AGAR MRS: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang agar MRS ay isang selective solid medium medium na ginagamit para sa paghihiwalay at enumeration ng lactic acid bacteria, lalo na sa genus na Lactobacillus. Ang agar na ito ay nilikha noong 1960 nina Man, Rogosa at Sharpe, na naglalaman ng parehong pangalan, ngunit dahil sa pagiging kumplikado nito, ang pagdadaglat na MRS ay madalas na ginagamit.

Ito ay binubuo ng proteose peptone, extract ng karne, yeast extract, glucose, sorbitan monoleate, dipot potassium phosphate, sodium acetate, ammonium citrate, magnesium sulfate, manganese sulfate, at agar.

Sina Man Rogosa at Sharpe Agar (MRS) ay binhing may Lactobacillus sp. Pinagmulan: Photo naibigay para sa artikulong ito ng mga may-akda: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Larawan na kinunan sa pagsisiyasat na pinamagatang: Pagsusuri ng bakterya ng lactic acid at Bifidobacteria na may probiotic potensyal sa gatas ng suso at mga sanggol na dumi ng tao. .

Pinapayagan ng komposisyon na ito ang wastong pag-unlad ng bakterya ng lactic acid mula sa mga klinikal na sample, tulad ng feces, vaginal discharge, oral sample at breast milk, pati na rin ang pagawaan ng gatas at karne.

Hindi ito ginagamit nang regular sa mga klinikal na laboratoryo, dahil ang bakterya ng lactic acid ay bihirang kasangkot sa mga proseso ng sakit. Gayunpaman, sa lugar ng microbiology ng pagkain, mas madalas ang paggamit ng MRS agar.

Sa kabilang banda, ang daluyan na ito ay ginagamit ng ilang mga Sentro ng Pananaliksik na ang layunin ay ang pag-aaral ng mga bakterya ng lactic acid.

Batayan

Ang tao, Rogosa at Sharpe agar ay may isang medyo kumplikadong komposisyon. Sa pamamagitan ng pagsira sa pag-andar ng bawat bahagi nito, maipaliwanag ang pundasyon nito.

Ang peptone ng protina, katas ng karne, katas ng lebadura at asukal ay mga nutrisyon na nagbibigay ng mapagkukunan ng carbon, nitrogen, bitamina at mineral na kinakailangan para sa paglaki ng bakterya. Bukod dito, ang glucose ay ang unibersal na mapagkukunan ng enerhiya na ginagamit sa karamihan ng media media.

Sa kabilang banda, upang mapabor ang paglaki ng mga bakterya ng lactic acid, ang pagkakaroon ng cofactors (cations) na mahalaga sa metabolismo ng Lactobacillus at mga kaugnay na bakterya ay kinakailangan; Ang mga compound na ito ay ang sodium, magnesium, at manganese salts.

Gayundin, ang sorbitan monoleate o polysorbate 80 ay isang mahalagang mapagkukunan ng mga fatty acid dahil sila ay nasisipsip bilang mga nutrisyon.

Bilang karagdagan, ang sorbitan monoleate at ammonium citrate ay kumikilos sa pamamagitan ng pag-iwas sa pagbuo ng kasamang flora, lalo na ang Gram negatibong bakterya, na nagbibigay ng pumipili na katangian ng agar na ito.

Sa wakas, ang agar-agar ay ang nagbibigay ng solidong pare-pareho sa medium.

Mayroong iba pang mga variant ng Man Rogosa Sharpe agar; ang isa sa mga ito ay ang isa na pupunan ng cysteine ​​(MRSc), lubhang kapaki-pakinabang para sa paghihiwalay ng bifidobacteria, bukod sa iba pang mga microorganism. Sa kabilang banda, mayroong MRS medium na pupunan ng neomycin, paromomycin, nalidixic acid at lithium chloride, espesyal para sa napiling pagbibilang ng bifidobacteria sa mga produktong pagawaan ng gatas.

Paghahanda

Timbang 68.25 gramo ng dehydrated medium at matunaw sa isang litro ng distilled water. Hayaang tumayo ng 5 minuto. Upang matunaw nang lubusan, lumiko sa isang mapagkukunan ng init, madalas na pagpapakilos, at pakuluan ng 1 hanggang 2 minuto. Sterilize sa isang autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.

