Ang agar Endo o Endo medium ay isang solidong daluyan, pagkakaiba at may ilang antas ng kultura ng pagpili. Ang orihinal na pormula ay nilikha ni Endo noong 1904 upang makilala ang pagkakaiba-iba ng lactose-fermenting mula sa mga bakterya na hindi pagbuburo. Sa una ito ay dinisenyo para sa pag-ihiwalay ng Salmonella typhi, ngunit kalaunan ang layunin ng daluyan ay bumaling sa paghahanap para sa mga coliform.
Ang prinsipyo ng Endo Agar ay nanatili, ngunit ang pagbabalangkas nito ay sumailalim sa hindi mabilang na mga pagbabago sa mga nakaraang taon. Sa kasalukuyan, ang daluyan ay binubuo ng peptic digest ng tissue ng hayop, lactose, dipot potassium hydrogen phosphate, sodium sulfite, basic fuchsin, at agar.
A: Virgin Endo Agar B: Binhi ng Endo Agar, sa gitna ng agar maaari mong mapansin ang metallic shine ng isang E. coli strain. Pinagmulan: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Ang pangunahing paggamit ng daluyan ay naka-link sa paghihiwalay at pagkakaiba ng Gram negatibong bacilli na kabilang sa pamilya ng Enterobacteriaceae at sa iba pang malapit na pamilya.
Sa loob ng mahabang panahon ginamit ito sa pagtuklas ng mga coliform sa tubig, pagawaan ng gatas at mga sample ng pagkain, ngunit ngayon ang paggamit ng daluyan na ito ay inilipat ng iba na may mga katulad na pag-andar. Gayunpaman, ginagamit ng ilang mga laboratoryo ng microbiology ang agar para sa paghihiwalay ng Enterobacteriaceae mula sa mga sample ng pinagmulan ng klinikal.
Batayan
Ang endo agar ay naglalaman ng mga peptones na nagsisilbing mapagkukunan ng mga amino acid, nitrogen, carbon at enerhiya, na kinakailangan para sa paglaki ng mga undemanding microorganism.
Sa kabilang banda, ang bahagyang pumipili ng character ng agar ay ibinibigay ng pagdaragdag ng sodium sulfite at pangunahing fuchsin; ang parehong mga bahagi bahagyang o ganap na pagbawalan ang paglaki ng karamihan ng Gram positibong bakterya.
Ang kaugalian na character ay ibinibigay sa pamamagitan ng pagkakaroon ng maaaring mag-fermentable na karbohidrat, na sa kasong ito ay lactose at pangunahing fuchsin, na nagsisilbi ring tagapagpahiwatig ng pH.
Ang mga bakteryang gram-negatibo na lumalaki sa agar na ito at may kakayahang mag-ferment ng lactose ay bubuo ng malakas na kulay rosas na kolonya; pagiging pathognomonic ng Escherichia coli ang pagbuo ng maitim na pulang kolonya na may isang iridescent greenish metallic luster. Ito ay dahil sa mataas na paggawa ng mga acid mula sa pagbuburo ng karbohidrat.
Dapat pansinin na ang daluyan sa paligid ng mga kolonya ay lumiliko din ng isang malakas na kulay rosas. Samantalang ang di-lactose fermenting Gram negatibong rods ay bumubuo ng maputla na kulay rosas na kolonya na katulad ng daluyan o walang kulay.
Ang Dipot potassium hydrogen phosphate ay nagbabalanse sa pH ng medium at agar ay ang sangkap na nagbibigay ng solidong pagkakapare-pareho.
Paghahanda
Endo agar
Tumimbang ng 41.5 g ng dehydrated medium at matunaw sa 1 litro ng distilled water. Painitin ang pinaghalong na may madalas na pagpapakilos hanggang sa kumpletong pagkabulok ng daluyan. Sterilize sa autoclave sa 121 ° C, sa 15 lb pressure, sa loob ng 15 minuto.
Kapag nag-alis mula sa autoclave, payagan na palamig sa isang temperatura na humigit-kumulang na 45-50 ° C, iling ang halo upang homogenize bago maghatid. Ibuhos ang 20 ml sa sterile pinggan Petri.
Payagan ang mga plato na palakasin, ibalik at mag-imbak sa isang plaquero o balot ng madilim na papel bago itago sa ref. Napakahalaga na protektahan ang handa na daluyan mula sa direktang ilaw. Ang isang pinakamahusay na kasanayan ay upang ihanda ang eksaktong dami na kakailanganin mo.
Kung naka-imbak sa isang refrigerator, ang mga plato ay dapat payagan na magpainit bago gamitin.
Ang pH ng daluyan ay dapat na nasa pagitan ng 7.2 hanggang 7.6 at ang kulay ng handa na daluyan ay maputla na rosas.
