PAGLAMLAM SA KINYOUN: MAKATUWIRAN AT PAMAMARAAN - BIOLOGY - 2025

Ang paglamlam sa Kinyoun ay isang pamamaraan ng paglamlam na ginamit upang mantsang bakterya at mga parasito na lumalaban sa acid na alkohol. Ipinanganak ito mula sa pagbabago ng kulay ng Ziehl-Neelsen; Ang parehong mga pamamaraan ay binibigyang kahulugan sa parehong paraan ngunit naiiba sa dalawang elemento: sa paghahanda ng pangunahing reagent at sa pamamaraan na Kinyoun ay hindi gumagamit ng init.

Para sa kadahilanang ito ay kilala rin bilang cold-modified Ziehl-Neelsen o Kinyoun cold stain. Ipinapahiwatig ito para sa paglamlam ng Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypical mycobacteria, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris at Cyclosporas cayetanensis.

Ang cryptosporidium parvum ay may mantsa na may mantsa ng Kinyoun. Punlop Anusonpornperm, mula sa Wikimedia Commons

Kapansin-pansin na mahina ang mantsa ng Nocardia sa pamamaraang ito dahil ang mga ito ay bahagyang lumalaban sa acid-alkohol, kaya para sa genus na ito mayroong isang pagbabago ng pamamaraan.

Kaugnay nito, ang malamig na pamamaraan ng Kinyoun ay pinagsama sa trichrome technique na binago ni Didier para sa pagtuklas ng coccidia (Cryptosporidium parvum at Isospora belli) at microsporidia spores (Enterocytozoon bieneusi at Encephalitozoon intestinalis).

Batayan

Ang pangunahing reagent ng paglamlam ay carbolfuchsin o carbol fuchsin, na kung saan ay may pag-aari na nagbubuklod sa mga karboholohiko acid sa loob ng lipid-rich waxy cell wall (mycolic acid) ng mycobacteria at ilang mga parasito.

Ang bond na ito ay hindi pinagtatalunan ng acid bleach; samakatuwid, ang mga microorganism ay tinukoy bilang mabilis na acid.

Hindi tulad ng diskarteng Ziehl-Neelsen -kung inaayos ang pangulay sa pamamagitan ng init-, sa diskarteng Kinyoun ang hakbang na ito ay hindi kinakailangan, dahil ang solusyon ng karbohiko na fuchsin na inihanda para sa pamamaraang ito ay naglalaman ng isang mataas na konsentrasyon ng phenol.

Natutunaw ni Phenol ang materyal ng lipid sa dingding ng cell, na pinapayagan ang pagpasok ng karbohoduchin na pangulay. Matapos tumusok ang tina, nananatiling maayos ito sa kabila ng paghuhugas ng alkohol na acid.

Sa ganitong paraan, ang mga microorganism ng acid-fast ay kumukuha sa katangian ng pulang kulay, habang ang anumang bagay na hindi acid-mabilis ay nagiging discolored at mantsa asul.

Teknik

materyales

- Binagong carbol fuchsin.

- Alkohol -acid.

- asul na Methylene.

Paghahanda ng Kinyoun carbol fuchsin

- Pangunahing fuchsin: 4 gr.

- Phenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Natunaw na tubig: 100 ml.

Ang pangunahing fuchsin ay dapat na matunaw nang dahan-dahan sa alkohol, na palaging pinaghahalo. Kasunod nito, ang crystallized phenol ay natunaw sa isang paliguan ng tubig sa 56 ° C. Kapag natunaw, ang 8 ml ay idinagdag sa fuchsin solution na inihanda sa itaas.

Paghahanda ng acid-alkohol

- Konsentrado na hydrochloric acid: 3 ml.

- Ethanol (95%): 97 ml.

Dapat itong masukat, sumali at magkahalong.

Paghahanda ng kulay ng asul na kahel na methylene

- Asul na Methylene: 0.3 g.

- Natunaw na tubig: 100 ml.

Ito ay timbang at natunaw.

Kinyoun staining technique

1- Maghanda ng isang pahid nang direkta mula sa sample, na maaaring maging plema, likido sa baga, sediment ng ihi, cerebrospinal fluid o feces, bukod sa iba pa; o mula sa isang pagsuspinde ng mga microorganism na nakuha mula sa purong mga kolonya na binuo sa pangunahing kultura ng media.

2- Ayusin ang smear na may init.

3- Ilagay ang pahid sa paglamlam ng tulay at takpan ang inihanda na Kinyoun carbol fuchsin na reagent. Hayaan itong magpahinga ng 3 hanggang 5 minuto.

4- Hugasan gamit ang distilled water.

5- Pagdurugo na may acidic na alkohol sa loob ng 3 minuto at hugasan muli gamit ang distilled water.

6- Pagdurugo muli na may acid na alkohol sa loob ng 1 o 2 minuto hanggang sa hindi na madadala ang kulay.

