Ang agar para sa TCBS ay isang paraan ng lubos na pumipili at pagkakaiba-iba ng solidong kultura, na ginagamit para sa paghihiwalay at paglilinang ng bakterya ng genus Vibrio, lalo na Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus at V. vulnificus bilang pangunahing mga pathogens ng ganitong uri.
Ang acronym TCBS ay nakatayo para sa Thiosulfate Citrate Bile Sucrose. Ang agar na ito ay kilala rin bilang isang pumipili na daluyan para sa Vibrios. Ang orihinal na pormula ay nilikha ni Nakanishi at kalaunan ay binago ng Kobayashi.
Komersyal na TCBS medium at TCBS agar plate na nakatanim ng Vibrio cholerae. Pinagmulan: larawan 1: kinuha ng may-akda na MSc. Marielsa Gil / Larawan 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India
Binubuo ito ng yeast extract, peptone ng karne, triptein, sodium citrate, sodium thiosulfate, ox bile, sucrose, sodium chloride, ferric citrate, bromothymol asul, thymol asul at agar.
Pinapayagan ang komposisyon na ito ng isang sapat na pag-unlad ng mga species ng Vibrio mula sa mga sample ng tubig, pagkain at feces; maliban sa Vibrio hollisae, na hindi lumalaki sa daluyan na ito. Bukod dito, ang TCBS medium ay may kakayahang pigilan ang paglaki ng iba pang mga kasama na bakterya, lalo na ang mga coliform.
Dahil sa malubhang problema sa gastrointestinal at labis na bituka na ginawa ng ilang mga species ng genus Vibrio, ang pagsusuri nito ay napakahalaga. Ang mga tao ay higit sa lahat nahawaan ng pagkain ng hilaw o undercooked na pagkain mula sa dagat o maruming tubig, ngunit din sa pamamagitan ng impeksyon sa sugat.
Dahil dito, dapat isama ng mga laboratoryo sa klinika ang TCBS agar sa pag-aaral ng kultura ng stool ng mga likidong dumi ng dumi, lalo na sa hitsura ng tubig na bigas. Lalo na kung ang pasyente ay nag-uulat na nakikipag-ugnay sa tubig sa dagat o kumonsumo ng shellfish o isda.
Batayan
Ang lebadura ng lebadura, mga peptones ng karne, at triptein ang nutritional mapagkukunan ng daluyan na ito. Gayunpaman, ang agar para sa TCBS ay isang hindi nakakaalam na daluyan para sa karamihan ng mga bakterya.
Ang mataas na pagkasunud-sunod nito ay ibinibigay sa pamamagitan ng pagdaragdag ng sodium citrate at bull bile; kapwa ang mga ahente ng pagbawalan na nagbibigay din ng isang alkaline pH sa medium, na naghihigpit sa paglaki ng kalakip na flora at pabor sa paglago ng V. cholerae, bukod sa iba pang mga species. Dapat pansinin na ang Vibrio cholerae ay napaka sensitibo sa kaasiman.
Para sa bahagi nito, binabalanse ng sodium chloride ang medium. Bukod dito, dahil mataas ang konsentrasyon nito, gumaganap din ito bilang isang inhibitory agent, na pinapaboran ang paglaki ng halophilic bacteria.
Ang Sucrose ay ang asukal na asukal na, kasama ang bromothymol na asul at thymol asul na pH tagapagpahiwatig, bigyan ang daluyan ng kaugalian na katangian nito. Para sa kadahilanang ito, gamit ang daluyan na ito ay posible na magkakaiba sa mga sukat na pagbuburo ng sukat mula sa mga hindi pagbuburo.
Ang mga kolonya ng mga sukat na fermenting na may sukat ay bubuo ng dilaw sa kulay at iikot ang daluyan mula sa berde hanggang dilaw dahil sa produksyon ng acid. Ang mga di-fermenter ay lumalaki ng translucent at ang daluyan ay nananatiling orihinal na kulay (berde).
Gayundin, ang medium na ito ay naglalaman ng sodium thiosulfate bilang isang mapagkukunan ng asupre at ferric citrate bilang isang umuunlad na ahente. Ang parehong nagpapakita ng bakterya na may kakayahang gumawa ng hydrogen sulfide (walang kulay na gas). Ang H 2 S ay nabuo mula sa thiosulfate at kasunod nito sa pag-reaksyon sa ferric citrate isang nakikitang itim na mga pag-unlad ng itim.
Sa wakas, ang agar ay kung ano ang nagbibigay ng matatag na pagkakapareho sa medium.
Paghahanda
Timbang 89 g ng dehydrated medium at matunaw sa isang litro ng distilled water. Tulungan ang pagbuwag sa pamamagitan ng pagpainit at madalas na pagpapakilos. Ang halo ay maaaring pinakuluan ng hanggang sa 2 minuto.
