MÜELLER HINTON AGAR: BATAYAN, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang Mueller Hinton Agar ay hindi pumipili, solidong daluyan ng nutrisyon ay binubuo ng pagbubuhos ng karne, peptone acid casein, starch, agar at distilled water. Pinapayagan ng medium na ito ang mahusay na paglago ng microbial para sa pinaka mabilis na lumalagong bakterya.

Ito ay orihinal na nilikha ni John Howard Müeller at Jane Hinton upang ibukod ang nutritional na humihingi ng mga bakterya tulad ng Neisseria gonorrhoeae at Neisseria meningitidis. Gayunpaman, dahil sa mga katangian nito, ito ay naging perpekto para sa pag-aaral ng pagkamaramdamin sa mga antibiotics, na nagbibigay ng maaasahan at maaaring kopyahin na mga resulta.

Antibiograms (Müeller Hinton agar). Pinagmulan: Dr Graham Beards sa en.wikipedia

Samakatuwid, ang Müeller Hinton agar ay ang medium medium na tinanggap ng Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) at ang European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing, para sa pagganap ng antimicrobial susceptibility test ng Kirby disk pagsasabog pamamaraan at Bauer.

Batayan

Ang pagiging isang di-pumipili na nutritive medium, napakahusay para sa paglaki ng karamihan sa mga pathogen bacteria.

Sa kabilang banda, ang simpleng komposisyon nito ay ginagawang madali ang pagkakalat ng mga sangkap nito, na isang mahalagang katangian para sa pagsubok sa pagkamaramdamin sa pamamaraang disk pagsasabog.

Ang isa pang katangian nito ay naglalaman ng isang mababang halaga ng mga inhibitor, na nagpapahintulot sa sulfonamides, trimethoprim at tetracyclines na masuri na mabisa.

Gayunpaman, dapat tandaan na ang medium ay dapat matugunan ang ilang mga kundisyon upang matiyak ang wastong paggana nito, kabilang ang:

Ang pagsasaayos ng pH, ang lalim ng agar at ang naaangkop na konsentrasyon ng thymine, thymidine, Ca ⁺⁺ , Mg ⁺⁺ at Zn ⁺⁺ .

Kailangan mo ring malaman na ang pamamaraan ay isinulat sa pamantayan at samakatuwid ang lahat ng mga parameter ay dapat matugunan, tulad ng:

Ang konsentrasyon ng inoculum, konsentrasyon at pag-iingat ng mga antibiotic disc, ang paglalagay ng naaangkop na bilang ng mga disc sa agar, ang distansya sa pagitan ng isang disc at isa pa, ang estratehikong paglalagay ng ilang mga antibiotics, ang kapaligiran, ang temperatura at ang oras ng pagpapapisa ng itlog.

Paghahanda

Tumimbang ng 37 g ng dehydrated Müeller Hinton medium at matunaw sa 1 litro ng distilled water. Pinainit ang daluyan habang pinapakilos upang makatulong sa pagkabulok. Pakuluan ng 1 minuto.

Autoclave upang isterilisado sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto. Kapag tinatanggal mula sa autoclave, ang flask ay dapat ilagay sa isang paliguan ng tubig sa 50 ° C upang palamig. Ibuhos ang 25 hanggang 30 ml sa sterile 10 cm diameter Petri pinggan.

Ang mga plato ay dapat na may isang average na kapal ng 4 mm (perpekto), isang hanay ng 3-5 mm ang pinapayagan.

Kung nais itong maghanda ng agar agar ng dugo gamit ang Müeller Hinton agar bilang isang basehan, ibuhos ang 5% sterile at defibrinated na dugo ng tupa bago maghatid sa mga plato.

Ang pangwakas na pH ng daluyan ay dapat na nasa pagitan ng 7.2 hanggang 7.4.

Mamuhunan at mag-imbak sa isang ref, hanggang sa gamitin. Payagan ang plato na dumating sa temperatura ng silid bago gamitin.

