Ang EMB agar ay isang pumipili at kaugalian medium na ginagamit para sa solidong paghihiwalay ng kultura ng Gram negatibong bacilli, lalo na ang Enterobacteriaceae at iba pang mga negatibong bakterya ng Gram. Kilala rin ito sa acronym EAM, na nangangahulugan ng asul na eosin-methylene.
Ang daluyong ito ay nilikha ng Holt-Harris at Teague noong 1916. Naglalaman ito ng peptone, lactose, sucrose, dipot potassium phosphate, agar, eosin, methylene blue, at tubig. Ito ay halos kapareho sa MacConkey Agar, lalo na kung gumagamit ng Modified EMB Agar ng Levine, na hindi naglalaman ng sukat.
Metallic gloss ng Escherichia coli sa EMB agar Pinagmulan: Carmen Moreno González, mula sa Wikimedia Commons
Sa katunayan, ang bawat laboratoryo ay nagpapasya kung upang gumana sa isa o sa iba pa, dahil tinutupad nila ang parehong pag-andar, bagaman naiiba ang biochemically.
Mayroon din itong kaparehong disbentaha bilang klasikong MacConkey agar sa mga tuntunin ng pag-swarming na gawa ng genus na Proteus. Samakatuwid, upang maiwasan ang hindi pangkaraniwang bagay na ito, ang konsentrasyon ng agar ay maaaring tumaas ng hanggang sa 5%.
Batayan
Pinili
Ang EMB agar ay walang pili na pumipili dahil naglalaman ito ng mga aniline dyes (eosin at methylene blue), na kumikilos bilang mga inhibitor, pinipigilan ang paglaki ng karamihan sa mga positibong bakterya ng Gram at ilang mga masidhing Gram na negatibong rod.
Gayunpaman, ang agar na ito ay may disbentaha na ang ilang mga positibong bakterya ng Gram ay maaaring pigilan ang pagkakaroon ng mga sangkap na pantulong at lumalaki bilang maliit na walang kulay na mga colony ng punctate, tulad ng Enterococcus faecalis at ilang Staphylococcus.
Ang ilang mga lebadura ay maaari ring lumago, tulad ng kumplikadong Candida albicans, na magbibigay ng napakaliit na kulay rosas na kolonya. Ang Chlamydospores ay maaari ring umunlad mula sa lebadura na ito kung ang sample ay malalim na punla.
Pagkakaiba-iba
Sa kabilang banda, ang EMB agar ay isang medium medium din, dahil ang mga tina na magkasama (eosin at methylene blue) ay may ari-arian na bumubuo ng isang pag-usisa sa acidic pH, samakatuwid nagsisilbi silang mga tagapagpahiwatig ng paggawa nito.
Sa gayon, mahina ang lactose o sucrose fermenting bacteria na gumawa ng mga lilang kolonya sa loob ng 24 hanggang 48 oras. Halimbawa ang genera na Klebsiella, Enterobacter at Serratia.
Ang mga bakteryang iyon na malakas na pagbuburo sa lactose, tulad ng Escherichia coli, o sukrosa, tulad ng Yersinia enterocolitica o Proteus penneri, ay bumubuo ng isang maberde-itim na pag-urong, na nagbibigay ng isang katangian na metal na hitsura ng ningning sa mga species na ito.
Dapat pansinin na kung ang EMB levine medium (nang walang sucrose) ay ginagamit, ang Yersinia enterocolitica at Proteus penneri ay gagawa ng malinaw na mga kolonya.
Ang mga bakterya na hindi pagbuburo sa lactose o sucrose ay pinapakain ng pagkakaroon ng mga peptones, na nagbibigay ng mga amino acid at nitrogen na kinakailangan para sa paglaki ng bakterya, at gumawa ng mga malinaw na kolonya. Halimbawa, ang genera na Salmonella at Shigella, bukod sa iba pa.
Gayundin, mahalagang tandaan na ang geninet ng Acinetobacter ay maaaring magpakita ng mga kolonya ng lavender-asul, kahit na hindi ito isang lactose fermenter o sucrose, ngunit may pag-aari ng pag-aayos ng methylene na asul sa dingding ng cell nito. Maaari rin itong mangyari sa iba pang mga bakterya na oxidative.
Paghahanda
Ang orihinal na dehydrated medium ay light beige na kulay.
Upang ihanda ang daluyan ng kultura na ito, ang 36 gramo ng dehydrated medium ay dapat timbangin at suspindihin sa isang basong naglalaman ng isang litro ng distilled water.
Matapos mapahinga ang halo sa loob ng 5 minuto, dalhin ang flask sa isang mapagkukunan ng init, paghaluin nang masigla at patuloy hanggang sa kumukulo ito at tuluyang matunaw.
Kasunod nito, ang natunaw na medium medium ay dapat isterilisado gamit ang autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.
