BIURET: PANGANGATWIRAN, REAGENTS, PAMAMARAAN, GINAGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang biuret ay isang reagent na ginagamit para sa pagpapasiya ng protina ng mahabang kadena at maikling chain. Lalo itong ginagamit sa lugar ng analytical chemistry at urinalysis upang siyasatin ang konsentrasyon ng kabuuang protina sa suwero, plasma at ihi.

Ang mga halaga ng protina ay maaaring tumaas o nabawasan sa ilang mga pathologies. Ang mga sintomas ng hypoproteinemia ay karaniwang nangyayari sa mga pasyente na may sakit sa bato, sa mga malnourished na pasyente, at sa mga pasyente na may talamak na impeksyon.

Ang istraktura ng kemikal ng kumplikadong nabuo sa reaksyon ng Biuret Positive Biuret test. Pinagmulan: Yikrazuul / flickr

Habang ang hyperproteinemia ay sinusunod sa mga pathology tulad ng maraming myeloma, systemic lupus erythematosus, bacterial endocarditis, bacterial meningitis, Waldenstrom's macroglobulinemia, bukod sa iba pa.

Sa kabilang banda, ang pagkakaroon ng protina sa ihi ay dahil sa pagsasala ng albumin ng bato. Ito ang pag-uugali ng pathological na dapat pag-aralan.

Sa kahulugan na ito, ang Biuret ay lubhang kapaki-pakinabang, dahil pinapayagan nitong masukat ang pagkakaroon ng mga protina sa suwero, plasma, ihi, kasama ng maraming iba pang mga sample.

Kahit na ang Biuret ay maaaring magamit upang mag-imbestiga sa pagkakaroon at konsentrasyon ng mga protina sa hindi magandang na-explore na mga sample o mga sample ng hindi kilalang komposisyon. Samakatuwid, malawak itong ginagamit sa lugar ng pananaliksik.

Ang pagsubok sa Biuret ay batay sa tiktik ng mga bono ng peptide. Nagaganap ang pagsubok sa isang daluyan ng alkalina. Ang sample ay dapat maglaman ng hindi bababa sa dalawang peptide bond para mabuo ang isang violet-purple complex. Ang complex ay nabuo ng unyon ng mga bono at ang tanso na tanso.

Batayan

Ang reagent ng Biuret ay binubuo ng potassium hydroxide, cupric sulfate, at sodium at potassium tartrate. Ginagamit ang sodium hydroxide upang ma-alkalize ang daluyan, dahil ang kundisyong ito ay mahalaga para maganap ang reaksyon.

Ang mga sangkap na gumagamot sa mga protina ay ang cupric sulfate, habang ang sodium tartrate ay may function na hindi pinapayagan ang pagbuo ng tanso hydroxide, na may posibilidad na umunlad at makakasagabal sa reaksyon.

Kung ang mga sangkap na may mga peptide bond (polypeptides o protina) ay matatagpuan sa sample, ang pagsubok ay magiging positibo.

Ang isang reaksyon ay isinalin bilang positibo kapag ang solusyon ay nagiging lilang. Ang kulay ay ginawa sa pamamagitan ng pagbuo ng isang kumplikado sa pagitan ng hindi bababa sa dalawang peptide bond na mayroong CO-NH group at ang mga cupric cations.

Ang violet complex ay maaaring mabuo sa dalawang paraan: ang isa ay sa pamamagitan ng pagkawala ng mga proton mula sa mga grupo ng amide na nagbubuklod sa metal (depronotation), at sa iba pa ng unyon ng oxygen at nitrogen electrons na libre at magbigkis may tanso.

Ang reaksyon na ito ay maaaring mag-iba sa intensity at kulay depende sa uri ng protina.

Ang pagsusulit ay maaaring isagawa nang husay o dami. Sa form na husay ay iniulat bilang positibo o negatibo. Samantalang sa dami ng form na ang konsentrasyon ay maaaring masukat ng pamamaraang spectrophotometric.

Ang reaksyon ay binabasa sa pagitan ng 540-560 nm. Ang intensity ng kulay ay direktang proporsyonal sa konsentrasyon ng mga bono ng peptide sa sample.

Mga Reagents

-20% sodium hydroxide (NaOH)

-Cupric sulfate pentahydrate 1% (CuSO _4. 5H ₂ O)

-Mixed sodium at potassium tartrate tetrahydrate (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Biuret reagent katatagan

-Dapat itong panatilihing palamig.

Proseso

Teknik

-Place 100 µl ng sample o pamantayang susuriin sa isang test tube.

-Magdagdag ng 2 ml ng sodium hydroxide.

-Mix nang maayos.

-Magdagdag ng 5 ml ng Biuret reagent.

-Mix at umalis upang magpahinga ng 25 minuto sa temperatura ng silid, takpan at protektahan mula sa ilaw.

-Magtataya sa pagbuo o hindi ng kulay at sukatin ang spectrophotometrically.

Curve ng pagkakalibrate

Ang bovine serum albumin ay maaaring magamit bilang isang pamantayan upang maisagawa ang calibration curve. Ang iba't ibang mga konsentrasyon ay inihanda mula dito. Halimbawa 25, 50, 75, 100, 125 at 150%.

Ang reaksyon ay naka-set up sa lahat ng mga kilalang konsentrasyon na ito at ang pagsipsip ay binabasa sa isang haba ng haba ng 540 nm. Sa pamamagitan ng data ng mga kilalang konsentrasyon at pagbabasa ng pagsipsip ng curve na ginawa.