Kapag umalis sa autoclave, payagan na tumayo nang ilang minuto at ipamahagi habang mainit pa rin sa sterile pinggan Petri.

Payagan na palakasin at baligtarin ang mga plato, mag-order sa mga rack ng plate at palamig hanggang magamit. Payagan ang mga plato na magpainit sa temperatura ng silid bago gamitin.

Ang pH ng daluyan ay dapat na 6.4 ± 0.2. Inirerekomenda ng ilang mga komersyal na bahay ang pH sa pagitan ng 5.5 hanggang 5.9.

Ang dehydrated medium ay beige na kulay at handa ay madilim na ambar.

Ang parehong dehydrated medium at ang handa na mga plato ay dapat na nakaimbak sa 2-8 ° C.

Aplikasyon

Ang mga plato ng MRS agar ay maaaring maging puno ng balat (pagkapagod o Drigalski spatula). Maaari rin itong maihasik nang malalim. Ang mga plato ay dapat na ma-incubated sa 37 ° C sa microaerophilicity (4% O ₂ at 5-10% CO ₂ ) sa loob ng 24 hanggang 72 na oras.

Ang pamamaraan ng paghahasik ay napili alinsunod sa hangarin na hinabol (paghihiwalay o pagbibilang).

Mga katangian ng mga kolonya

Ang mga presumptive colonies ng Lactobacillus ay namumuti ang kulay at may isang mucoid o creamy na hitsura sa agar na ito. Dapat silang makilala pagkatapos.

Paghiwalay ng mga bakterya ng lactic acid

Para sa mga ito, ginagamit ang ground seeding. Ang mga sample na itinanim ay nangangailangan ng isang nakaraang pamamaraan.

Sa kaso ng mga sample ng suso ng suso, inirerekomenda na isentro sa 1 ml ng sample sa 14,000 rpm para sa 10 minuto, upang maalis ang mataba na layer. 900 µl ay itinapon, at sa natitirang 100 µl ang sediment ay nasuspinde at ibinuhos sa ibabaw ng agar ng MRS.Ito ay dapat na maipamahagi nang pantay-pantay sa isang Drigalski spatula.

Sa kaso ng mga sample ng dumi, ang isang (1) gramo ng dumi ng timbang ay tinimbang at homogenized sa 9 mL ng 0.1% sterile peptone na tubig, na naaayon sa isang 1/10 pagbabanto. Pagkatapos ay ang mga serial dilutions ay ginawa, hanggang sa isang pangwakas na pagbabanto ng 10 ^{-4 ay nakuha} .

Sa wakas, 100 μl ng 10 ^-2 , 10 ^-3 at 10 ^{-4 na mga} lasaw ay kinuha at ang bawat pagbabanto ay nakatanim sa MRS agar, namamahagi nang pantay-pantay sa isang Drigalski spatula.

Nagbilang ang mga bakterya ng Lactic acid

Sa kasong ito ang paghahasik ay ginagawa nang malalim.

Para sa mga sample ng suso, ang 1 mL ay kinuha at inilalagay sa isang sterile conical plastic tube. Ang MRS agar ay idinagdag sa isang tinatayang temperatura ng 40 ° C sa isang pangwakas na dami ng 25 ML, nakakakuha ng isang homogenous na halo. Kasunod nito, ibinuhos ito sa sterile pinggan Petri sa isang pantay na paraan at pinapayagan na tumayo hanggang polimerisasyon.

Para sa mga sample ng dumi, ang mga panlabas ay ginawa, tulad ng inilarawan dati. Kumuha ng 1 ML ng bawat pagbabanto at ilagay ito sa sterile conical plastic tubes. Ang Molten MRS agar ay idinagdag sa isang dami ng 25 ML.

Ang halo ng bawat pagbabanto ay ibinuhos nang pantay-pantay sa sterile pinggan Petri. Sa wakas, ito ay naiwan upang magpahinga hanggang sa polimerisasyon.

