STANDARD AGAR BEAD: RATIONALE, PAGHAHANDA AT GUMAGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang agar ay may pamantayan ay isang hindi pumipili, solidong daluyan ng kultura na idinisenyo para sa dami ng microbial load na naroroon sa mga aerobic sample na inuming tubig, basura ng tubig, inumin ng gatas, at iba pang mga pagkain. Ang daluyan na ito ay kilala rin bilang PCA agar, para sa acronym nito sa English Plate Count Agar. Ito ay nilikha noong 1953 ng Buchbinder, Baris, at Goldstein.

Ang standard count agar medium ay binubuo ng yeast extract, triptein, glucose, agar, at distilled water. Ang pagbabalangkas na ito ay naglalaman ng mga pangunahing elemento ng nutrisyon na nagbibigay-daan sa pag-unlad ng kasalukuyang aerobic microbial load, hindi hinihingi.

Ang mga desimal na panlabas para sa pagbibilang ng mga CFU sa mga karaniwang agar na bilang. Pinagmulan: Quentin Geissmann

Tulad ng medium ay hindi naglalaman ng mga inhibitor, ang bakterya ay maaaring lumago nang walang anumang mga paghihigpit, na ginagawang perpekto para sa pangkalahatang pagbibilang ng kolonya. Gayunpaman, ang diskarte sa dami ng plaka ay hindi makikilala ang lahat ng bakterya na naroroon, ngunit ang mga may kakayahang lumaki sa ilalim ng mga kondisyon ng kapaligiran na kung saan ang pamamaalam na pamantayan ng bilang ng agar ay sumailalim.

Sa ganitong kahulugan, ang diskarte sa dami ng plate na sa pangkalahatan ay naghahanap upang matukoy ang dami ng bakterya ng uri ng aerobic mesophilic, iyon ay, ang mga lumalaki sa temperatura sa pagitan ng 25 at 40 ° C, na may isang pinakamainam na temperatura ng paglago ng 37 ° C. .

Napakahalaga ng grupong ito ng bakterya, dahil ang karamihan sa mga pathogen bacteria para sa tao ay matatagpuan doon.

Dapat pansinin na kung minsan ay maaaring maging kawili-wili upang matukoy ang dami ng mga psychrophilic bacteria na naroroon sa pagkain. Ang mga bakteryang ito ay ang mga lumalaki sa mababang temperatura (<20 ° C) at may pananagutan upang maging sanhi ng pagkain na mabulok nang mas mabilis, kahit na palamig.

Gayundin, ang mga bakterya ng thermophilic, na bubuo sa isang saklaw sa pagitan ng 50 ° C hanggang 80 ° C o higit pa, ay maaaring maging mahalaga sa ilang mga uri ng pagkain tulad ng mga de-latang pagkain.

Ang pagsukat ng mikrobyo ay ipinahayag sa kolonya na bumubuo ng mga yunit (CFU) bawat gramo o milliliter ng sample.

Batayan

Ang karaniwang bilang ng daluyan ay idinisenyo upang pahintulutan ang matagumpay na paglaki ng mga di-mabilis na aerobic bacteria, dahil ang yeast extract, triptein at glucose ay nagbibigay ng mga kinakailangang nutrisyon para sa mahusay na paglaki ng microbial.

Sa kabilang banda, ang daluyan ay may isang ilaw na kulay at isang malinaw na hitsura, kung bakit ito ay mainam para sa paggunita ng mga kolonya na binuo ng malalim na pamamaraan ng seeding (pagbuhos sa isang plato).

Posible ang pagbibilang ng kolony ng Drigalski spatula surface seeding method.

Kapag mataas ang pagkarga ng microbial, dapat gawin ang mga desimal na pag-aaral ng sample ng pag-aaral upang mabilang ang mga CFU.

Dapat pansinin na ang daluyan na ito ay inirerekomenda ng American Public Health Association (APHA) para sa bilang ng mga aerobic mesophiles.

Paghahanda

Tumimbang ng 23.5 g ng dehydrated medium at matunaw sa isang litro ng distilled water. Upang matunaw nang lubusan, ang halo ay dapat na pinainit sa pamamagitan ng madalas na pagpapakilos hanggang sa kumulo. Ang mga sub-kasunod na hakbang ay nakasalalay sa pamamaraan ng seeding na gagamitin.