Sa pagtatapos ng oras, tinanggal ito mula sa autoclave at naiwan upang tumayo nang saglit. Pagkatapos, mainit pa rin (45-50 ° C), ang 15-20 ml ng agar ay ihahain sa bawat sterile dish na Petri. Ang daluyan ay dapat na asul na litmus.
Matapos ihatid ang mga plato ay naiwan na bahagyang walang takip hanggang ang agar ay lumalamig nang bahagya. Pagkatapos ay sila ay sakop at pinahihintulutan na buuin ang buo. Kasunod nito, inayos ang mga ito sa mga may hawak na plate na nakabaligtad at nakaimbak sa isang ref (8 ° C) hanggang sa gamitin.
Ang pamamaraan na ito ay mas mabuti na isinasagawa sa isang laminar flow hood o sa harap ng isang Bunsen burner upang maiwasan ang kontaminasyon.
Mahalagang tandaan na ang bawat komersyal na bahay ay magpapahiwatig ng halagang dapat timbangin upang ihanda ang daluyan ng kultura.
Ang pangwakas na pH ng daluyan ay dapat na 7.2 ± 0.2
Aplikasyon
Ginagamit ang daluyan na ito upang maghasik ng ihi at feces o anumang uri ng ispesipikong klinikal, lalo na kung ang pagkakaroon ng di-masidhing Gram-negatibong bacilli ay pinaghihinalaang, tulad ng bacilli na kabilang sa pamilyang Enterobacteriaceae, na lumago nang maayos sa daluyan na ito.
Ang mga enteropathogenic na bakterya ng Shigella at Salmonella genera ay nakikilala sa pamamagitan ng kanilang walang kulay o bahagyang mga kolonya ng amber.
Ang iba pang mga di-lactose fermenting bacilli tulad ng Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, bukod sa iba pa, ay lumalaki din.
Gayundin, ang daluyan na ito ay lubos na kapaki-pakinabang sa pagsusuri ng microbiological ng pagkain at tubig, dahil ito ay mainam para sa kumpletong pagkumpirma na yugto ng pagpapasiya ng mga coliforms, iyon ay, upang i-corroborate ang pagkakaroon ng E. coli mula sa turbid na mga sabaw ng EC mula sa ng pinaka-malamang na pamamaraan ng numero (MPN).
QA
Upang mapatunayan na ang sariwang inihandang medium medium ay gumagana nang maayos, ang mga kontrol sa mga galaw ay maaaring itanim upang ma-obserbahan ang mga katangian ng mga kolonya at patunayan na ibinibigay nila tulad ng inaasahan.
Para sa mga ito, ang ATCC strains o kilalang mga kilay ng E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa at ilang mga Gram na positibong bakterya, tulad ng S. aureus, ay maaaring magamit.
E. coli ay inaasahan na makabuo ng mahusay na binuo asul-itim na mga kolonya na may berdeng metal na kinang. Samantalang, ang Enterobacter aerogenes at Klebsiella sp ay dapat magbigay ng maayos na binuo bluish-black na mauhog na kolonya.
Sa kabilang banda, ang Salmonella typhimurium at Shigella flexneri, ay dapat bumuo ng malalaking kolonya, walang kulay o may isang bahagyang kulay ng ambar.
Sa wakas, ang genus na Pseudomonas aeruginosa ay lumalaki bilang walang kulay na mga kolonya ng hindi regular na sukat, habang ang positibong bakterya ng Gram ay dapat na lubos na mapigilan o lumaki nang bahagya sa napakaliit na mga kolonya.
Pangwakas na mga saloobin
Minsan ang isterilisasyon ay nagiging sanhi ng bula ng methylene na asul, na nagpapakita ng isang daluyan na kulay ng kahel. Upang ang asul na methylene na mag-oxidize at mabawi ang lilang kulay, dapat itong ihalo nang malumanay hanggang makuha ang kulay.
Gayundin, pagkatapos isterilisasyon ang pangulay ay maaaring tumubo, kaya dapat itong ihalo nang mabuti bago ihain ang mga pinggan ng Petri.
Mga Sanggunian
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B at Velázquez O. 2009. Mga pamamaraan para sa Microbiological Pagsusuri ng Mga Pagkain. 2nd ed. Faculty ng Chemistry, UNAM. Mexico.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Pag-uugali at Pamamahagi ng Potensyal na Patogenikong Escherichia coli na Strains na Nababukod mula sa mga Broiler Chickens mula sa Mga Pakainitang Bukid sa Peru. Rev. Investiga. gamutin ang hayop Peru 2012 23 (2): 209-219. Magagamit sa: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Eosin at Methylene Blue Agar. 2010. Magagamit sa: condalab.com
- Britannia Laboratories. Levine EMB (Sa Eosin at Methylene Blue) 2011.At magagamit sa: britanialab.com
- Mga Laboratoryo ng BD. BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Binago. 2013.Magagamit sa: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. (Ika-5 ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editoryal Panamericana SA