ZIEHL-NEELSEN STAIN: MAKATWIRAN, REAGENTS, AT PAMAMARAAN - BIOLOGY - 2025

Ang Ziehl-Neelsen isang diskarteng pangkulay upang makilala ang mga microorganism na lumalaban sa acid na alkohol (ARA). Ang pangalan ng pamamaraang ito ng microbiology ay tumutukoy sa mga may-akda nito: ang bacteriologist na si Franz Ziehl at ang pathologist na si Friedrich Neelsen.

Ang diskarteng ito ay isang uri ng pagkakaiba-iba ng paglamlam, na nagpapahiwatig ng paggamit ng iba't ibang mga tina upang lumikha ng kaibahan sa pagitan ng mga istruktura na nais mong obserbahan, pag-iba at mamaya makilala. Ang mantika ng Ziehl-Neelsen ay ginagamit upang makilala ang ilang mga uri ng mga microorganism.

Ziehl-Neelsen mantsang

Ang ilan sa mga organismo na ito ay mycobacteria (halimbawa, Mycobacterium tuberculosis), nocardia (halimbawa, Nocardia sp.), At ilang mga parasito na may cell-cell (hal., Cryptosporidium parvum). Marami sa mga bakterya ay maaaring maiuri sa pamamagitan ng isang karaniwang pamamaraan na tinatawag na Gram stain.

Gayunpaman, ang ilang mga grupo ng bakterya ay nangangailangan ng iba pang mga pamamaraan upang makilala ang mga ito. Ang mga pamamaraan tulad ng Ziehl-Neelsen stain ay nangangailangan ng mga kumbinasyon ng mga tina na may init upang ayusin ang dating sa cell wall.

Pagkatapos ay dumating ang isang proseso ng pagpapaputi na nagbibigay-daan para sa dalawang mga resulta: paglaban o pagiging sensitibo sa pagkawalan ng kulay ng mga acid at alkohol.

Batayan

Ang katwiran para sa diskarte sa paglamlam na ito ay batay sa mga katangian ng cell wall ng mga microorganism na ito. Ang dingding ay binubuo ng isang uri ng mga fatty acid na tinatawag na mycolic acid; Ang mga ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng pagkakaroon ng napakatagal na kadena.

Kung ang mga fatty acid ay may napakahabang mga istruktura, maaari silang mapanatili ang mga tina ng mas madali. Ang ilang mga bakteryang genera ay napakahirap na mantsang ng mantsa ng Gram, dahil sa mataas na nilalaman ng mycolic acid sa cell wall.

Ang mantsa ng Ziehl-Neelsen ay gumagamit ng phenolic compound carbol fuchsin, isang pangunahing mantsa. Ito ay may kakayahang makipag-ugnay sa mga fatty acid ng cell wall, na kung saan ay waxy sa texture sa temperatura ng silid.

Ang paglamlam ng Carbol fuchsin ay pinahusay sa pagkakaroon ng init, dahil natutunaw ang waks at ang mga molekula ng pangulay ay mas mabilis na gumagalaw sa pader ng cell.

Ang acid na ginagamit sa kalaunan ay nagsisilbi sa mga cell ng discolor na hindi marumi dahil ang kanilang dingding ay hindi sapat na nauugnay sa pangulay; samakatuwid, ang lakas ng acid bleach ay nagawang alisin ang pangulay ng acid. Ang mga cell na lumalaban sa discolorasyon na ito ay tinatawag na acid-fast.

Pangalawang kulay

Matapos ang pag-decolorization ng sample, pinagsama ito sa isa pang tina na tinawag na pangalawang tinain. Kadalasan, ginagamit ang methylene na asul o malachite green.

Ang pangalawang tinain na mantsa ang materyal ng background at dahil dito ay lumilikha ng kaibahan sa mga istruktura na nasaksak sa unang hakbang. Tanging ang mga selula ng discolored na sumisipsip ng pangalawang tinain (counterstain) at kinuha ang kanilang kulay, habang ang mga cell na mabilis na acid ay nagpapanatili ng kanilang pulang kulay.

Ang pamamaraang ito ay madalas na ginagamit para sa pagkilala sa Mycobacterium tuberculosis at Mycobacterium leprae, na kung saan ay tinatawag na acid-fast bacilli.

Mga Reagents

Pangunahing kulay

0.3% carbol fuchsin (na-filter) ay ginagamit. Ang dye na ito ay inihanda mula sa isang halo ng mga alkohol: phenol sa ethanol (90%) o methanol (95%), at sa halo na ito 3 gramo ng pangunahing fuchsin ay natunaw.

Solusyon sa pagpapaputi

Sa hakbang na ito, maaaring magamit ang mga solusyon ng 3% alkohol na acid o 25% sulfuric acid.

Pangalawang dye (counter-dye)

Ang pangulay na kadalasang ginagamit upang maihahambing ang mga sample ay karaniwang 0.3% na asul na methylene. Gayunpaman, ang iba ay maaari ring magamit, tulad ng 0.5% berde malachite.

