PATATAS DEXTROSE AGAR: MAKATUWIRAN, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang patatas dextrose agar ay isang daluyan, solidong di - pumipili na hindi nakapagpapalusog na kultura. Ang mga species ng bakterya at fungal ay maaaring lumago sa loob nito, ngunit ang paggamit nito ay lalo na ipinahiwatig para sa paghihiwalay ng mga filamentous fungi at yeast. Kilala rin ito bilang medium ng PDA para sa expression ng Ingles na Potato Dextrose Agar.

Lalo na kapaki-pakinabang ito para sa paghihiwalay ng mga fytopathogen fungi, iyon ay, ang mga nakakaapekto sa mga halaman. Upang maghasik ng mga sample mula sa mga nahawaang gulay, ang iba pang mga paraan tulad ng Sabouraud agar o malta-agar ay maaaring magamit, gayunpaman, para sa nakagawiang paggamit, ang dextrose agar ng patatas ay ginustong dahil sa pagkuha ng higit na sporulation.

Aspergillus niger at Sinemas sa patatas dextrose agar ayon sa pagkakabanggit. Pinagmulan: Alextrevelian 006 sa English Wikipedia / Joselrojas

Ginagamit din ito para sa pagbibilang ng mga kolonya ng fungal sa mga halimbawa ng mga pampaganda, mga produktong parmasyutiko at ilang mga pagkain ng pagawaan ng gatas. Gayundin, angkop para sa paghahasik ng mga sample ng mga scrapings ng balat sa paghahanap ng mga dermatophytes, na lumago nang maayos sa daluyan na ito, na binuo ang kanilang mga katangian ng mga pigment.

Ang patatas dextrose medium ay isang napaka-simple at madaling daluyan upang maghanda sa laboratoryo. Naglalaman ito, tulad ng ipinahihiwatig ng pangalan nito, pagbubuhos ng patatas, dextrose at agar-agar. Bilang karagdagan, ang mga sangkap na nagbabalat ay maaaring maidagdag upang maiwasan ang paglaki ng bakterya at dagdagan ang pagkasunud-sunod para sa mga fungal species.

Batayan

Ang patatas dextrose agar ay isang medium medium na nagbibigay ng mga sangkap sa nutrisyon na kinakailangan para sa pagbuo ng mga filamentous fungi at yeast.

Ang kumbinasyon ng pagbubuhos ng patatas na may glucose ay nagbibigay ng perpektong mapagkukunan ng enerhiya para sa isang kasiya-siyang paglago ng fungi. Habang ang agar ay ang nagbibigay ng pare-pareho sa medium.

Ang daluyan lamang ay hindi pumipigil sa paglaki ng bakterya, samakatuwid ito ay isang hindi pumipili na daluyan. Upang mapili ito, kailangan nito ang pagdaragdag ng mga sangkap ng pag-inhibit tulad ng tartaric acid o antibiotics.

Paghahanda

-Homemade (hindi komersyal) paghahanda ng patatas dextrose agar

Mga pinggan ng Petri

Ito ay inihanda tulad ng sumusunod:

Sa unang lugar, ang mga patatas ay hugasan nang maayos, na tinatanggal ang lupa na kanilang tinatangkilik. Ang mga ito ay pinutol sa manipis na hiwa na may lahat ng bagay at shell. Ang 200 gramo ng patatas ay tinimbang at pinakuluan sa isang litro ng distilled water sa kalahating oras.

Sa pagtatapos ng oras, i-filter o i-filter ang lahat ng paghahanda sa pamamagitan ng cheesecloth.

Ang likidong nakuha ay nakumpleto ng distilled water hanggang sa isang litro. 20 g ng agar-agar at 20 g ng dextrose ay idinagdag sa pagbubuhos, halo-halong mabuti at autoclaved sa 121 ° C, sa 15 pounds ng presyon para sa 15 minuto.

Payagan ang cool sa 50 ° C at maglingkod sa sterile pinggan Petri. Ang mga nakahandang plato ay nakaimbak sa isang ref.

Mga wedge

Ang mga potato dextrose agar wedge ay maaari ding ihanda.

Sa kasong ito, bago isterilisado sa autoclave, ang 12 hanggang 15 ml ng daluyan ay inilalagay sa mga tubo, sa kalaunan ay autoclaved at kapag iniwan sila ay nagsisinungaling sa mga espesyal na suporta hanggang sa solidify ito. Mag-imbak sa isang refrigerator.

