MAAYOS NA HARINA AGAR: BACKGROUND, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang agarwa ng mais na pagkain ay isang solidong daluyan ng kultura, mababang lakas ng nutrisyon, kapaki-pakinabang para sa subculturing ng ilang fungi at para sa pagpapakita ng mga chlamydospores sa mga strain ng Candida albicans complex. Sa Ingles kilala ito bilang Corn Meal Agar.

Ang maginoo na cornmeal medium ay may isang napaka-simpleng komposisyon, naglalaman ito ng mais, agar-agar at tubig. Dahil sa mababang antas ng nutritional, mainam ito para magamit sa pagpapanatili ng mga fungal strains para sa katamtaman na tagal ng panahon, lalo na ang mga itim na fungi.

A. Graphic na representasyon ng Candida albicans Complex sa agar na harina ng mais. B. Chlamydospores ng Candida albicans Complex na nakikita sa ilalim ng mikroskopyo, na nabuo sa gawing cornmeal. Pinagmulan: A. GrahamColm / B. Ni: CDC / Dr. William Kaplan, Kagandahang-loob: Public Library Image Library.

Ang sporulation ng Candida albicans complex ay napaboran sa medium na ito, kung ang 1% ng Tween 80 ay idinagdag sa paghahanda ng agar. Ang pagbuo ng mga chlamydospores ay katangian ng species na ito at praktikal lamang ang nakakaapekto sa mga tao.

Mayroong iba pang mga species na bumubuo ng mga chlamydospores, ngunit hindi nila malamang na maapektuhan ang mga tao, tulad ng Candida australis, na naroroon sa mga penguin droppings, o C. clausenii, na kung saan ay isang bihirang natagpuan saprophyte. Gayundin, bukod sa mga species C. stellatoidea at C. tropicalis ay maaaring mabuo ang mga ito.

Sa kabilang banda, ang pagdaragdag ng glucose sa medium ng cornmeal ay pinapaboran ang pagbuo ng mga pigment sa mga strain ng trichophytom rubrum.

Mahalagang i-highlight na mayroong mga fungi na hindi bumubuo ng hyphae o pseudohyphae sa mga mais na mais, tulad ng Cryptococcus neoformans, na naiiba sa iba pang mga genera.

Maaaring gawin ang agar para sa mais sa bahay sa laboratoryo o komersyal na media.

Batayan

Ang Cornmeal ay ang substrate, ang agar ay ang solidifying agent, at ang tubig ay ang solvent.

Ang mga agarmong mais ay maaaring pupunan ng tween 80 (sorbitan monooleate o polysorbate polyester 80). Ang tambalang ito ay binabawasan ang pag-igting sa ibabaw ng daluyan dahil sa emulsifying power nito.

Lumilikha din ito ng isang mapusok na kapaligiran na pumipigil sa pinalaking pagpaparami ng cell at pinasisigla ang paglaki ng hyphae, pinapaboran din ang paggawa ng mga chlamydospores; ang huli ay itinuturing na mga istruktura ng paglaban. Ang istraktura na ito ay tumutulong sa pagkilala sa mga species ng Candida albicans.

Para sa bahagi nito, pinapataas ng glucose sa medium na ito ang kapasidad na bumubuo ng pigment ng ilang fungi.

Dapat pansinin na ang medium ng cornmeal na may glucose ay hindi kapaki-pakinabang para sa pagpapakita ng mga chlamydospores sa Candida albicans complex.

Paghahanda

Paghahanda ng Agar na Paghahanda ng gawang bahay

Tumimbang ng 47 g ng dilaw na harina ng mais at matunaw sa 500 ml ng distilled water. Init hanggang 60 º C, habang pinupukaw ang paghahanda para sa isang panahon ng humigit-kumulang na 1 oras. Pagkatapos ay i-filter sa pamamagitan ng isang piraso ng gasa at koton, opsyonal na maaari itong mai-filter muli sa pamamagitan ng pagpasa ng paghahanda sa pamamagitan ng isang Whatman No. 2 filter na papel.

Gawing up ang dami sa 1000 ml na may distilled water. Magdagdag ng 17 g ng agar-agar, init hanggang matunaw. Autoclave para sa 15 minuto sa 121 ºC.

Paglilingkod sa sterile pinggan Petri. Mag-imbak sa isang refrigerator.

Ang kulay ng handa na daluyan ay maputi na may isang bukol na hitsura.

Kung nais mong maghanda ng harina ng mais na may glucose sa paghahanda na inilarawan sa itaas, magdagdag ng 10 g ng glucose.

Komersyal na harina ng mais

Tumimbang ng 17 g ng dehydrated medium at matunaw sa 1 litro ng distilled water. Ang pinaghalong ay maaaring pinainit, nanginginig nang malumanay upang matunaw nang ganap. Sterilize sa isang autoclave sa 121 ºC, sa 15 lb, sa loob ng 15 minuto.

Ibuhos sa sterile pinggan Petri. Hayaan ang matatag. Bumalik at mag-imbak sa ref hanggang sa gamitin. Ang temperatura bago gamitin.

Ang pH ay dapat na 6.0 ± 0.2 sa 25 ºC.

Maayos na harina para sa Tween 80

Upang sumunod sa ISO 18416, dapat na ihanda ang mga gawing cornmeal tulad ng mga sumusunod:

Tumimbang ng 65 gramo bawat litro at magdagdag ng 10 ml ng Tween 80. Init at pakuluan ng ilang minuto hanggang sa matunaw, alagaan ang hindi labis na pagkain ng labis. Sterilize sa 121 ºC sa loob ng 15 minuto.

