SIMMONS CITRATE AGAR: RATIONALE, PAGHAHANDA, AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang agar Simmons citrate ito ay isang solidong daluyan na ginagamit bilang mga microorganism test ng biochemical identification, lalo na ang gramo - negatibong bacilli. Ang orihinal na daluyan ay nilikha ni Koser noong 1923.

Koser Citrate medium ay binubuo ng isang sabaw na naglalaman ng sodium pospeyt, ammonium phosphate, monopot potassium phosphate, magnesium sulfate, at sodium citrate.

A. Ang Dehydrated Simmons Citrate Agar komersyal na daluyan B. Inihanda ang Simmons Citrate Agar. Pinagmulan: A. Larawan na kinunan ni MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios, mula sa Wikimedia Commons

Tulad ng nakikita, ang tanging mapagkukunan ng carbon sa daluyan ay citrate, at ang nitrogen ay ammonium phosphate, tinatanggal ang mga protina at karbohidrat bilang isang mapagkukunan ng mga elementong ito, karaniwang naroroon sila sa iba pang media.

Samakatuwid, ang bakterya na inoculated sa daluyan na ito ay maaari lamang magparami kung may kakayahang kumuha ng carbon mula sa citrate. Ang pagsubok ay positibo kung mayroong kaguluhan sa daluyan, gayunpaman mayroon itong kawalan na maaaring mangyari ang di-tiyak na kaguluhan.

Ang problemang ito ay nalutas ng Simmons sa pamamagitan ng pagdaragdag ng bromothymol na asul at agar sa orihinal na formula ni Koser. Bagaman ang prinsipyo ay pareho, naiiba ang kahulugan sa kahulugan nito.

Batayan

Ang ilang mga bakterya ay may kakayahang mabuhay sa kawalan ng pagbuburo o paggawa ng acid na lactic acid, na kinakailangang makakuha ng enerhiya sa pamamagitan ng paggamit ng iba pang mga substrate. Sa pagsubok na ito ang tanging pinagmulan ng carbon ay inaalok ay citrate.

Ang bakterya na maaaring mabuhay sa ilalim ng mga kondisyong ito ay mabilis na mag-metabolize ng citrate sa isang kahalili sa tradisyonal na ruta, gamit ang siklo ng tricarboxylic acid o ang siklo ng pagbubunga ng citrate.

Ang catabolism ng citrate sa pamamagitan ng bakterya ay nagsasangkot ng isang mekanismo ng enzymatic nang walang interbensyon ng coenzyme A. Ang enzyme na ito ay kilala sa pamamagitan ng pangalan ng citricase (citrate oxaloacetate-lyase) o citrate desmolase. Ang reaksyon ay nangangailangan ng pagkakaroon ng isang divalent cation, na sa kasong iyon ay ibinibigay ng magnesiyo.

Ang reaksyon ay bumubuo ng oxaloacetate at pyruvate, na pagkatapos ay nagbibigay ng pagtaas sa mga organikong acid sa gitna ng isang alkaline pH na nabuo sa pamamagitan ng paggamit ng mapagkukunan ng nitrogen. Ang mga organikong acid na ito ay ginagamit bilang isang mapagkukunan ng carbon na bumubuo ng mga carbonates at bicarbonates, na karagdagang pag-alkalize ng kapaligiran.

Mode ng Paghahasik

Ang Simmons citrate medium ay dapat na gaanong inoculated sa fishtail gamit ang isang tuwid na loop o karayom, at mapapaso ng 24 na oras sa 35-37 ° C. Pagkatapos ng oras, ang mga resulta ay sinusunod.

Ang seeding ay ginagawa lamang sa ibabaw ng agar. Huwag mabutas.

Pagbibigay kahulugan

Kung ang daluyan ay nananatiling orihinal na kulay (berde) at walang nakikitang paglaki, negatibo ang pagsubok, ngunit kung ang medium ay nagiging asul, ipinapahiwatig nito ang pagkakaroon ng mga produktong alkalina, na napansin ng tagapagpahiwatig ng pH. Sa pagkakataong ito ay positibo ang pagsubok.

Citrate (+) at (-). Pinagmulan: MSc. Marielsa gil

Nangyayari ito dahil kung ang bakterya ay gumagamit ng carbon ng citrate ay may kakayahang kunin din ang nitrogen ng ammonium phosphate na kung saan pinapalabas ang ammonia, alkalizing ang medium.

Sa kabilang banda, kung ang paglago ng bakterya ay sinusunod sa daluyan, ngunit walang pagbabago ng kulay, ang pagsusuri ay dapat ding isaalang-alang na positibo, dahil kung mayroong paglaki nangangahulugan na ang bakterya ay maaaring gumamit ng citrate bilang isang mapagkukunan ng carbon, bagaman walang pagbabago sa pH sa sandaling ito (kung minsan ay maaaring tumagal ng oras).

