LIA (LYSINE IRON) AGAR: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang agar LIA (Lysine Iron) ay isang pagsubok na biochemical na ginamit upang makilala ang mga bakterya ng pamilyang Enterobacteriaceae. Ang daluyan na ito ay nilikha ng Edwards at Fife, batay sa formula ng Falkow.

Orihinal na pagsubok na ito ay isang sabaw na naglalaman ng mga peptones, lebadura, glucose, L-lysine, bromocresol lila, at distilled water. Nagdagdag si Edwards at Fife ng agar-agar, ferric ammonium citrate, at sodium thiosulfate.

Positibo at negatibong pagsubok para sa lysine decarboxylation. Pinagmulan: Larawan at diagram ng pag-aari ng may-akda na MSc. Marielsa gil

Ang pagsubok ay binubuo ng pagpapakita ng pagkakaroon ng enzyme lysine decarboxylase, na may kakayahang umepekto sa pangkat ng carboxyl ng amino acid na L-lysine. Ang isang deamination ng amino acid ay maaari ring maganap dahil sa pagkakaroon ng enzyme lysine deaminase.

Bilang karagdagan, ang komposisyon ng daluyan ay nagpapakita ng kakayahan ng ilang mga bakteryang genera upang makagawa ng hydrogen sulfide. Sa wakas, posible ring obserbahan ang henerasyon o hindi ng gas sa medium.

Batayan

Peptones at yeast extract

Tulad ng karamihan sa media media, ang Lysine Iron Agar ay naglalaman ng mga sangkap na nagbibigay ng mapagkukunan ng mga nutrisyon na kinakailangan para sa paglaki ng bakterya. Ang mga sangkap na ito ay kinakatawan ng peptones at yeast extract.

Glucose

Gayundin, ang agar na ito ay naglalaman ng glucose bilang isang fermentable na karbohidrat. Ang lahat ng bakterya sa pamilyang Enterobacteriaceae ay kilala sa pagbuburo ng glucose.

Ang hakbang na ito ay mahalaga, sapagkat responsable para sa acidifying ang medium, isang mahalagang kondisyon para sa enzyme lysine decarboxylase -if present- upang kumilos sa substrate nito.

Sa ilang mga bakterya genera, ang paggawa ng gas dahil sa pagbuburo ng glucose ay maaaring sundin.

Ang gas ay napatunayan kung mayroong isang paglilipat ng agar sa tube, nag-iiwan ng isang walang laman na puwang sa ilalim nito, o sa pamamagitan ng pag-bali ng daluyan sa dalawa o higit pang mga bahagi.

L-lysine

Kapag ang lysine ay decarboxylated, isang diamine (cadaverine) at carbon dioxide ang nabuo.

Ang decarboxylation ay nangyayari sa pagkakaroon ng coenzyme pyridoxal phosphate. Ang reaksyon na ito ay hindi maibabalik.

Tagapagpahiwatig ng PH (bromocresol lila)

Ang lahat ng mga pagbabago sa pH na nangyayari sa daluyan ng iba't ibang mga reaksyon ay napansin ng tagapagpahiwatig ng lila na bromocresol pH.

Sa kahulugan na ito, kapag mayroong acidification ang medium ay nagiging dilaw, at kapag mayroong alkalization ang medium ay bumalik sa orihinal na kulay ng lilang o lila.

Kapag nangyayari ang lysine deamination dahil sa pagkakaroon ng enzyme ng lysine deaminase, isang mapula-pula na kulay ang nabuo sa ibabaw, na tipikal sa genera Proteus, Providencia, at ilang mga species ng Morganella.

Ito ay dahil sa ang katunayan na sa panahon ng proseso ng deamination ang alpha-keto-carbonic acid ay nabuo, na tumutugon sa ammonium citrate sa pagkakaroon ng oxygen, na nagiging sanhi ng nabanggit na kulay.

Ferric ammonium citrate at sodium thiosulfate

Sa kabilang banda, ang bakterya na gumagawa ng hydrogen sulfide ay napatunayan sa pamamagitan ng pagkakaroon ng sodium thiosulfate (mapagkukunan ng asupre) at ferric ammonium citrate, na siyang nag-develop ng H ₂ S.

Ang bakterya na nagtataglay ng enzyme thiosulfate reductase ay may kakayahang kumilos sa pamamagitan ng pagbawas ng sodium thiosulfate na kasalukuyan, na bumubuo ng sulfite at hydrogen sulfide (H ₂ S).

Ang huli ay isang walang kulay na gas, ngunit kapag gumanti ito sa asin na bakal ay bumubuo ito ng ferrous metallic sulfide, na kung saan ay isang hindi malulutas na compound (nakikitang itim na pag-urong).

Gayunpaman, ang kakayahang mabuo ang H ₂ S sa daluyan na ito ay hindi masyadong maaasahan, dahil ang ilang lysine decarboxylase negatibong bakterya na may kakayahang gumawa ng H ₂ S ay hindi bubuo ng itim na pag-urong, dahil ang kaasiman ng daluyan ay nakakasagabal. Samakatuwid, inirerekumenda na suriin sa iba pang media na naglalaman ng bakal.

