DUGO PARA SA DUGO: MAKATUWIRAN, GAMIT AT PAGHAHANDA - BIOLOGY

Ang agar agar ng dugo ay isang solidong medium medium na pinayaman ng pagkakaiba ngunit walang kadali. Ginagamit ito para sa pagbawi at paglaki ng isang mahusay na iba't ibang mga microorganism mula sa mga klinikal na sample o para sa mga subculture.

Ang klasikong agar agar ay dapat isama para sa pag-aanak ng karamihan sa mga klinikal na sample na natanggap sa laboratory; maliban sa mga sample ng dumi kung saan hindi ito kapaki-pakinabang, maliban kung handa sa ilang mga pagbabago.

Plato para sa dugo

Ang medium medium na ito ay karaniwang binubuo ng isang enriched base agar at 5% dugo. Ang base base ay maaaring mag-iba ayon sa mga pangangailangan, ngunit higit sa lahat ito ay binubuo ng mga peptones, amino acid, bitamina, katas ng karne, sodium klorido, agar, at iba pa.

Tulad ng para sa dugo, karaniwang kinakailangan na makipag-ugnay sa isang vivarium upang makakuha ng dugo mula sa mga hayop, tulad ng tupa, kuneho o kabayo. Gayunpaman, hindi ito laging posible at ang dugo ng tao ay minsan ginagamit.

Daluyan ng daluyan ng dugo ay maaaring ihanda sa laboratoryo o maaaring mabili na handa mula sa mga dedikadong kumpanya. Ang paghahanda ng daluyan na ito ay isa sa mga pinaka maselan, ang anumang kawalang-ingat sa paghahanda nito ay magreresulta sa isang kontaminadong batch.

Iyon ang dahilan kung bakit dapat gawin ang lahat ng posibleng pag-iingat at sa wakas ang isang kontrol sa kalidad ay dapat isagawa sa pamamagitan ng pag-incubating sa 37 ° C 1 plate para sa bawat 100 na inihanda.

Batayan

Ang Staphylococcus aureus ay nakaugaw sa agar agar ng dugo. Nabasa ni Nathan sa Flickr Nathan R. sa Twitter, sa pamamagitan ng Wikimedia Commons Nabanggit na ang dugo agar ay may katangian ng pagiging isang enriched, kaugalian at di-pumipili na daluyan. Ang batayan para sa bawat isa sa mga pag-aari na ito ay ipinaliwanag sa ibaba.

Ang agar agar ng dugo ay isang enriched medium dahil naglalaman ito ng 5-10% dugo sa isang agar base bilang pangunahing additive nito. Ang parehong mga compound ay naglalaman ng maraming mga nutrients at ang ari-arian na ito ay nagbibigay-daan sa karamihan ng mga nabubuhay na bakterya na lumago dito.

Ang paglago na iyon ay nangyayari nang walang paghihigpit; para sa kadahilanang ito ay hindi pumipili. Gayunpaman, kung ang mga compound ay idinagdag sa daluyan na ito na pumipigil sa paglaki ng ilang mga microorganism at pabor sa iba, nagiging mapili ito. Ito ang kaso kung ang ilang mga uri ng antibiotics o antifungal ay idinagdag.

Gayundin, ang agar agar ng dugo ay isang medium medium, dahil pinapayagan tayong makilala ang 3 uri ng bakterya: beta-hemolytic, alpha-hemolytic at gamma-hemolytic.

Ang Beta-hemolytics ay ang mga may kakayahang ganap na limasin o masira ang mga pulang selula ng dugo, na bumubuo ng isang malinaw na halo sa paligid ng mga kolonya, samakatuwid gumagawa sila ng ß o ß -hemolysis at ang mga microorganism ay tinatawag na ß-hemolytic.

Ang mga halimbawa ng ß-hemolytic bacteria ay Streptococcus pyogenes at Streptococcus agalactiae.

Ang Alpha-hemolytics ay ang mga nagsasagawa ng bahagyang hemolysis, kung saan ang hemoglobin ay na-oxidized sa methemoglobin, na bumubuo ng isang maberde na kulay sa paligid ng mga kolonya. Ang hindi pangkaraniwang bagay na ito ay kilala bilang α o α -hemolysis at bakterya ay inuri bilang α-hemolytic.

