aerobiosis.
Ang pagpapapisa ng 48 oras ay inirerekomenda dahil ang mga katangian ng mga kolonya ay mas malinaw para sa kanilang interpretasyon at pagkita ng kaibhan sa oras na ito.
QA
Upang maisagawa ang kalidad ng kontrol sa daluyan na ito, ang mga sertipikadong bakteryang bakterya ay ginagamit, tulad ng: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 at Shigella sonnei ATCC 25931.
Ang mga inaasahang resulta ay ang mga sumusunod: Ang Salmonella typhimurium at Salmonella enteritidis ay dapat bumuo ng mga asul-berde na kolonya na mayroon o walang isang itim na sentro. Samantalang ang mga species ng Shigella ay lalago bilang mga asul-berde na kolonya.
Ang mga Strains ng Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 at Staphylococcus aureus ATCC 25923 ay maaari ring maisama.
Sa mga kasong ito, ang mga sinusunod na katangian ay ang mga sumusunod: E. coli at K. pneumoniae ay bubuo ng mga kolonya ng salmon-orange sa daluyan na ito, na may isang pag-ayos ng parehong kulay sa kanilang paligid. Sapagkat, ang Proteus ay bubuo ng mga asul-berdeng kolonya na mayroon o walang isang itim na sentro.
Habang ang S. aureus at E. faecalis ay dapat pigilan, ang E. faecalis ay paminsan-minsang namamahala upang lumago bilang napakaliit, dilaw na kolonya.
Sa kabilang banda, dahil ang daluyan na ito ay hindi autoclaved, mahalagang suriin ang tibay ng daluyan. Samakatuwid, mula sa bawat batch na inihanda, ang isa hanggang dalawa na hindi naka-edukado na mga plato ay dapat na ma-incubated sa 37 ° C sa loob ng 24 na oras sa aerobiosis.
Malinaw na walang paglago ng anumang uri ang inaasahan sa plato.
Mga Limitasyon
-Ang mga species ng Proteus ay maaaring bumuo sa daluyan na ito at ang mga katangian ng kanilang mga kolonya ay maaaring malito sa mga species ng Salmonella o Shigella. Para sa kadahilanang ito, ang anumang kahina-hinalang kolonya ay dapat kumpirmahin na may mga pagsubok sa biochemical.
Kinakailangan na samahan ang paggamit ng daluyan na ito sa iba pang mga hindi gaanong pumipili na mga agar, sapagkat kung ang hinahangad na microorganism ay matatagpuan sa mababang konsentrasyon ay maaaring hindi ito umuunlad sa daluyan na ito.
-Hindi mag-overheat sa panahon ng paghahanda, dahil ang labis na init ay nagbabago sa komposisyon ng daluyan.
-Unusually, ang mga kolonya ng lactose fermenting Salmonella ay maaaring lumitaw na maaaring hindi napansin.
Mga Sanggunian
- Mga nag-aambag sa Wikipedia. Hektoen enteric agar. Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. Marso 13, 2019, 23:38 UTC. Magagamit sa: .wikipedia.org / Na-access noong Marso 16, 2019.
- Mga Laboratoryo ng BD. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013.Magagamit sa: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoen Enteric Agar. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoen agar. Magagamit sa: f-soria.es
- Manu-manong Difco & BBL, Hektoen Enteric Agar. 2nd Edition. Magagamit sa: bd.com/europe