Ang daluyan ay nananatili sa isang pH na 5.6 ± 0.2, gayunpaman, ang ilang mga laboratoryo ay nagdaragdag ng 10% tartaric acid upang bawasan ang pH hanggang 3.1 ± 0.1 upang mapigilan ang paglaki ng bakterya.

Sa parehong kahulugan na ito, ginusto ng ibang mga laboratoryo na magdagdag ng mga antibiotics upang mapili ito para sa paglilinang ng fungi at maiwasan ang paglaki ng bakterya.

-Komersyal na paghahanda ng patatas dextrose agar

Tumimbang ng 39 g ng komersyal na magagamit na dehydrated medium at matunaw sa isang litro ng distilled water. Hayaan itong magpahinga ng 5 minuto.

Ang halo ay pinainit ng madalas na pagpapakilos hanggang sa ganap na matunaw. Kasunod nito, isterilisado ito sa isang autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.

Ang mga plate o wedge ay maaaring ihanda. Magpatuloy tulad ng inilarawan sa itaas.

Ang pH ay nananatili sa 5.6 ± 0.2. Kung ang isang pH na 3.1 ay ninanais, ang 14 ml ng sterile 20% tartaric acid ay dapat idagdag bago ihatid sa mga plato.

Ang hilaw na daluyan ay murang kayumanggi at ang handa na daluyan ay light amber na may bahagyang maulap o maliliit na hitsura.

Aplikasyon

Proseso para sa paghahasik ng mga sample ng halaman sa patatas dextrose agar

-Para sa mga batik na dahon

Ang mga dahon ay pinutol sa mga piraso.

Sa isang 50 cc na baso na may 50% na alkohol, ilagay ang mga piraso ng dahon (may mantsa at malusog na mga piraso), upang disimpektahin ang ibabaw sa loob ng 20 hanggang 30 segundo. Itapon ang alkohol at magdagdag ng 20% ​​sodium hypochlorite sa loob ng 40 hanggang 50 segundo kung sila ay manipis na dahon at dagdagan ang oras sa 80 segundo kung ito ay bark at log.

Itapon ang sodium hypochlorite at kunin ang mga disimpektadong piraso na may isang sterile forceps at ilagay ang mga ito sa ibabaw ng daluyan (isang maximum na 10 piraso). Itakda ang petsa at pag-incubate sa 20-30 ° C.

-Para sa mga prutas at tubers

Kung ang prutas ay laman, buksan ang prutas na apektado ng fungus at kumuha ng mga piraso na may isang sterile scalpel, kapwa mula sa mga may sakit at malusog na bahagi at ilagay ang mga ito sa ibabaw ng agar.

Kung ang prutas ay sitrus, tulad ng isang limon o isang orange, dapat itong buksan at ang mga binhi ay nahasik.

Kung ang ibabaw ng prutas ay apektado at ang mga spores ay sinusunod, ang perpekto ay ang paggamit ng paraan ng rehas sa plato; Ito ay binubuo ng pagpindot sa mga spores na may isterilisado at pinalamig na "L" -shaped spatula, at pagkatapos ay gumawa ng isang zigzag seeding 2 hanggang 3 beses sa agar.

-Para sa mga butil

Sila ay dinidisimpekta tulad ng inilarawan sa mga dahon at kalaunan ay inilagay sa agar.

-Para sa mga sanga at tangkay

Ang bark ay scraped off at kalaunan ang mga piraso ng malusog at may sakit na bahagi ay kinuha at inihasik nang direkta sa agar.

Ang mga binhing mga plato ay napapawi ng aerobically sa 20-30 ° C sa loob ng 72 oras.

Proseso para sa paghahasik ng mga sample ng balat, buhok o kuko sa patatas dextrose agar

Ang sampling ay dapat gawin gamit ang isang No. 11 scalpel blade, alinman upang maputol ang apektadong buhok, mga kaliskis sa balat o mga kuko sa paghahanap ng mga dermatophytes. Bago kunin ang sample, ang lugar ay dapat na disimpektado ng 70% na alkohol.

-Skin sample

Sa mga scaly lesyon, ang gilid ng sugat ay dapat na ma-scrap, dahil ang fungus ay mas madaling matagpuan doon.

Sa exudative lesyon, ang sample ay kinuha gamit ang isang tuyo o basa na pamunas. Itanim agad sa patatas dextrose agar o Sabouraud agar. Iwasan ang paraan ng transportasyon.

Ang isa pang paraan ng sampling ay sa pamamagitan ng carpet square technique ng Mariat at Adan Campos. Sa kasong ito, ang apektadong lugar ay hadhad 5 beses sa isang piraso ng sterile lana para sa kasunod na paglilinang.