Kung mayroong anumang pag-aalinlangan sa pagpapakahulugan ng pangwakas na kulay, maaari itong ihambing sa isang tubo na walang inoculated tube.

Paghahanda

Tumimbang 24.2 g ng dehydrated medium para sa isang litro ng tubig. Paghaluin at hayaan itong magpahinga ng halos 5 minuto. Tapusin ang pag-dissolve ng daluyan sa pamamagitan ng pagpainit para sa 1 o dalawang minuto, madalas na nanginginig.

Ibuhos ang 4 ml sa mga tubo ng pagsubok at autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto. Kapag nag-iiwan ng autoclave, sumangguni sa tulong ng isang suporta sa isang paraan na ang agar ay solidify sa hugis ng isang flute beak na may maliit na bloke o ibaba at higit pa ng bevel.

Ang pangwakas na pH ng citrate medium ay 6.9 (berde na kulay). Ang daluyan na ito ay napaka-sensitibo sa mga pagbabago sa pH.

Sa pH 6 o sa ibaba, ang medium ay nagiging dilaw. Ang kulay na ito ay hindi sinusunod sa pagsubok ng bakterya.

At sa pH 7.6 o sa itaas, ang medium ay lumiliko ng malalim na asul na Prussian.

Gumamit

Ang Simmons Citrate Agar ay ginagamit para sa pagkilala sa ilang mga microorganism, lalo na ang bacilli na kabilang sa pamilya ng Enterobacteriaceae at iba pang bac glucose na walang glucose.

Pinagmulan: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.

Pangwakas na mga saloobin

Ang Simmons citrate medium ay isang maselan na pagsubok, dahil ang mga maling positibo ay maaaring makuha kung ang ilang mga pagkakamali ay nagawa.

Ang pangangalaga na dapat gawin ay ang mga sumusunod:

Inoculum

Ang isang napaka-makapal o na-load na bacterial inoculum ay hindi dapat gawin, dahil maaari itong maging sanhi ng isang tanso na kulay dilaw na bubuo sa lugar ng pagtatanim, nang hindi naaapektuhan ang natitirang daluyan, ngunit maaari itong humantong sa naniniwala na mayroong paglaki. Hindi ito nangangahulugang positivity ng pagsubok.

Gayundin, ang isang makapal na inoculum ay maaaring makabuo ng isang maling positibo, dahil ang mga organikong compound na preformed sa loob ng mga pader ng cell ng namamatay na bakterya ay maaaring maglabas ng sapat na carbon at nitrogen upang i-on ang tagapagpahiwatig ng pH.

Samakatuwid, ang mainam ay maghasik gamit ang karayom ​​sa halip na pangasiwaan ng platinum, upang maiwasan ang pagkuha ng labis na materyal.

Sown

Sa kabilang banda, kapag ang baterya ng mga pagsubok na biochemical para sa pagkilala ng microorganism na pinag-uusapan ay mahalaga, mahalaga na ang pagsusuri ng citrate ay ang unang mai-inoculated, upang maiwasan ang pagdala ng mga protina o karbohidrat mula sa ibang daluyan.

Sa ilalim ng sitwasyong ito posible na makakuha ng isang maling positibo, dahil ang alinman sa mga sangkap na ipinakilala sa pamamagitan ng pagkakamali ay masulit at magdulot ng pagbabago sa pH.

Ang isa pang paraan upang maiwasan ang pagdala ng mga sangkap ay upang sunugin nang mabuti ang loop at kumuha ng bagong inoculum sa pagitan ng isang pagsubok at isa pa.

Ang pangangalaga ay dapat ding gawin kapag hinahawakan ang kolonya upang maisagawa ang inoculum, dahil dapat itong iwasan na i-drag ang bahagi ng agar mula sa kultura kung saan nanggaling ang bakterya, dahil sa ipinaliwanag sa itaas.

Sa kahulugan na ito, inirerekumenda nina Matsen, Sherris at Branson na palayawin ang inoculum sa solusyon sa physiological bago inoculate ang citrate test upang maiwasan ang paglipat ng iba pang mga mapagkukunan ng carbon.

Lakas ng kulay

Dapat itong isaalang-alang na ang intensity ng kulay na ginawa kapag positibo ang pagsubok ay maaaring mag-iba ayon sa komersyal na bahay.

Bilang karagdagan, mayroong mga microorganism na sumusubok sa positibo sa 24 na oras, ngunit mayroong iba pang mga pag-uugali na nangangailangan ng 48 oras o higit pa upang makabuo ng isang pagbabago sa pH.

Mga Sanggunian

1. Mac Faddin J. (2003). Mga pagsubok sa biochemical para sa pagkilala ng mga bakterya na kahalagahan ng klinikal. 3rd ed. Editoryal Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
4. Mga Laboratoryo ng BD. BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015.Magagamit sa: bd.com
5. Britannia Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2016.Av magagamit sa: tekstoamedica.com.