Maayos na harina agar na may glucose

Upang mapagbuti ang chromogenous na kapangyarihan ng mga kolonya ng Trichophyton rubrum at pag-iba-iba ang mga ito mula sa T. mentagrophytes, ang 0.2% glucose ay maaaring idagdag sa orihinal na pormula. Hindi mo kailangang magkaroon ng Tween 80, dahil pinipigilan ng glucose ang pagbuo ng mga chlamydospores.

Gumamit

Pangunahin, ang paggamit ng corn flour agar ay inilaan para sa pag-aaral ng mga Candida strains, na tumutulong sa kanilang pagkakakilanlan sa pamamagitan ng katangian ng pagmamasid ng mga chlamydospores sa mga species ng albicans. Iyon ay, ang paggamit ng agar na ito ay nagsisilbing isang pantulong na pamamaraan ng pagkilala sa mga lebadura na ito.

Ang parehong mga saprophytic at pathogenic species ay maaaring umunlad sa agar na ito, ngunit ang bawat anyong form na mga mycelial na istruktura. Halimbawa, ang mga species ng genus Torulopsis ay hindi gumagawa ng mycelium at nagparami lamang ng blastoconidia.

Gayundin, ang species ng Trichosporon at Geotrichum ay gumagawa ng arthroconidia sa agar para sa cornmeal at kung minsan ay mahirap makilala sa pagitan ng isa at iba pa.

Ang Arthroconidia ng genus na Geotrichum ay gumagawa ng isang extension ng hyphae na kahawig ng isang hockey stick.

Gayundin ang paggawa ng mga pigment gamit ang harina ng mais agar na pupunan na may glucose ay kapaki-pakinabang sa pagkilala ng Trichophytom rubrum.

Sown

Ang kahinahinalang mga kolonya ng Candida na nakuha sa pangunahing daluyan ng kultura - Sabouraud agar - mula sa mga klinikal na sample, kosmetiko, mga lupa, bukod sa iba pa, ay naka-subculture sa agar na harina ng mais. Ang medium ay seeded at incubated sa 22 ° C para sa 24 hanggang 48 na oras. Ang oras ng pagpapapisa ng itlog ay maaaring mapahaba kung kinakailangan.

Demonstrasyong Chlamydospore

Para sa layuning ito, ang agar na harina para sa Tween 80 ay dapat na inoculated gamit ang Dalmau technique. Ang pamamaraang ito ay binubuo ng pagkuha ng isang bahagi ng pinaghihinalaang kolonya na may paghawak ng platinum at paggawa ng tatlong magkakatulad na pagbawas sa gitna, na pinapanatili ang hawakan sa 45º. Ang mga pagbawas ay dapat na paghiwalayin ng isang distansya ng 1 cm mula sa bawat isa.

Kasunod nito, ang isang dati na nasusunog na takip-takip ay inilalagay sa mga guhitan na naihasik, upang ang kalahati ay natatakpan at ang iba ay walang takip.

Isama ang mga binhing mga plato sa 30 ° C para sa 48-72 h at pagkatapos ay suriin sa ilalim ng mikroskopyo sa pamamagitan ng takip na takip.

Pagpapanatili ng mga fungal strains

Para sa pagpapanatili ng mga strain, ang mga seeded at lumalaking mga plato ay itinatago sa isang ref (4 hanggang 8 ºC). Sa ganitong paraan maaari silang magtagal ng ilang linggo at magamit para sa mga layunin sa pagtuturo o pananaliksik.

QA

Para sa control ng sterility, ang isang plato ay natutuyo nang walang inoculation sa temperatura ng silid, inaasahan na walang magiging paglago o pagbabago ng kulay.

Para sa kontrol sa kalidad, ang mga kilalang mga galaw ay maaaring itanim tulad ng: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Ang inaasahang resulta ay bahagyang pagsugpo para sa S. aureus at E. coli. Habang ang isang kasiya-siyang paglago ay inaasahan sa natitirang bahagi ng mga galaw.

Ang Aspergillus niger ay lumalaki na may mga itim at sporulated colony sa isang tinatayang oras ng 5 araw ng pagpapapisa ng itlog.

Ang mga kolonya ng lebadura ng Candida albicans na may paggawa ng chlamydospore.

Ang mga Saccharomyces cerevisiae ay gumagawa ng malalaking cell ng lebadura.

Mga Limitasyon

Ang isang dilaw na mga pag-aayos ng dilaw sa ilalim ng plato na hindi dapat malito sa mga kolonya.

Mga Sanggunian

1. Neogen Laboratories. Maayos na Meal Agar. Magagamit sa: foodsafety.neogen.com.
2. Media Media Microkit. Maayos na Meal Agar. Magagamit sa: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Patnubay sa Pagkilala sa Yeast. Magagamit sa: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Kalusugan ng Publiko, 2002; 19 (4): 206-208. Magagamit sa: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Pangkalahatang Mycology. 1994. 2nd Ed. Central University ng Venezuela, Mga Edisyon sa Library. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Paghahambing ng pag-aaral ng ilang mga pamamaraan ng macro at mikroskopiko para sa paghihiwalay at pagkilala sa genus na Candida. Ang Colombian Rev. ng Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33-57. Magagamit sa: Ciencias.unal.edu.co