M-Endo agar variant
May isa pang bersyon ng Endo agar (m-Endo) na sumusunod sa pormula ng McCarthy, Delaney at Grasso, na naglalaman ng maraming mga compound at nag-iiba sa anyo ng paghahanda.
Ang variant na ito ay naglalaman ng: lactose, tryptose, enzymatic digest ng casein, enzymatic digest ng animal tissue, sodium chloride, dibasic potassium phosphate, sodium sulfite, yeast extract, monobasic potassium phosphate, basic fuchsin, sodium deoxycholate, lauryl sulfate sodium at agar.
Sa kasong ito, 51 g ng dehydrated medium ay timbang at nasuspinde sa 1 litro ng distilled water na naglalaman ng 20 ml ng ethanol.
Init nang bahagya habang pinapakilos hanggang sa ganap na matunaw ang medium. Hindi ito dapat maiinit at hindi dapat mai-autoclaved. Kapag ang halo ay homogenous, maglingkod sa mga sterile na pinggan ng Petri at payagan na palakasin.
Gumamit
Sa ilang mga bansa, ginagamit pa rin ito upang mabilang ang mga fecal coliforms sa mga sample ng pagkain at tubig, lalo na ang pagkakaroon ng Escherichia coli bilang pangunahing tagapagpahiwatig ng fecal contamination.
Inirerekomenda ng M-Endo Agar ng American Public Health Association (APHA) para sa pagsubaybay at kontrol ng mga programa sa paggamot ng pagdidisimpekta at wastewater, pati na rin sa pagsusuri ng kalidad ng inuming tubig.
Ang pinaka-malawak na ginagamit na pamamaraan ay ang pagsasala ng lamad, pagkatapos pagyamanin ang sample na may sabaw ng Lauryl sulfate sa loob ng 2 hanggang 4 na oras.
Maaari rin itong magamit bilang kapalit ng EMB agar sa microbiological analysis ng pagkain at tubig sa pamamagitan ng pinaka-malamang na pamamaraan ng numero (MPN), partikular sa kumpletong yugto ng pagkumpirma upang pagwasto ang pagkakaroon ng E. coli mula sa maulap na sabaw ng EC.
QA
Ang mga kilalang o sertipikadong mga kontrol na kontrol ay inihasik upang masuri ang kalidad ng nakahanda na batch ng Endo agar.
Kabilang sa mga pilay na maaaring magamit para sa hangarin na ito ay: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 117003 .
Ang mga pag-iilaw ay nahihinuha ng pagkapagod at napapawi sa 37 ° C sa loob ng 24 na oras sa aerobiosis.
Ang inaasahang resulta ay:
- Para sa Escherichia coli: malakas na pulang kolonya, na may metal na kinang.
- Para sa E. cloacae at K. pneumoniae ang mga kolonya ay dapat na pink mucoid.
- Sa kaso ng S. typhimurium, S. flexneri at P. mirabilis, ang mga kolonya ay karaniwang maputla rosas o walang kulay.
- Sa wakas, ang E. faecalis ay inaasahan na bahagyang mapigilan, samakatuwid ang paglaki nito ay dapat na mahirap na may napakaliit, malakas na kulay-rosas na kolonya.
Mga Limitasyon
-Endo medium ay may mababang pumipili ng kapangyarihan, samakatuwid, posible na ang ilang mga Gram na positibong mikroorganismo tulad ng Staphylococcus, Enterococcus at kahit na mga lebadura ay maaaring tumubo.
-Ang ibang bacilli na hindi kabilang sa Pamilyang Enterobacteriaceae ay maaaring makabuo sa daluyan na ito, tulad ng Pseudomonas sp at Aeromonas sp. Ang mga katangian ng mga strain na ito ay walang kulay na hindi regular na mga kolonya.
-Ang inihanda na daluyan na ito ay napaka-sensitibo sa ilaw, samakatuwid, ang matagal na pagkakalantad sa ito ay sumisira sa sistema ng tagapagpahiwatig, hindi mapapawi ang pagkasira ng daluyan.
-Ang mga bahagi ng daluyan ay itinuturing na carcinogenic, samakatuwid ang direktang pakikipag-ugnay ay dapat iwasan.
-Ang dehydrated medium ay napaka hygroscopic at dapat itago sa orihinal nitong lalagyan sa temperatura ng silid, mahigpit na sarado at sa isang dry na kapaligiran.
Mga Sanggunian
- Mga Laboratoryo ng BD. Endo Agar. 2013.Magagamit sa: bd.com
- Neogen Laboratories. M Endo Agar. Magagamit sa: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 7 Sep 2017, 08:27 UTC. 28 Peb 2019, 22:55. Magagamit sa: en.wikipedia.
- Laboratory ng MercK. Endo agar. 2019.Magagamit sa: merckmillipore.com
- Teknikal na Sheet Laboratories. M –Endo Agar LES. 2015.Magagamit sa: liofilchem.net