Para sa pour-plate technique

Ipamahagi sa pamamagitan ng dispensing 12 hanggang 15 ml sa mga tubo ng pagsubok. Kasunod nito, isterilisado sa isang autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto. Payagan na solidong patayo sa hugis ng isang bloke. Pagtabi sa ref hanggang sa gamitin.

Matunaw ang plug kapag gagamitin mo ito. Kapag natunaw, panatilihin ito sa isang paliguan ng tubig sa 44-47 ° C habang ang mga sample ay inihanda.

Para sa paghahasik sa ibabaw

Sterilize ang daluyan sa isang autoclave sa 121 ° C at pagkatapos ay ipamahagi ang 20 ml sa sterile pinggan Petri. Hayaan ang pagpapatibay, ibalik at mag-imbak sa refrigerator hanggang sa gamitin.

Ang mga plato ng temperatura bago gamitin. Ang pH ng daluyan ay dapat na 7.0 ± 0.2.

Gumamit

Ginagamit ang Standard Count Agar sa aerobic mesophilic counting technique sa panahon ng microbiological analysis ng tubig at pagkain. Ang bilang ng mga aerobic mesophiles ay kinakailangan, dahil tinutukoy nito ang kalidad ng sanitary ng sample sa ilalim ng pag-aaral.

Ang application ng pamamaraan na ito (gamit ang daluyan na ito) ay nagbibigay-daan sa macroscopic visualization ng mga nakahiwalay na kolonya para sa kanilang dami.

Plate ibuhos diskarte (lalim seeding)

-Process

Ang pamamaraan ay binubuo ng mga sumusunod:

1) Homogenize ang sample upang maipamahagi muli ang mga bacteria na naroroon.

2) Ang isang paunang pagsuspinde ay ginawa sa isang sterile na bote o bag, na iginagalang ang ratio ng 10 gr o 10 ml ng sample sa 90 ml ng diluent (10 ^-1 ).

3) Mula sa paunang pagsuspinde, ang nauugnay na desimal na desimal ay ginawa depende sa uri ng sample. Hal: (10 ^-2 , 10 ^-3 , 10 ^-4 ). Ang mga pantunaw ay ginawa gamit ang peptone water o pospeyt buffer.

Upang gawin ito, kumuha ng 1 ml ng paunang pagsuspinde at ilagay ito sa 9 ml ng diluent, ipagpatuloy ang mga pagbabawas kung kinakailangan, na kumukuha ng 1 ml ng 10 ^-2 pagbabanto at iba pa.

4) Kumuha ng 1 ml ng bawat pagbabanto at ilagay sa walang laman na sterile pinggan.

5) Idagdag sa bawat plato 12 hanggang 15 ml ng standard count agar dati natunaw at husay sa 44 - 47 ° C.

6) Dahan-dahang paikutin ang mga plato upang maipamahagi ang sample sa kahabaan ng pantay-pantay at payagan itong matatag.

7) I -vert ang mga plate at mag-incubate sa 37 ° C sa aerobiosis sa loob ng 24 hanggang 48 na oras.

8) Sa pagtatapos ng oras, ang mga plato ay nasuri at ang mga kolonya na binibilang sa pagbabanto na nagbibigay-daan sa ito. Ang mga plate na mayroon sa pagitan ng 30 hanggang 300 CFU ay pinili para sa bilang.

Ang pagbibilang ay maaaring gawin nang manu-mano o maaari mong gamitin ang kagamitan sa counter ng kolonya.

Ang mga halaga na pinapayagan bawat ML ng sample ay maaaring mag-iba mula sa isang bansa patungo sa isa pa depende sa mga regulasyon kung saan pinamamahalaan ang mga ito.