Teknik

Pamamaraan sa mabilis na paglamlam ng acid

Maghanda ng isang smear ng bakterya

Ang paghahanda na ito ay ginagawa sa isang malinis, tuyo na slide, kasunod ng pag-iingat sa pag-iingat.

Pagpapatuyo ng pahid

Payagan ang smear na matuyo sa temperatura ng silid.

Init ang sample

Ang sample ay dapat na pinainit sa pamamagitan ng paglalapat ng apoy sa slide sa ibaba. Ang isang pag-aayos ng alkohol ay maaaring gawin kapag ang smear ay hindi pa inihanda gamit ang plema (ginagamot sa sodium hypochlorite upang maputi ito) at kung hindi ito agad na marumi.

Ang M. tuberculosis ay tinanggal na may pagpapaputi at sa proseso ng paglamlam. Ang pag-aayos ng init ng untreated plema ay hindi papatayin ang M. tuberculosis, habang ang pag-aayos ng alkohol ay bactericidal.

Takpan ang mantsa

Ang mantsa ay natatakpan ng solusyon ng carbol fuchsin (pangunahing pangunahing mantsa).

Init ang mantsa

Ginagawa ito sa loob ng 5 minuto. Dapat mong mapansin ang isang ebolusyon ng singaw (humigit-kumulang na 60 ° C). Mahalaga na huwag mag-overheat at maiwasan ang pagsunog ng sample.

Kaugnay ng pagpainit ng mantsa, dapat gawin ang mahusay na pangangalaga kapag pinainit ang carbol fuchsin, lalo na kung ang paglamlam ay isinasagawa sa isang tray o iba pang lalagyan na kung saan lubos na nasusunog na mga kemikal mula sa nakaraang paglamlam ay nakolekta.

Ang isang maliit na siga lamang ang dapat mailapat sa ilalim ng mga slide gamit ang isang dating litaw na swab na moistened na may ilang patak ng acidic na alkohol, methanol o 70% ethanol. Iwasan ang paggamit ng isang malaking swab na babad sa ethanol dahil ito ay isang peligro ng sunog.

Hugasan ang mantsa

Ang paghuhugas na ito ay dapat gawin sa malinis na tubig. Kung ang tubig na gripo ay hindi malinis, hugasan ang pahid na may nasala o distilled na tubig, mas mabuti.

Takpan ang smear na may acid na alkohol

Ang alkohol na acid na ito ay dapat na nasa 3%. Isinasagawa ang saklaw sa loob ng 5 minuto o hanggang sa ang smear ay sapat na na-discolored, kulay rosas na kulay rosas.

Dapat itong isaalang-alang na ang acidic na alkohol ay nasusunog; samakatuwid, dapat itong magamit nang mahusay na pag-aalaga. Iwasan ang pagiging malapit sa mga mapagkukunan ng pag-aapoy.

Hugasan ang mantsa

Ang paghuhugas ay dapat na may malinis, distilled water.

Takpan ang mantsa ng mantsa

Maaari itong maging malachite green (0.5%) o methylene blue (0.3%) mantsa ng 1 hanggang 2 minuto, gamit ang mas mahabang oras kung manipis ang pahid.

Hugasan ang mantsa

Muli ang malinis (distilled) na tubig ay dapat gamitin.

Upang maubos

Ang likod ng slide ay dapat malinis at ang mantsa na nakalagay sa isang rack ng paagusan upang payagan itong ma dry air (huwag gumamit ng sumisipsip na papel para sa pagpapatayo).

Suriin ang smear sa ilalim ng mikroskopyo

Ang layunin ng 100X at langis ng paglulubog ay dapat gamitin. I-scan ang sistemang pahid at i-record ang nauugnay na mga obserbasyon.

I-interpret ang mga resulta

Sa teoretiko, ang mga microorganism na may mantsa ng isang mapula-pula na kulay ay itinuturing na positibo na acid-mabilis (AAR +).

Sa kabaligtaran, kung ang mga microorganism ay may mantik na asul o berde, depende sa pangulay na ginamit bilang isang kontra-pangulay, ang mga ito ay itinuturing na negatibong negatibo (AAR-).

Mga Sanggunian

1. Apurba, S. & Sandhya, B. (2016). Mga Kahalagahan ng Practical Microbiology (1st ed.). Jaypee Brothers Medical Publisher.
2. Bauman, R. (2014). Microbiology na may mga Sakit sa pamamagitan ng Sistema ng Katawan (4th ed.). Edukasyon sa Pearson, Inc.
3. Pamana, J., Evans, E. & Killington, A. (1996). Panimula Microbiology (1st ed.). Pressridge University Press.
4. Morello, J., Granato, P. Wilson, M. & Morton, V. (2006). Manu-manong Laboratory at Workbook sa Microbiology: Aplikasyon sa Pangangalaga sa Pasyente (ika-11 ed.). Edukasyon ng McGraw-Hill.
5. Vasanthakumari, R. (2007). Teksto ng Mikrobiolohiya (ika-1 ng ed.). BI Publications PVT.