Ang mga halimbawa ng bacteria na α-hemolytic ay Streptococcus pneumoniae at Streptococcus ng grupong viridans.

Sa wakas, mayroong mga tinatawag na gamma-hemolytic o non-hemolytic bacteria. Ang mga ito ay lumalaki sa agar nang hindi bumubuo ng mga pagbabago dito, isang epekto na kilala bilang γ -hemolysis, at ang mga microorganism ay γ -hemolytic.

Halimbawa ng bacteria-hemolytic bacteria: ang ilang mga strain ng pangkat D Streptococcus (Streptococcus bovis at Enterococcus faecalis).

Aplikasyon

Ang medium agar culture medium ay isa sa mga karaniwang ginagamit sa microbiology laboratory.

Kabilang sa mga microorganism na may kakayahang lumaki sa medium agar agar ng dugo ay: mahigpit na aerobic, facultative, microaerophilic, anaerobic, Gram positibo o Gram negatibong bakterya, mabilis na lumalaki o mabagal na lumalagong bakterya.

Ang ilang mga nutritional na hinihingi o mabilis na bakterya ay lumalaki din, pati na rin ang fungi at lebadura. Gayundin, ito ay kapaki-pakinabang para sa subculturing o muling pag-reaktibo ng mga strain na mahina ang metabolically.

Gayunpaman, ang pagpili ng uri ng dugo at base agar ay magkakaiba depende sa maaaring microorganism na pinaghihinalaang mabawi at ang paggamit kung saan ang plato ay gagamitin (kultura o antibiogram).

Pagpili ng uri ng dugo

Ang dugo ay maaaring kordero, kuneho, kabayo, o tao.

Ang pinaka inirerekomenda ay ang dugo ng kordero, na may ilang mga pagbubukod. Halimbawa, upang paghiwalayin ang mga species ng Haemophilus, kung saan ang inirekumendang dugo ay kabayo o kuneho na dugo, dahil ang dugo ng tupa ay naglalaman ng mga enzyme na pumipigil sa kadahilanan V.

Ang hindi bababa sa inirerekomenda ay tao, gayunpaman ito ang pinaka ginagamit, marahil dahil ito ang pinakamadali upang makuha.

Ang dugo ay dapat na defibrine, nakuha nang walang anumang uri ng additive at mula sa malusog na mga hayop. Para sa paggamit ng dugo ng tao, maraming mga kadahilanan ang dapat isaalang-alang:

Kung ang dugo ay nagmula sa mga indibidwal na nagkaroon ng impeksyon sa bakterya, magkakaroon sila ng mga tukoy na antibodies. Sa ilalim ng mga kundisyong ito ang paglaki ng ilang mga bakterya ay malamang na mapigilan.

Kung nakuha ito mula sa bangko ng dugo, naglalaman ito ng citrate at ang ilang mga bakterya ay maaaring hindi lumago sa pagkakaroon nito. Sa kabilang banda, kung ang dugo ay nagmula sa mga pasyente na kumukuha ng antibiotics, ang paglago ng madaling kapitan na bakterya ay maaaring mapigilan.

At kung ang dugo ay mula sa isang taong may diyabetis, ang labis na glucose ay nakakasagabal sa tamang pag-unlad ng mga pattern ng hemolysis.

Pagpili ng uri ng agar agar

Ang base agar na ginagamit para sa paghahanda ng agar para sa dugo ay maaaring maging malawak. Kabilang sa mga ito ay: nutrient agar, utak ng puso pagbubuhos agar, trypticase soy agar, Müeller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, Brucella agar, Campylobacter agar, atbp.

Gumagamit ng agar agar ng dugo ayon sa base medium na ginamit para sa paghahanda nito

Pansamantalang agar

Ang batayang ito ay hindi gaanong ginamit, dahil laluna itong lalago ang hindi hinihingi na bakterya, tulad ng enteric bacilli, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, bukod sa iba pa. Hindi inirerekumenda na ihiwalay ang Streptococcus.