Ang kulay ng handa na daluyan ay light beige.

Aplikasyon

Ginagamit ito upang maisagawa ang pagsubok ng antibiogram o antibiotic na pagkamaramdamin para sa pinaka mabilis na lumalagong mga hindi hinihingi na mga pathogens.

Kung ang agar ay pupunan ng dugo, ginagamit ito upang isagawa ang antibiogram na hinihingi ang mga microorganism tulad ng: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, bukod sa iba pa. Ginamit din ito upang ihiwalay ang Legionella pneumophila.

Diskarteng Antibiogram

Bago isagawa ang antibiogram, dapat na ihanda ang isang solusyon ng bakterya na katumbas ng 1.5 x 10 ^{8 na mga} cell.

Para sa mga ito, ang 3 hanggang 4 na kolonya ng purong kultura ay kinukuha at nasuspinde sa isang soybean trypticase na sabaw o sa sabaw ng Müeller Hinton, na natubuan ng 2 hanggang 6 na oras at ang konsentrasyon ay nababagay sa sterile na asin, paghahambing nito sa pamantayang Mac Farland ng 0.5%.

Kung hinihingi nila ang mga microorganism, ang mga kolonya ay maaaring suspindihin nang direkta hanggang sa isang konsentrasyon ng 0.5% Mac Farland. Kasunod nito, ang plato ng Müeller Hinton ay nakatanim ng isang pamunas na pinapagbinhi gamit ang handa na solusyon sa bakterya.

Upang gawin ito, ang pamunas ay nalubog sa solusyon at pagkatapos ang labis na likido ay tinanggal sa pamamagitan ng pagpindot laban sa mga dingding ng tubo. Kaagad pagkatapos nito, ang pamunas ay ipinasa sa buong ibabaw, walang iniiwan na mga lugar, pagkatapos ay ang plate ay bahagyang pinaikot at ito ay muling nahihinuha. Ang operasyon ay paulit-ulit ng 2 beses.

Hayaang tumayo ng 10 minuto at pagkatapos ay ipasok ang mga antibiotic disc na may isang sterile forceps, na nag-iiwan ng 24 mm na agwat sa pagitan nila. Matapos ilagay ang bawat disc sa agar, pindutin nang simple ang bawat disc sa mga forceps upang matiyak na maayos silang sumunod.

Kapag natapos ang proseso, ang plato ay nababaligtad at nahumaling sa 35-37 ° C sa aerobiosis sa loob ng 16 hanggang 18 na oras. Kung ito ay isang hinihinging microorganism, maaaring merito ang microaerophilia at kung ang antibiogram ay naglalaman ng mga disc ng oxacillin, dapat itong basahin pagkatapos ng 24 na oras.

Ang isang pinuno ay ginagamit upang masukat ang lapad ng bawat halo. Ang mga resulta ay dapat na naitala sa mm. Kasunod nito, ang mga halagang nakuha ay nakakaugnay sa mga talahanayan ng mga cutoff point na inilathala ng kasalukuyang manu-manong CLSI.

Pagsukat ng halo ng pagsugpo. Pinagmulan: USCDCP, Pixnio.com

Iulat ang bilang sensitibo (S), intermediate (I), o lumalaban (R), kung ano ang maaaring mangyari.

Ang mga antibiotics ay pinili ayon sa nakahiwalay na microorganism at ang uri ng impeksyon na ginagawa nito.

Minsan ang estratehikong paglalagay ng mga antibiotics ay dapat tandaan na magbunyag ng mga pattern ng paglaban sa phenotypic.

Ang paglalagay ng madiskarteng disk sa Müeller Hinton agar

Para sa enterobacteria, ang clavulanic acid disc ay dapat mailagay laban sa ika-3 at ika-4 na henerasyon na cephalosporins. Ang isang malawak na hugis ng itlog ay nagpapahiwatig na ang pilay ay isang tagagawa ng pinalawak na spectrum beta-lactamases (ESBL). Nangangahulugan ito na ang pasyente ay hindi dapat tratuhin ng anumang cephalosporins.