Colony umasa sa Man Rogosa at Sharpe (MRS) agar. Pinagmulan: Photo naibigay para sa artikulong ito. May-akda: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Larawan na kinunan sa panahon ng Pananaliksik na pinamagatang: Pagsusuri ng mga bakterya ng lactic acid at Bifidobacteria na may probiotic potensyal sa gatas ng dibdib at mga feces ng sanggol.

Antas ng pananaliksik

Araw-araw ang pag-aaral ng mga bakterya ng lactic acid ay nakakakuha ng mas maraming interes; Lalo na nais ng mga mananaliksik na malaman ang tungkol sa mga bagong strain at ang kanilang potensyal bilang starter ferment para sa standardisasyon sa paggawa ng mga produktong gatas, bukod sa iba pang mga gamit.

Sa kahulugan na ito, Alvarado et al. (2007) ginamit ang MRS agar upang maisagawa ang isang pag-aaral kung saan sila naghiwalay, nakilala at nakikilala ang mga bakterya ng lactic acid na nasa isang artisanal na Venezuelan Andean pinausukang keso.

Sa keso natagpuan nila ang pagkakaroon ng bakterya ng Lactococcus at Lactobacillus genera, at napagpasyahan na ang mga mixtures ng nakahiwalay na mga galaw ay angkop bilang mga starter strains sa paggawa ng mga cheeses mula sa pasteurized milk.

Sa kabilang banda, si Sánchez et al. (2017) ginamit ang MRS agar upang siyasatin ang pagkakaroon ng bakterya ng lactic acid sa digestive tract ng piglet, upang magamit ang mga ito bilang katutubong probiotics na nagpapataas ng pagiging produktibo ng malusog na piglet.

Sa daluyong ito pinamamahalaan nilang ihiwalay ang apat na species: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae at Pediococcus pentosaceus.

Gayundin, si Báez et al. (2019) ginamit ang MRS agar upang masuri ang lactic acid bacteria (LAB) at bifidobacteria na may potensyal na probiotic sa gatas ng suso at mga feces ng sanggol.

Nagawa nilang ihiwalay ang 11 BAL at 3 Bifidobacteria sp sa dibdib ng gatas, at 8 BAL at 2 Bifidobacteria sp. sa feces. Natugunan ng lahat ang ilang mga parameter na nagpapatunay sa kanila bilang mga bakterya na may probiotic na aktibidad.

Napagpasyahan ng mga may-akda na ang parehong gatas ng suso at feces mula sa eksklusibong mga sanggol na may suso ay nagsisilbing natural na mapagkukunan ng mga probiotic bacteria.

QA

Upang masuri ang kalidad ng MRS agar, kontrolin ang mga hibla tulad ng:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli at Bacillus.

Ang inaasahang resulta ay kasiya-siyang paglago para sa unang 6 na bakterya, habang ang E. coli at Bacillus cereus ay dapat na lubusang pipigilan.

Mga Sanggunian

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Paghihiwalay, Pagkilala at Pag-uugali ng Lactic Acid Bacteria ng isang Venezuelan na pinausukang Andean Artisan Cheese. Ang Paggamit nito bilang isang Kultura ng Starter. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Magagamit sa: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro paghihiwalay ng Lactic Acid Bacteria mula sa Digestive Tract ng Piglet. Rev. Investiga. gamutin ang hayop Peru 2017; 28 (3): 730-736. Magagamit sa: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Pagsusuri ng mga bakterya ng lactic acid at Bifidobacteria na may potensyal na probiotic sa gatas ng suso at feces ng mga sanggol sa munisipyo ng Acevedo, Miranda 2017. Ang undergraduate na trabaho upang maging kwalipikado para sa degree ng Bachelor sa Bioanalysis. Unibersidad ng Carabobo, Venezuela.
4. Laboratoryo ng Britannia. MRS agar. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
5. Mga nag-aambag sa Wikipedia. MRS agar. Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. Enero 10, 2018, 19:44 UTC. Magagamit sa: wikipedia.org Nasuri noong Pebrero 17, 2019.
6. Roy D. Media para sa paghihiwalay at pagbilang ng bifidobacteria sa mga produktong pagawaan ng gatas. Int J Pagkain Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.