Utak ng Bush ng Brain sa Brain (BHI)

Ito ay isa sa mga pinaka-malawak na ginagamit bilang isang batayan para sa agar agar ng dugo, sapagkat naglalaman ito ng mga kinakailangang nutrisyon para sa paglaki ng karamihan sa mga bakterya, kabilang ang Streptococcus sp at iba pang hinihingi na bakterya. Bagaman hindi angkop na obserbahan ang mga pattern ng hemolysis.

Ang dugo ng kordero ay karaniwang ginagamit sa batayang ito.

Ang mga variant para sa dugo ay maaari ding ihanda, kung saan ang iba pang mga compound ay idinagdag upang ibukod ang ilang mga microorganism. Halimbawa, ang Brain Heart Infusion Agar na pupunan ng dugo ng kuneho, cystine, at glucose ay maaaring magamit upang ibukod ang Francisella tularensis.

Samantalang, kasama ang cystine tellurite ay kapaki-pakinabang para sa paghihiwalay ng Corynebacterium diphteriae. Maaaring gamitin ang dugo ng tao o kordero.

Sa unang beta-hemolysis ay makikita bilang isang makitid na halo, habang sa pangalawa ang halo ay magiging mas malawak.

Gayundin, ang batayang ito, kasama ang bacitracin, mais na kanin, dugo ng kabayo at iba pang mga pandagdag sa pagpapayaman (IsoVitaleX), ay ginagamit para sa paghihiwalay ng genus Haemophilus sp mula sa mga sample ng paghinga.

Gayundin, kung ang kumbinasyon ng mga antibiotics na chloramphenicol - gentamicin o penicillin - idinagdag ang streptomycin na may dugo ng kabayo, mainam para sa paghihiwalay ng hinihingi ang mga pathogen fungi, kahit na may mas mataas na ani kaysa sa Sabouraud glucose agar. Lalo na kapaki-pakinabang ito sa paghihiwalay ng Histoplasma capsulatum.

Trypticase toyo agar

Ang batayang ito ang pinaka inirerekomenda para sa isang mas mahusay na pagmamasid sa pattern ng hemolysis at para sa pagsasagawa ng mga pagsusuri sa diagnostic tulad ng optoquine taxa at bacitracin. Ito ang klasikong agar agar ng dugo na ginagamit nang regular.

Sa batayang ito maaari mo ring ihanda ang espesyal na agar para sa dugo para sa Corynebacterium diphteriae, na may cystine tellurite at dugo ng tupa .

Gayundin, ang kumbinasyon ng agar agar na ito ng dugo ng kordero, kasama ang kanamycin-vancomycin ay mainam para sa paglaki ng anaerobes, lalo na ang Bacteroides sp.

Müeller Hinton agar

Ang batayang ito na pupunan ng dugo ay ginagamit upang isagawa ang antibiogram ng mga napakabilis na microorganism, tulad ng Streptococcus sp.

Kapaki-pakinabang din ito para sa paghihiwalay ng mga bakterya tulad ng Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Ang daluyan na ito ay mainam bilang isang batayan para sa dugo agar kapag ang Neisseria genus, lalo na ang Neisseria meningitidis, ay pinaghihinalaan, dahil ang N. gonorrhoeae ay hindi lumalaki sa agar agar ng dugo.

Ginagamit din ito upang masubukan para sa pagkamaramdamin sa Neisseria meningitidis.

Columbia agar

Ang batayang ito ay mahusay para sa mga seeding gastric biopsy specimens para sa Helicobacter pylori.

Ang daluyan ay inihanda sa pamamagitan ng pagdaragdag ng 7% dugo ng tupa na kinokontrol ng mga antibiotics (vancomycin, trimethoprim, amphotericin B at cefsulodin) upang higpitan ang paglaki ng iba pang mga uri ng bakterya na maaaring naroroon.

Ang parehong base na pupunan ng dugo ng tao o kordero, nalidixic acid at colistin ay kapaki-pakinabang para sa paghiwalayin ang Gardnerella vaginalis. Ito ay mainam para sa pagtatasa ng antimicrobial pagkamaramdamin sa mga antibiotics ng parehong microorganism.

Bilang karagdagan, ginagamit ito para sa paghahanda ng agar agar ng dugo para sa paglilinang ng anaerobes, pagdaragdag ng aminoglycosides at vancomycin.

Ang base na ito ay nagbibigay-daan para sa wastong pagmamasid sa mga pattern ng hemolysis.