Ang daluyan na ito ay hindi autoclaved. Pagkatapos matunaw, ihahatid ito nang direkta sa mga sterile plate. Kapag pinapatibay nila, inayos ang mga ito sa isang baligtad na paraan sa mga platelet at nakaimbak sa isang ref (2-8 ° C) hanggang sa gamitin.
Ang daluyan pagkatapos ng paghahanda ay dapat manatili sa pH 8.6 ± 0.2.
Ang kulay ng dehydrated medium ay light beige o maberde-beige, at ang kulay ng daluyan ay berde na berde o mala-bughaw na berde.
Mahalagang payagan ang mga plato na magpainit bago mag-seeding ng mga sample.
Gumamit
Ang pinaka-karaniwang ispesimen para sa Vibrios paghihiwalay ay diarrheal stool.
Ang mga sample ng Stool, kung hindi sila kaagad na ma-seeded sa napiling daluyan, ay dapat na maipadala sa medium ng Cary Blair.
Upang madagdagan ang pagiging sensitibo ng kultura, ang mga faeces ay maaaring dumaan sa tubig ng peptone sa pH 8.4 bilang isang daluyan ng enrichment para sa isang maximum na 8 oras, mula doon ay subcultured sa medium ng TCBS.
Dapat ding isaalang-alang na ang ilang mga strain ng Vibrios ay maaaring maging sanhi ng septicemia sa mga pasyente na immunosuppressed, samakatuwid maaari silang ihiwalay mula sa mga kultura ng dugo. Gayundin, ang mga halimbawa ng tubig at pagkain mula sa dagat ay maaaring masuri kapag may mga epidemya na pagsiklab ng sakit na cholera.
Sown
Ang inoculum ng sample sample ay dapat na kilalang, ang paghahasik ay isinasagawa ng pamamaraang striation sa pamamagitan ng pagkapagod. Ang mga plate ay incubated sa 37 ° C sa loob ng 24 na oras sa aerobiosis.
Ang mga presumptive colonies ng Vibrio cholerae ay daluyan ng laki, makinis, malabo, na may manipis na mga hangganan at dilaw na kulay dahil sa pagbuburo ng sucrose.
Ang mga species ng V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii at ilang V. vulnificus ay lumalaki sa isang katulad na paraan. Ang iba pang mga klinikal na mahalagang species ng Vibrios tulad ng V. parahaemolyticus ay hindi nagpapagaling ng sukat, na bumubuo bilang mga berdeng kolonya ng oliba.
Ang TCBS agar plate na binhing may Vibrio parahaemolyticus. Pinagmulan: isis325 Flickr
Sa kabilang banda, dapat tandaan na ang ilang mga strain ng Aeromonas at Plesiomonas na oxidase (+) ay maaaring lumago sa daluyan na ito, na bumubuo ng mga dilaw na kolonya na maaaring malito ang klinika. Habang ang ilang mga strain ng Pseudomonas ay din oxidase (+) lumalaki bilang berdeng kolonya tulad ng V. parahaemolyticus.
Limitasyon
Ang pagsubok ng oxidase na positibo para sa genus Vibrio ay hindi dapat gawin mula sa mga kolonya na nakuha mula sa agar ng TCBS, dahil ang resulta na nakuha ay isang maling negatibo. Ang mga Compound sa gitna ay malakas na makagambala sa pagsubok na ito. Samakatuwid, dapat itong gawin mula sa mga subculture sa agar agar ng dugo.
QA
Upang patunayan na ang daluyan ay nasa mabuting kalagayan, ipinapayong magtanim ng kilalang o sertipikadong mga galaw ng kontrol, at obserbahan kung ang paglaki ay nakakatugon sa inaasahang mga katangian.
Para sa mga ito maaari mong gamitin ang mga strain ng:
-Vibrio cholerae -— kasiya-siyang paglago (dilaw na kolonya, hangganan ng translucent)
-Vibrio parahaemolyticus - - kasiya-siyang paglago (kolonya na may berdeng sentro at hangganan ng translucent).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - kasiya-siyang paglago (dilaw na mga kolonya na may halos parehong kulay sa paligid ng kolonya).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - kabuuan o bahagyang pagsugpo (maliit na dilaw o translucent na mga kolonya).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853-- bahagyang o kabuuang pagsugpo (asul na mga kolonya).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Ganap na hinarang.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Kabuuan o bahagyang pagsugpo. (Maliit na mga kolonya berdeng sentro ng translucent na hangganan).
Ang pagpapapisa ng medium na hindi edukado ay dapat na mabago.
Mga Sanggunian
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009.Magagamit sa: f-soria.es
- Laboratoryo ng BD. BD. TCBS Agar 2003.Ang magagamit sa: bd.com
- Britannia Laboratories. Medium ng TCBS. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
- Mga Laboratoryo ng Acumedia. TCBS Agar. 2016.Maaari sa: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.