THAYER MARTIN AGAR: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang agar Thayer Martin ito ay isang napaka-nakapagpapalusog at solidong pumipili daluyan para sa paghihiwalay ng Neisseria meningitidis at Neisseria gonorrhoeae; parehong kilala bilang pathogenic o klinikal na mahalagang Neisserias.

Ang isa sa pinakamahalagang espesyal na katangian ng Thayer Martin Agar ay ang mataas na nilalaman ng mga suplemento sa nutrisyon. Mahalaga ang pag-aari na ito, dahil ang Neisserias ay sobrang hinihingi ng mga microorganism mula sa nutritional point of view at samakatuwid ay hindi lumalaki sa karaniwang media.

Medium na negosyo ng Thayer Martin / Agar Thayer Martin. Imahe ng Pinagmulan 1: Kinuha ng may-akda na MSc. Marielsa Gil, imahe 2. bacteriacolonized, Pixinio.com, binago, Thayer, Martin, agar.

Sa kabilang banda, dahil ang mga microorganism na ito ay karaniwang matatagpuan sa mga lugar na hindi marunong, ang pagdaragdag ng mga inhibitor ay kinakailangan upang maiwasan ang paglaki ng kasamang flora, nang hindi nakakaapekto sa pag-unlad ng genus Neisseria.

Ang agar na ito ay binubuo ng GC base agar, hemoglobin, karagdagang mga suplemento sa nutrisyon at isang komplikadong sangkap ng mga inhibitory (antibiotics at antifungals). Ang mga komersyal na bahay ay ibinebenta nang hiwalay ang bawat isa sa mga suplemento.

Ang sample na itinanim sa daluyan na ito ay depende sa microorganism na hinahanap. Para sa Neisseria gonorrhoeae ang mainam na mga ispesimen ay mga vaginal at urethral secretion. Habang para sa Neisseria meningitidis ang pinaka ginagamit na mga halimbawa ay ang CSF, pharyngeal at nasopharyngeal exudates.

Batayan

Ang mga Neisserias ay mga microorganism na naiuri bilang nakakainis at samakatuwid ang kanilang paghihiwalay ay mahirap. Samakatuwid, ang Thayer Martín ay isang komplikadong daluyan at bawat isa sa mga sangkap nito ay nagtutupad ng isang function na ipinaliwanag sa ibaba:

Gine base agar

Ang GC agar ay naglalaman ng proteose peptone, cornstarch, sodium chloride, dipot potassium phosphate, monopot potassium phosphate, at agar-agar. Ang mga sangkap nito ay nagbibigay ng mga pangunahing nutrisyon para sa pag-unlad ng microbial, neutralisahin ang nakakalason na fatty acid, makakatulong na mapanatili ang balanse ng osmotic, tukuyin ang pH at magbigay ng isang solidong pagkakapare-pareho sa medium.

Hemoglobin

Ang Hemoglobin ay nagbibigay ng mga kadahilanan V at X (nicotinamide adenine dinucleotide NAD at ayon sa pagkakabanggit). Para sa kadahilanang ito, ang mga species ng Haemophilus ay lumalaki din sa daluyan na ito. Ang Hemoglobin ay maaaring makuha sa komersyo sa isang naka-dehydrated form o sariwang defibrinated bovine blood ay maaaring idagdag sa medium.

Pagpapahusay ng Pagpapayaman

Sa kabilang banda, ang isang suplemento ng pagpapayaman ay dapat ding idagdag sa daluyan ng Thayer-Martin, dahil ang mga sustansya na nilalaman sa base agar ay hindi sapat para sa mga kinakailangan ng genus Neisseria.

Ang pinakakaraniwang ginagamit na supplement ng enrichment ay tinatawag na isovitalex. Naglalaman ito ng glutamine, adenine, NAD, cocarboxylase, guanine, ferric nitrate, p-amino benzoic acid, bitamina B12, thiamine, at glucose. Ang lahat ng mga compound na ito ay kinakailangan para sa tamang pag-unlad ng pathogenic Neisserias.

Mga Inhibitor

Dahil ito ay isang napaka-nakapagpapalusog na daluyan, dapat gamitin ang mga inhibitor na maiwasan ang paglaki ng mga microorganism mula sa karaniwang flora ng lugar at sa gayon ay pinapaboran ang paghihiwalay ng genus Neisseria.

Ang inhibitor complex ay binubuo ng vancomycin, colistin, at nystatin. Pinipigilan ng Vancomycin ang paglago ng mga positibong bakterya ng Gram, pinipigilan ng colistin ang paglaki ng mga negatibong bakterya ng Gram tulad ng Pseudomonas at ilang mga saprophytic Neisserias, at ang mga nystatin ay kumikilos sa lebadura tulad ng Candida albicans.

Gayunpaman, si Thayer Martin Agar ay nabago sa bandang huli; ang mga pagbabago ay binubuo ng pagdaragdag ng trimethoprim, pagtaas ng dami ng agar at pagdaragdag ng labis na glucose. Ang mga pagbabagong ito ay makabuluhang napabuti ang pagbawi ng mga species ng Neisseria gonorrhoeae.

Dapat pansinin na pinipigilan ng trimethoprim ang paglaki ng genus na Proteus at ang mga kahihinatnan na pagbuo nito. Sa ganitong kahulugan, ito ay ang antibiotics na nagbibigay ng pumipili na character sa daluyan ng Thayer Martin.