7- Hugasan gamit ang distilled water at payagan na maubos, paglalagay ng slide sa isang patayong posisyon.

8- Takpan ang paghahanda sa asul na methylene at iwanan upang kumilos ng 4 minuto.

9- Hugasan gamit ang distilled water at payagan upang matuyo ang hangin.

10- Suriin sa 40X at pagkatapos ay sa 100X.

Upang mapabuti at mapabilis ang paglamlam ng acid-fast microorganisms, magdagdag ng 1 patak ng isang wetting agent (tulad ng Tergitol No. 7) hanggang 30 hanggang 40 ML ng Kinyoun Carbol Fuchsin.

Ang ilang mga lab ay binago ang methylene asul na kahel na kaibahan sa maliwanag na berde o picric acid; ang una ay nagbibigay ng isang berdeng kulay sa background at ang pangalawa ay bumubuo ng isang dilaw na kulay.

Espesyal na Kinyoun Technique para sa Nocardias

Upang mapabuti ang paglamlam ng bakterya ng genus Nocardia isang ginagamit na pagbabago ng mantsa ng Kinyoun. Ang pamamaraan ay ang mga sumusunod:

1- Takpan ang smear sa Kinyoun carbol fuchsin sa loob ng 3 minuto.

2- Hugasan gamit ang distilled water.

3- Maikling pagkawasak na may acid alkohol na inihanda sa 3% hanggang sa hindi na madadala ang higit pang kulay.

4- Hugasan muli gamit ang distilled water.

5- Takpan ang paghahanda sa asul na methylene at hayaan itong kumilos ng 30 segundo.

6- Hugasan gamit ang distilled water at payagan upang matuyo ang hangin.

Ang pinagsamang carbol fuchsin at trichrome na pamamaraan na binago ni Didier

Inirerekomenda ang pamamaraang ito para sa pagtatasa ng mga sample ng dumi para sa coccidia at Microsporidium spores nang sabay. Ang pamamaraan na dapat sundin ay ang mga sumusunod:

1- Takpan ang smear sa Kinyoun carbol fuchsin sa loob ng 10 minuto.

2 - Alisin ang kulay at hugasan ng distilled water.

3- Pagpapaputi ng 30 segundo na may alkohol na hydrochloric acid.

4- Hugasan muli gamit ang distilled water.

5- Takpan ang smear na may solusyon ng trichrome sa loob ng 30 minuto sa 37 ° C.

6- Hugasan gamit ang distilled water.

7- Pagdurugo ng 10 segundo na may alkohol na acetic acid.

8- Hugasan ang pahid ng 30 segundo gamit ang 95% ethanol.

QA

Bilang isang positibong kontrol, ang mga smear na may Mycobacterium tuberculosis strains ay inihanda at marumi na may reagents na inihanda upang mapatunayan na ang bakterya ay kumukuha sa naaangkop na kulay (red-fuchsia).

Ang mga negatibong kontrol ay maaari ring magamit sa pamamagitan ng paghahanda ng mga smear na may anumang pilay maliban sa mabilis na acid ng alkohol, sa gayon pinapatunayan na ang buong sample ay kukuha ng magkakaibang kulay.

Kinyoun technique kumpara sa Ziehl-Neelsen technique

Ang pamamaraan ng Kinyoun ay mas simple dahil inaalis nito ang hakbang sa pag-init, ngunit ang pangunahing bentahe nito ay maiiwasan ang paglabas ng mga singaw, lubos na nakakalason at cancer-sanhi sa pangmatagalan. Samakatuwid, ang mantsa ng Kinyoun ay mas ligtas para sa paglamlam ng mga tauhan.

Mahalagang isaalang-alang na dapat alalahanin ang pangangalaga na ang mga reagents ay hindi nakarating sa direktang pakikipag-ugnay sa balat, dahil ang mga ito ay nakakadumi at ang pagpapaputi ay nasusunog.

Tulad ng para sa mga kawalan, ang isang negatibong smear ay hindi kinakailangang magpahiwatig na ang organismo ay hindi naroroon. Bukod dito, ang pagkakaroon ng mga cellular debris ay maaaring humantong sa mga maling positibo, na humahantong sa pagkalito sa diagnosis.

Sanggunian

1. Inilapat na Klinikal na Chemical. (2016). BK Kinyoun Kit.Available sa: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun stain at dalawang Coccidia sa HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Argentina. Editoryal Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. (Ika-5 ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Mga nag-aambag sa Wikipedia. "Kainoun stain." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8 Peb. 2018. Web. Ika-5 ng Enero.
6. Pagsamahin ang A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Pagpapatupad ng isang pamamaraan ng paglamlam para sa sabay na pagsusuri ng Coccidia at Microsporidia. Institute ng Kalinisan ng Unibersidad ng Republika. Montevideo. Uruguay. Magagamit sa: kalinisan.edu.uy