Ang sample ay maaaring mailagay nang direkta sa medium ng kultura.

-Hair sample

Depende sa patolohiya, ang apektadong bahagi ay maaaring maputol o mabunot. Ilagay ang sample sa medium ng kultura.

-Nail sample

Ang isang tiyak na bahagi ng apektadong kuko ay maaaring mai-scrape o i-cut. Ito ay depende sa uri ng pinsala.

Gupitin ang sample sa 1 mm na piraso bago ang paghahasik upang madagdagan ang posibilidad ng pakikipag-ugnay sa fungus gamit ang medium medium.

Pamamaraan ng pagkilala

Ang mga kolonya na nakuha sa plato ay nakahiwalay sa mga tubong naglalaman ng patatas dextrose agar upang maisagawa ang pag-aaral ng macroscopic ng mga kolonya (hitsura, kulay, pagkakapare-pareho, antas ng pag-unlad.

Ang mikroskopikong pag-aaral (pagmamasid sa mga istruktura at ang kanilang mga formations) ay maaaring gawin ng mga microcultures o direktang pagmamasid sa ilalim ng mikroskopyo sa pagitan ng slide at slide.

Bilang ng kolonya

Ang daluyan na ito ay maaari ding magamit upang matukoy ang fungal at lebadura na na-load na nasa mga halaman, pagkain, kosmetiko o gamot. Para sa layuning ito, ginagamit ang patatas dextrose agar na pupunan ng mga antibiotics, tulad ng: (chloramphenicol, chlorotetracycline o pareho).

Ibuhos ang 1 ml ng sample - mas mabuti na diluted - sa isang sterile at walang laman na Petri dish, pagkatapos ay matunaw ang isang pad ng patatas dextrose agar at payagan na palamig sa 45 ° C. Ibuhos sa ulam ng Petri at paikutin hanggang homogenized. Hayaan itong magpahinga hanggang sa maging matatag ito.

Mag-incubate ng aerobically sa 20-25 ° C (mga hulma) o 30-32 ° C (lebadura) para sa 5 hanggang 7 araw o higit pa, depende sa uri ng halamang halamang halamang hinahangad at ang uri ng sample. Ang dalawang plato ay maaaring magamit upang mabuo sa parehong mga saklaw ng temperatura.

Nagbibilang ng mga kolonya ng fungal sa isang sample ng pagkain. Patatas dextrose agar na pupunan ng antibiotics. Pinagmulan: larawan ng Pxhere.com / 777267

Pagpapanatili ng mga fungal strains

Ang Potato Dextrose Agar ay maaaring magamit upang mapanatili ang mabubuhay na fungal strains sa loob ng maraming taon.

Para sa mga ito, ang halamang-singaw ay lumago sa mga wedge ng patatas dextrose agar at sa sandaling lumaki ang fungus, natatakpan ito ng langis ng mineral. Ang langis ay dapat isterilisado sa isang autoclave para sa 45 minuto, at magkaroon ng lagkit ng humigit-kumulang na 300 hanggang 330 Saybolt. Ang langis ay dapat na 1 hanggang 2 cm sa itaas ng dulo ng bevel.

QA

Mula sa bawat batch na inihanda, kumuha ng 1 o 2 plate at ipalubha ang mga ito sa 25 ° C para sa 48 oras o sa 20 ° C sa loob ng 96 na oras. Ang isang mahusay na kontrol sa sterility ay isa kung saan ang pag-unlad ng kolonya ay hindi sinusunod.

Ang kilalang o sertipikadong mga kontrol na kontrol ay maaari ding gamitin tulad ng:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Ang mabuting pag-unlad ay inaasahan sa lahat ng mga kaso.

Mga Sanggunian

1. Britannia Laboratories. Patatas na glucose agar. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
2. Neogen Laboratories. Patatas Dextrose agar. Magagamit sa: foodsafety.neogen.com
3. Laboratoryo ng Insumolab. Patatas dextrose agar. Magagamit sa: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Pangkalahatang Mycology. 1994. 2nd Ed. Central University ng Venezuela, Mga Edisyon sa Library. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Ebalwasyon ng Microbiological Quality sa Eyeshadow, Compact Powder Type ng isang Pambansang Laboratory Laboratory, ayon sa Reference Method na Pharmacopea Usp 2005. Thesis upang maging kwalipikado para sa pamagat ng Pharmaceutical Chemist. Unibersidad ng San Carlos ng Guatemala.
7. Cuétara M. Pagproseso ng mga sample sa ibabaw. Iberoamerican Journal of Mycology. 2007; pp. 1-12