-Calculation ng UFC

Ang pangkalahatang pagkalkula ay ginagawa gamit ang sumusunod na formula:

Formula para sa pangkalahatang pagkalkula ng dami ng mga CFU. Pinagmulan: Pambansang Pangangasiwa ng mga Gamot, Pag-aari at Teknolohiyang Medikal (ANMAT). Microbiological analysis ng pagkain, opisyal na pamamaraan ng analitikal, mga microorganism ng tagapagpahiwatig. 2014 Dami 3. Magagamit sa: anmat.gov.ar

Ipahayag ang mga resulta sa 1 o 2 na numero, na pinarami ng naaangkop na base 10. Halimbawa: kung ang resulta ay 16,545, ito ay bilugan batay sa ikatlong digit hanggang 17,000 at ipapahayag ito tulad ng sumusunod: 1.7 x 10 ⁴ . Ngayon, kung ang resulta ay 16,436, bilugan ito sa 16,000 at ipahayag ang 1.6 x 10 ⁴ .

Teknikal na punla ng pang-ibabaw

-Process

-Inocular na may 0.1 ml ng direktang sample kung ito ay likido, paunang pagsuspinde 10 ^-1 o ng sunud-sunod na mga paglulunsad 10 ^-2 , 10 ^-3 atbp, sa gitna ng isang karaniwang count ng agar plate.

-Distributo ang halimbawang pantay-pantay sa isang Drigalski spatula o isang rod na may hugis na L. Hayaan itong magpahinga ng 10 minuto.

-Balikin ang mga plato at pag-incubate aerobically sa 37 ° C sa loob ng 24 hanggang 48 na oras.

-Proceed upang mabilang ang mga kolonya, piliin ang mga plate na nasa isang saklaw sa pagitan ng 20 - 250 CFU.

-Calculation ng UFC

Para sa pagkalkula, ang kadahilanan ng pagbabanto ay inilalapat, na kung saan ay ang kabaligtaran. Ang numero ay bilugan sa 2 makabuluhang mga numero (pag-ikot ayon sa pangatlong digit) at ipinahayag sa kapangyarihan ng base 10. Halimbawa, kung 224 CFU ay binibilang sa halimbawang walang pagbabanto (10 ^-1 ), 22 x 10 ¹ CFU ay iniulat , ngunit kung ang figure ay 225, 23 x 10 ¹ CFU ay iniulat.

Ngayon, kung ang 199 CFU ay nabibilang sa 10 ^-3 pagbabanto , 20 x 10 ⁴ CFU ay iuulat, ngunit kung 153 ang CFU ay mabibilang sa parehong pagbabanto, 15 x 10 ⁴ CFU ang maiulat.

QA

Ang karaniwang bilang ng medium medium culture ay maaaring masuri gamit ang mga kilalang sertipikadong strain, tulad ng: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC

Kung ang medium medium ay nasa pinakamainam na mga kondisyon, ang kasiya-siyang paglago ay inaasahan sa lahat ng mga kaso, maliban sa L. fermentum, na maaaring magkaroon ng isang regular na ani.

Upang suriin ang katatagan ng medium medium ng kultura, ang isa o dalawang plato ng bawat handa na batch (nang walang inoculation) ay dapat na mapulutan sa 37 ° C sa aerobiosis sa loob ng 24 na oras. Matapos ang oras na ito, walang paglago o pagbabago ng kulay ay dapat sundin sa medium.

Mga Limitasyon

-Hindi matunaw ang agar ng higit sa isang beses.

-Ang handa na daluyan ay maaaring tumagal ng hanggang sa 3 buwan hangga't ito ay pinananatiling sa isang refrigerator at protektado mula sa ilaw.

-Ang daluyan na ito ay hindi angkop para sa hinihingi o anaerobic microorganism.

Mga Sanggunian

1. Pambansang Pangangasiwaan ng mga Gamot, Teknolohiya ng Pagkain at Medikal (ANMAT). Microbiological analysis ng pagkain, opisyal na pamamaraan ng analitikal, mga microorganism ng tagapagpahiwatig. 2014 Dami 3. Magagamit sa: anmat.gov.ar
2. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Plate Count Agar. 2009.Magagamit sa: http://f-soria.es
3. Mga Laboratories ng Conda. Pamamaraan ng Pamantayang Agar (PCA) ayon sa APHA at ISO 4833. Magagamit sa: condalab.com
4. Britannia Laboratories. Agar plate count. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B at Velázquez O. 2009. Mga pamamaraan para sa Microbiological Pagsusuri ng Mga Pagkain. 2nd ed. Faculty ng Chemistry, UNAM. Mexico. Magagamit sa: depa.fquim.unam