Brucella agar

Ang daluyan na ito na ginamit bilang isang batayan para sa agar agar ng dugo kasama ang pagdaragdag ng bitamina K ay mainam para sa paglilinang ng anaerobic bacteria. Sa kasong ito, inirerekomenda ang paggamit ng dugo ng kordero.

Campylobacter agar

Campylobacter agar pupunan na may 5% dugo ng tupa at 5 antibiotics (cephalothin, amphotericin B, trimethoprim, polymyxin B at vancomycin), ay ang daluyan na ginamit upang ibukod ang Campylobacter jejuni sa mga dumi ng dumi.

Paghahanda

Ang bawat komersyal na bahay ay nagdadala ng mga tagubilin upang maghanda ng isang litro ng medium medium sa likod ng lalagyan. Ang pagkalkula ng pagkalkula ay maaaring gawin upang ihanda ang nais na halaga, depende sa napiling base agar.

Timbang at matunaw

Ang base agar ay dehydrated (pulbos), samakatuwid dapat itong matunaw sa distilled water na nababagay sa PH 7.3.

Ang dami na ipinahiwatig ng napiling base agar ay tinimbang at natunaw sa kaukulang dami ng tubig sa isang baso, pagkatapos ay pinainit sa katamtamang init at halo-halong may rotary na paggalaw hanggang sa matunaw ang lahat ng pulbos.

Sterilize

Kapag natunaw, isterilisado sa isang autoclave sa 121 ° C sa loob ng 20 minuto.

Ang pagsasama-sama ng dugo

Kapag umalis sa autoclave, ang flask ay pinapayagan na palamig hanggang sa ang saklaw ng temperatura sa pagitan ng 40 hanggang 50 ° C; Ito ay isang temperatura na sinusuportahan ng balat ng tao at sa parehong oras ang agar ay hindi pa napapatibay.

Upang gawin ito, ang vial ay hinawakan gamit ang kamay at kung ang init ay matitiis, ito ay ang mainam na temperatura upang magdagdag ng kaukulang halaga ng defibrinated na dugo (50 ml para sa bawat litro ng agar). Paghaluin nang malumanay sa homogenize.

Ang pagpasa ng pagsasama-sama ng dugo ay mahalaga, sapagkat kung ito ay tapos na kapag ang medium ay sobrang init ang mga pulang selula ng dugo ay babagsak at ang daluyan ay hindi gagamitin upang obserbahan ang hemolysis.

Kung ito ay idinagdag masyadong malamig, ito ay clump at ang ibabaw ng daluyan ay hindi magiging makinis upang payagan ang tamang pagmamarka.

Ibuhos sa pinggan ng Petri

Paglilingkod sa sterile pinggan Petri kaagad pagkatapos homogenizing ang dugo. Humigit-kumulang na 20 ML ay ibinuhos sa bawat ulam na Petri. Ang pamamaraang ito ay ginagawa sa isang laminar flow hood o malapit sa burner.

Kapag naghahatid ng agar para sa dugo sa mga pinggan ng Petri, walang mga bula ng hangin ang dapat manatili sa ibabaw ng plato. Kung nangyari ito, ang siga ng Bunsen burner ay ipinapasa mabilis sa ibabaw ng plato upang maalis ang mga ito.

Ang mga plato ay pinapayagan na palakasin at maiimbak sa isang ref (2-8 ° C) na ibinalik hanggang sa gamitin. Bago gamitin ang mga plate para sa dugo, dapat silang mapusot (pinapayagan na maabot ang temperatura ng silid) upang ma-seeded.

Ang mga nakahandang plate ay tumagal ng humigit-kumulang sa 1 linggo.

Mga Sanggunian

Bayona M. Mikrobiological na mga kondisyon para sa kultura ng Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktikal na klinikal na microbiology. Unibersidad ng Cadiz, ika-2 edisyon. Serbisyo sa Publication ng UCA.
"Dugo." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 10 Dis 2018, 14:55 UTC. 27 Dis 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Argentina. Editoryal Panamericana SA
CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Guatemala. Magagamit sa: trensa.com.
Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. (Ika-5 ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA

DUGO PARA SA DUGO: MAKATUWIRAN, GAMIT AT PAGHAHANDA - BIOLOGY - 2025