Ang expression ng Phenotypic ng pinalawig na spectrum na beta-lactamase (ESBL) sa isang strain ng Escherichia coli. Pinagmulan: Larawan na kinunan ng may-akda na si MSc. Marielsa gil

Sa Staphylococcus mahalagang ilagay ang erythromycin o azithromycin disk sa harap ng clindamycin disk (D-test).

Ang isang lumalaban na halo sa erythromycin at isang pagyupi sa halo ng clindamycin ay nagpapahiwatig na ang pilay ay nagtataglay ng pilit na hindi maipakikitang paglaban ng clindamycin (ICR). Nangangahulugan ito na ang isang paggamot ng clindamycin ay hindi magiging epektibo.

Upang maghanap para sa hindi maipakikitang mga galaw ng AMP C sa Enterobacteriaceae at ilang mga non-fermenting Gram na negatibong rods, tazobactan ceftazidime, cefoxitin, o piperacillin disc ay nahaharap laban sa isang imipenem disc, sa layo na 27 mm.

Ang isang flattened halo sa isa sa mga disk na nakaharap sa imipenem ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng hindi mailarawang AMP C.

Para sa paghahanap para sa constitutive C-AMP, isang 500 µg cloxacillin disk ay nahaharap sa ceftazidime (30 )g) at may cefotaxime (30 )g), sa layo na 25 mm. Ang isang pinalawak na halo sa alinman sa mga cephalosporins ay nagpapahiwatig ng positivity.

Ang disk na cloxacillin ay maaari ring mapalitan ng isang 9 mm disk ng Whatman No. 6 filter na papel na pinapagbinhi ng phenyl boric acid (400 µg) na may distansya na 18 mm. Ito ay binibigyang kahulugan ng katulad ng nauna.

Sa wakas, upang siyasatin ang paggawa ng mga metallobetalactamases lalo na sa Pseudomonas aeruginosa, isang disc na pinapagbinhi na may 10 µl ng ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA 750 µg) at thioglycolic acid (SMA 300 µg) ay ginagamit, na kung saan ay kinakaharap ng mga imipenem at meropenem discs, sa layo na 15 mm.

Ang pagsubok ay positibo kung mayroong pagpapalawak ng imipenem o meropenem halos patungo sa EDTA / SMA disk. Ang resulta na ito ay dapat kumpirmahin ng binagong pagsubok sa Hodge.

Ang pamamaraang ito ay binubuo ng pag-inoculate ng isang Escherichia coli ATCC 25922 pilay sa plato Müeller Hinton. Ang isang imipenem disk ay inilalagay sa gitna ng plato at pagkatapos ay isang guhitan ay ginawa mula sa disk papunta sa periphery kasama ang pinaghihinalaang P. aeruginosa pilay. Hanggang sa 4 na mga strain ay maaaring masuri bawat plate.

Ang pagsubok ay magiging positibo kung mayroong isang zone ng pagbaluktot ng imipenem halo sa paligid ng marka ng kahabaan.

Mga sanhi ng maling mga resulta

- Ang mahinang pinangalagaang mga antibiotic disc ay maaaring gumawa ng maling pagtutol. Halimbawa, ang oxacillin disk ay madaling masugatan sa mga pagbabago sa temperatura.

-A pH ng daluyan sa ibaba na ipinahiwatig (acidic) ay gumagawa ng mas maliit na halos sa aminoglycosides at macrolides (peligro ng maling pagtutol), at mas malaking halos sa penicillin, tetracycline at novobiocin (peligro ng maling sensitivity).

-Kung ang pH ay nasa itaas na ipinahiwatig (alkalina) ang mga epekto na inilarawan sa itaas ay baligtad.