Sa bawat pagpapasiya o batch ng mga naprosesong mga sample inirerekomenda na mag-mount ng isang pamantayan. Ang bovine serum albumin na 0.1-2 mg / ml ay maaaring magamit bilang pamantayan sa pagkakalibrate.

Ang mga pagsukat ay ginawa sa isang spectrophotometer sa 540 nm.

Ang pagkakaugnay-ugnay ay natutugunan hanggang sa isang konsentrasyon na 12 g / dl.

Pagkagambala

Mga sangkap na nakakaabala sa pagsubok ng Biuret

Bagaman hindi masyadong madalas, dapat tandaan na ang ilang mga sangkap ay maaaring makagambala sa panahon ng pagpapatupad ng pagsusulit na ito. Halimbawa, ang pagkakaroon ng ammonia ay maaaring pumigil sa pagbuo ng kulay.

Gayundin, ang iba pang mga sangkap ay maaaring sumipsip sa parehong haba ng daluyong, tulad ng ilang mga pigment.

Sa kabilang banda, ang pagkagambala ay maaaring mabuo kapag ang isang sangkap na maliban sa peptide bond ay bumubuo ng isang kumplikadong kasama ang tasa ng asin. Halimbawa: ilang mga karbohidrat at ilang mga lipid.

Sa kaganapan na ang sample na susuriin ay nagtatanghal ng ilang uri ng pag-uunlad, dapat itong i-filter o isentro bago i-mount ang pagsubok.

Mga sangkap na hindi makagambala sa pagsubok ng Biuret

Ang pagsubok ay hindi apektado sa pagkakaroon ng:

-Bilirubin hanggang sa isang konsentrasyon ng 20 mg / dl.

-Hemoglobin hanggang sa isang konsentrasyon ng 750 mg / dl.

-Dextran hanggang sa isang konsentrasyon ng 30 g / L.

-Triglycerides hanggang sa isang konsentrasyon ng 4000 mg / dl.

Kalamangan

-Ito ay isang simpleng pamamaraan upang maisakatuparan.

-Ito ay isang pang-ekonomiyang pagsubok.

-May mataas na detalye para sa mga protina.

-Limit na panghihimasok.

Mga Kakulangan

Ito ay may mahinang sensitivity upang makita ang mababang halaga ng protina. Ang gawaing isinasagawa ng Fuentes et al. Kinukumpirma na ang pamamaraan ng pagsubok sa Biuret ay may limitasyon ng pagtuklas ng 1 mg / ml ng protina at isang limitasyon ng dami ng 3 mg / ml.

Gayunpaman, ang iba pang pananaliksik na isinasagawa sa Unibersidad ng Amazonia ay nag-ulat ng mas mababang mga halaga. Ang limitasyon ng pagtuklas na iniulat ng pag-aaral ay 0.020 mg / ml at ang limitasyon ng dami ay 1.33 mg / ml.

Aplikasyon

Ang Biuret reagent o pagsubok ay ginagamit para sa pagpapasiya ng mga protina sa mga klinikal at di-klinikal na mga sample sa mga nakagawiang pang-laboratoryo at pananaliksik.

Mga pathology na nangyayari sa isang pagtaas o pagbaba sa

Sa maraming mga pathologies mahalaga na matukoy ang konsentrasyon ng kabuuang mga protina sa mga sample ng klinikal, na maaaring itaas o mababawasan.

Ang mga ito ay nakataas sa:

-Multiple myeloma,

-Systemic na lupus erythematosus,

-Baksyong endocarditis,

-Bacterial meningitis,

Ang macroglobulinemia ng Waldenstrom, bukod sa iba pa.

Nabawasan ito sa:

-Masamang kakulangan,

-Mga taong may malubhang antas ng malnutrisyon,

-Ang mga pasyente na may talamak na impeksyon, bukod sa iba pa.

Mga sample sa klinika

Ang pinaka-karaniwang mga klinikal na halimbawa ay suwero, plasma, at ihi. Ang normal na halaga ng mga protina sa suwero o plasma ay 6.0-8.8 gr / dl.

Ang konsentrasyon ng mga protina sa ihi sa mga may sapat na gulang ay hindi lalampas sa pigura ng 150 mg / 24 na oras.

Ang ihi na protina / ihi ratio na normal na halaga

Mga sanggol: <0.50 mg

Mga bata 2 taong gulang at mas matanda: index: 0.20 mg

Mga matatanda: <0.2 mg

Mga di-klinikal na halimbawa

Ang reaksyon ng Biuret ay maaaring magamit para sa maraming uri ng mga di-klinikal na mga sample, tulad ng mga produkto ng pagawaan ng gatas, antivenom, o anumang hindi kilalang sangkap na nais mong siyasatin ang pagkakaroon ng mga protina.

Mga Sanggunian

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Ang pagkakaugnay ng pang-kemikal na pang-kemikal at nilalaman ng protina ng mga likido ng extract ng mangrove oyster (Crassostrearizophorae). Cuban Journal of Chemistry, 26 (1), 66-74. Nakuha noong Hunyo 26, 2019, mula sa http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Pagganap na katangian ng almond ng mangga buto (Mangifera indica L.) Revista Ciencia en Desarrollo. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 19 Hunyo 2019, 16:37 UTC. 26 Hunyo 2019, 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. Standardization ng paraan ng Biuret upang mabuo ang kabuuang mga protina sa polyvalent antibotropic serum na ginawa sa INS National Center for Biological Products. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Magagamit sa: repositorio.ins.gob.pe
5. Nagwagi Laboratories. Kabuuang mga protina. Paraan ng colorimetric para sa pagpapasiya ng kabuuang protina sa suwero at plasma. Magagamit sa: wiener-lab.com.ar