Pagbibigay kahulugan sa pagsubok

Lysine decarboxylation

Ang mga tubo ay dapat basahin pagkatapos ng 24 na oras ng pagpapapisa ng itlog, kung hindi man mayroong panganib ng maling pag-interpret sa reaksyon, pag-uulat ng mga maling negatibong.

Dapat alalahanin na ang unang reaksyon na magaganap ay ang pagbuburo ng glucose, samakatuwid lahat ng mga tubo pagkatapos ng 10 hanggang 12 na oras ay magiging dilaw.

Kung sa pagtatapos ng oras ng pagpapapisa ng itlog (24 na oras) isang dilaw na background na may isang lilang o lila na ibabaw ay sinusunod, negatibo ang reaksyon. Ang lilang kulay ng ibabaw ay tumutugma sa alkalinization ng daluyan sa pamamagitan ng paggamit ng mga peptones.

Ang isang positibong reaksyon ay isa kung saan ang ilalim at ibabaw ng tubo ay ganap na lilang, iyon ay, bumalik ito sa orihinal na kulay.

Samakatuwid, na tumutukoy sa positivity ng pagsubok ay ang base o background ng daluyan. Kung may pagdududa tungkol sa kulay, maaari itong ihambing sa isang non-inoculated LIA tube.

Deamination ng lysine

Ang isang tubo na nagpapakita ng lysine deamination ay magkakaroon ng isang mapula-pula na ibabaw ng ibabaw at isang dilaw (acid) na background, o ang buong tubo na mapula-pula na maroon.

Ang reaksyon na ito ay isinalin bilang negatibo para sa lysine decarboxylation, ngunit positibo para sa lysine deamination.

Ang reaksyon na ito ay tinukoy at binibigyang kahulugan sa bezel.

Produksyon ng hydrogen sulfide (H

Ang isang positibong reaksyon ay sinusunod ng hitsura ng isang itim na pag-uunlad sa lahat o bahagi ng daluyan. Karaniwan sa pagitan ng gilid ng bevel at base.

Kung ang pag-usad ay nangyayari sa buong tubo, hindi nito ihahayag ang iba pang mga reaksyon na nagaganap sa gitna.

Record ng mga resulta

Kapag binibigyang kahulugan ang pagsubok ang mga resulta ay naitala bilang mga sumusunod:

Una basahin ang bevel, pagkatapos ay sa ilalim o block, pagkatapos ay ang produksyon ng H ₂ S, at sa wakas ang paggawa ng gas.

Halimbawa: K / A + (-). Ibig sabihin nito:

• K: Alkaline bezel (lila na kulay)
• A: Acidic background (dilaw), i.e. negatibong reaksyon ng decarboxylation at negatibong deamination.
• +: Paggawa ng hydrogen sulfide
• (-): Nang walang gas.

Paghahanda

Tumimbang ng 35 g ng dehydrated iron agar lysine medium at matunaw ito sa isang litro ng distilled water.

Init hanggang sa ganap na matunaw ang agar, upang gawin ito hayaan itong pakuluan nang isang minuto, madalas na pagpapakilos. Ipamahagi ang 4 ml ng daluyan sa 13/100 mga tubo ng pagsubok na may mga takip ng koton.

Sterilize sa isang autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto. Alisin mula sa autoclave at payagan na tumayo sa isang anggulo upang may malalim na base at isang maikling bevel.

Pagtabi sa isang ref 2-8 ° C. Hayaan itong magpainit bago ihasik ang bakterya na pilay.

Ang kulay ng dehydrated medium ay beige at ang handa na daluyan ay mapula-pula na lila.

Ang pangwakas na pH ng handa na daluyan ay 6.7 ± 0.2

Ang daluyan ay nagiging dilaw sa pH 5.2 o mas kaunti, at lilang sa pH 6.5 pataas.

Aplikasyon

Ang pagsubok na ito, kasama ang iba pang mga pagsubok sa biochemical, ay ginagamit para sa pagkilala ng bacilli ng pamilya Enterobacteriaceae.

Ang daluyan ay seeded na may isang tuwid na loop o karayom, ang isa o dalawang mga puncture ay ginawa sa ilalim ng tubo, at pagkatapos ay ang ibabaw ng daluyan ay nakapuntos sa isang zigzag.

Mag-incubate sa loob ng 24 na oras sa 35-37 ° C sa aerobiosis. Kung kinakailangan, ito ay naiwan upang mag-incubate para sa karagdagang 24 na oras.

Ito ay higit na kapaki-pakinabang sa pagkakaiba-iba ng lactose-negatibong Citrobacter species mula sa Salmonellas sp.

Pinagmulan: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.

Mga Sanggunian

1. Mac Faddin J. (2003). Mga pagsubok sa biochemical para sa pagkilala ng mga bakterya na kahalagahan ng klinikal. 3rd ed. Editoryal Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. Lysine iron agar. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
5. Mga Laboratoryo ng BD. BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Magagamit sa: bd.com
6. Mga Valtek Laboratories. Katamtamang LIA 2009.Available sa: tekstoamedica.com