Paghahanda

Orihinal na Thayer Martin agar

-GC agar

Tumimbang ng 8.2 g ng dehydrated GC medium at suspindihin sa 100 ml. Paghaluin at pakuluan para sa 1 minuto na may madalas na pagpapakilos upang matunaw nang lubusan. Sterilize ang halo sa isang autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.

- 2% hemoglobin

Suspinde ang 2 g ng dehydrated hemoglobin sa 2 o 3 ml ng mainit na distilled water hanggang mabuo ang isang unipormeng halo. Magdagdag ng kaunti pa ng tubig upang makumpleto ang dami ng 100 ml. Ang suspensyon ay dapat na homogenous bago isterilisado.

Sterilize sa autoclave sa loob ng 15 minuto.

-Pagdagdag ng karagdagan

Ibalik muli ang komersyal na vial sa diluent na ibinigay ng parehong komersyal na kumpanya. Haluin nang mabuti. Ang halaga ng diluent na gagamitin ay tinukoy sa mga tagubilin sa kit.

-VCN pagdidagdag suplemento (vancomycin, colistin, nystatin)

I-reconstitute ang vial sa diluent na ibinigay ng komersyal na kumpanya. Haluin nang mabuti. Ang halaga ng diluent na gagamitin ay tinukoy sa mga tagubilin sa kit.

-Paghahanda

Para sa bawat 100 ML ng GC agar magpatuloy tulad ng sumusunod:

Kapag ang GC agar ay umalis sa autoclave, pahintulutan itong lumamig sa isang temperatura na humigit-kumulang na 50 ° C at magdagdag ng 2 ml ng handa na hemoglobin solution, 2 ml ng supplement na pagpayaman (isobitalex o britalex), at 2 ml ng suplemento sa pagsugpo. Paghaluin at ihatid sa sterile pinggan Petri.

Hayaan ang matatag at itago sa refrigerator hanggang sa gamitin.

Ang kulay ng handa na daluyan ay pula ng cherry. Ang pangwakas na pH ng daluyan ay 7.2 ± 0.2

Binagong Thayer Martin agar

Tumimbang ng 8.2 g ng dehydrated GC medium at suspindihin sa 100 ml. Magdagdag ng 1 g ng agar-agar at magdagdag ng 0.3 g ng glucose. Paghaluin at pakuluan para sa 1 minuto na may madalas na pagpapakilos upang matunaw nang lubusan. Sterilize ang halo sa isang autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.

Ihanda ang hemoglobin at suplemento ng pagpayaman tulad ng naunang inilarawan.

Ang suppression supplement na ginamit ay VCNT (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).

-Paghahanda

Magpatuloy bilang inilarawan para sa orihinal na Thayer Martin agar.

Gumamit

Ang Thayer Martin Agar ay dapat pahintulutan na magpainit bago ang mga ispesimen ay guhitan. Ang mga karaniwang gamit na halimbawa ay mga pharyngeal swabs, ilal swabs, vaginal, urethral, ​​at / o rectal discharge, at CSF.

Gumamit ng mga sariwang sample at gumawa ng malakas na mga inoculums sa agar. Ang mga sampol ay binubully nang diretso sa pamamagitan ng materyal na paglabas at pagkatapos ay pagkapagod na dumulas sa ibabaw.

Ang mga plato ay natupok sa 35-37 ° C sa loob ng 24 hanggang 48 na oras sa isang microaerophilic jar (5% CO ₂ ). Sa pagtatapos ng oras ng pagpapapisa ng itlog, ang mga plato ay sinuri para sa mga maliliit, kulay abo at kung minsan ang mga kolonya na naghahanap ng mucoid.

Magsagawa ng Gram at confirmatory biochemical test sa mga kahina-hinalang kolonya.

QA

Ang mga sumusunod na microbial strains ay maaaring magamit para sa kontrol ng kalidad ng Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 at Neisseria meningitidis ATCC 13090; ang kasiya-siyang pag-unlad ay inaasahan sa parehong mga strain.

Ang mga sumusunod na mga galaw ay dapat ding isama: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 at Candida albicans ATCC 10231. Sa lahat ng mga ito, inaasahan ang isang kabuuang o bahagyang pagsugpo sa daluyan na ito.

Mga Limitasyon

- Dapat nating tandaan na ang mga bakterya na lumalaban sa mga inhibitor na ginamit ay maaaring lumago sa daluyan.

-May mga strain ng Neisseria gonorrhoeae na maaaring maging sensitibo sa konsentrasyon ng ginamit na vancomycin. Para sa kadahilanang ito, inirerekumenda na gumamit ng tsokolate agar na pupunan ng isovitalex, ngunit walang mga inhibitor.

-May mga nystatin-resistant yeast strains na maaaring lumago sa daluyan na ito at makagambala sa paghihiwalay ng pathogenic Neisserias, lalo na ang gonococci.

Mga Sanggunian

1. Valtek Diagnostic Laboratories. Thayer-Martin Agar. 2016. Magagamit sa: com
2. Britannia Laboratories. Binago ang Thayer Martin Medium. 2010.Av magagamit sa: britanialab.com
3. Mga nag-aambag sa Wikipedia. Thayer-Martin agar. Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. Oktubre 26, 2017, 16:33 UTC. Magagamit sa: wikipedia.org 4. Na-access noong 28 Pebrero 2019.
4. Britannia Laboratories. GC agar. 2010.Av magagamit sa: britanialab.com.
5. Mga Laboratoryo BBL ™ Medium Enforment para sa Mabilis na Microorganism. 1999. Magagamit sa: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.