-Media na may mataas na thymine at thymidine na konsentrasyon ay may impluwensya sa pamamagitan ng makabuluhang pagbabawas ng pagsugpo halos ng sulfonamides at trimethoprim.

-Ang matitinding konsentrasyon ng calcium at magnesium ay gumagawa ng maling pagtutol ng aminoglycosides, polymyxin B at tetracyclines laban sa mga strain ng Pseudomonas aeruginosa.

-Ang mga konsentrasyon ng calcium at magnesium ay gumagawa ng mga maling sensitivity ng aminoglycosides, polymyxin B at tetracyclines laban sa mga strain ng Pseudomonas aeruginosa.

-Ang pagkakaroon ng sink ay nakakaapekto sa mga resulta ng mga carbapenem disc (imipenem, meropenem at ertapenem).

-Media kapal sa ibaba 3mm ay gumagawa ng mga maling resulta ng sensitivity, habang ang kapal sa itaas ng 5 ay gagawa ng maling pagtutol.

-Ang pagpapakilos ng mga disc sa antibiogram ay magbibigay ng halos mga deformed, dahil ang pag-alis ng mga antibiotics ay kaagad.

- Napaka mahina ng mga inoculum na nakakaapekto sa mga resulta, dahil hindi magkakaroon ng isang uniporme o matulungin na paglaki sa agar, isang kinakailangang kondisyon upang masusukat ang halos pagbuga, bilang karagdagan sa katotohanan na ang halos ay maaaring magbigay ng mas malaki kaysa sa normal.

-Overly load inocula ay maaaring magbigay halos mas maliit kaysa sa normal.

-Walang respeto sa distansya sa pagitan ng mga disc na nagiging sanhi ng isang halo upang mag-overlap sa isa pa at hindi nila mababasa nang tama.

-Incubate na may CO _{2 ay} nagdaragdag ng laki ng halos mga tetracycline at methicillin disc.

-Incubate sa temperatura sa ibaba 35 ° C ay gumagawa ng mas malaking halos.

-Ang pagdaragdag ng dugo ay bumababa sa laki ng sulfa halo.

Limitasyon

Ang sensitivity ng isang antibiotic na ipinakita sa antibiogram laban sa isang microorganism (sa vitro) ay hindi isang garantiya na gagana ito sa vivo.

QA

Upang malaman kung ang medium ay naglalaman ng sapat na halaga ng thymine, ang isang pilay ng Enterococcus faecalis ATCC 29212 ay dapat itanim at ang pagkamaramdamin sa trimethoprim sulfamethoxazole (SXT) ay dapat masuri, dapat itong magbigay ng isang halo na katumbas o / 20 mm upang maging kasiya-siya.

Mga Sanggunian

1. "Müller-Hinton agar." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 16 Nov 2018, 12:23 UTC. 27 Jan 2019, 04:22
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
3. Cona E. Mga Kondisyon para sa isang mahusay na pag-aaral sa pagkamaramdamin sa pamamagitan ng agar diffusion test. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
4. Ang Laborco Francisco Soria Melguizo Laboratory. Müeller Hinton agar na may 5% na dugo ng tupa. 2009.Magagamit sa: http://f-soria.es
5. Ang BD Müeller Hinton II Agar Laboratory. 2017.Magagamit sa: .bd.com
6. Britannia Laboratories. Müeller Hinton agar. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
8. Martínez-Rojas D. AmpC-type betalactamases: Mga heneralidad at pamamaraan para sa pagtuklas ng phenotypic. Si Rev. Soc. Ven. Microbiol. 2009; 29 (2): 78-83. Magagamit sa: scielo.org.
9. Perozo A, Castellano M, Ling E, Arraiz N. Phenotypic detection ng metallobetalactamases sa mga klinikal na pagbubukod ng Pseudomonas aeruginosa. Kasmera, 2012; 40 (2): 113-121. Magagamit sa: scielo.org.