SABOURAUD AGAR: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang agar Sabouraud , na kilala rin bilang Sabouraud dextrose agar, ay isang solidong daluyan, lalo na pinayaman para sa paghihiwalay at pagbuo ng mga fungi, tulad ng lebadura, mga hulma at dermatophytes.

Samakatuwid, ang daluyan na ito ay hindi maaaring kulang sa isang laboratoryo ng microbiology upang siyasatin ang pagkakaroon ng mga pathogen o oportunistang fungi, mula sa mga klinikal o di-klinikal na mga sample. Gayundin, mainam din para sa paglaki ng mga filamentous bacteria tulad ng Streptomyces at Nocardias. Malawak ang paggamit nito, dahil maaari itong magamit sa tao, hayop, halaman at pang-industriya na mycology.

A. Unseeded Sabouraud agar. B. Sabouraud agar seeded na may lebadura. Pinagmulan: Mga larawan na kinunan ng may-akda na MSc. Marielsa gil

Ang daluyong ito ay nilikha noong 1896 ng kilalang dermatologist na si Raimond Sabouraud, na naging dalubhasa sa mundo na espesyalista sa mga karamdaman ng anit, pangunahin sanhi ng mga dermatophytes.

Ang paglikha nito ay napakahalaga na ito ay ginamit mula pa noon at nananatili ngayon, bagaman may ilang mga pagbabago.

Kahit na ito ay espesyal para sa fungi, ang bakterya ay maaaring lumago sa daluyan na ito, samakatuwid, para sa mga sample na may halo-halong flora, ang pagsasama ng mga antibiotics sa kanilang paghahanda ay kinakailangan upang mapigilan ang paglaki ng bakterya na flora na maaaring naroroon.

Ang pagpili ng antibiotic ay dapat gawin nang maingat at isinasaalang-alang ang uri ng fungus na mababawi, dahil ang ilan ay hinarang sa pagkakaroon ng ilang mga sangkap.

Batayan

Ang Sabouraud dextrose agar ay isang daluyan na sa orihinal na pagbabalangkas nito ay mahina na pumipili, dahil sa acidic na PH na 5.6 ± 0.2, gayunpaman, ang bakterya ay maaari pa ring umunlad, pangunahin sa matagal na pagpapaputok.

Ang medium ay naglalaman ng casein peptone at pancreatic digest ng tissue ng hayop, na nagbibigay ng mapagkukunan ng carbon at nitrogen para sa paglaki ng mga microorganism.

Naglalaman din ito ng isang mataas na konsentrasyon ng glucose, na kumikilos bilang isang mapagkukunan ng enerhiya, na nagtataguyod ng paglaki ng fungi sa bakterya. Ang lahat ng ito ay halo-halong sa agar-agar, isang sangkap na nagbibigay sa tamang pagkakapare-pareho.

Sa kabilang banda, ang Sabouraud dextrose agar ay maaaring mapili kung idinagdag ang mga antibiotics.

Sa mga antibiotics lalo na ito ay kapaki-pakinabang sa mga halimbawa ng mga sugat, bukas na ulser o anumang sample kung saan pinaghihinalaang ang mahusay na kontaminasyon ng bakterya.

Ang mga karaniwang ginagamit na kumbinasyon ng Sabouraud dextrose agar na may mga antibiotics

-Saburaud agar na may chloramphenicol: mainam para sa pagbawi ng mga lebadura at mga filamentous fungi.

- Sabouraud agar na may gentamicin at chloramphenicol: halos lahat ng mga filamentous fungi at yeast ay lumalaki sa daluyan na ito, at pinipigilan nito ang isang malaking bilang ng mga bakterya, kabilang ang Enterobacteria, Pseudomonas at Staphylococcus.

- Sabouraud agar na may cycloheximide: ito ay kapaki-pakinabang lalo na para sa mga sample mula sa balat o sa respiratory tract, basta ang hinala ay dimorphic fungi.

Ang Cycloheximide ay dapat gamitin nang may pag-iingat; Bagaman ginagamit ito upang mapigilan ang paglaki ng mga non-pathogeniko o fungi at kapaligiran na maaaring naroroon bilang mga kontaminado sa isang sample, pinipigilan din nito ang paglaki ng ilang fungi tulad ng Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp at iba pang mga oportunidad na fungi.

- Sabouraud agar na may chloramphenicol kasama ang cycloheximide: ginagamit ito pangunahin upang ibukod ang mga dermatophyte at dimorphic fungi. Mayroon itong kawalan na pumipigil sa ilang mga species ng mga oportunistang fungi tulad ng Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes o C. neoformans.

- Sabouraud agar na may chloramphenicol, streptomycin, penicillin G at cycloheximide: mainam para sa mga sample na labis na nahawahan ng mga bakterya at saprophytic fungi, ngunit may kawalan na pumipigil sa paglaki ng Actinomyces at Nocardias, bilang karagdagan sa mga oportunistang fungi na nabanggit sa itaas.

Paghahanda

Kung magkahiwalay ka ng mga sangkap, maaari itong ihanda tulad ng sumusunod:

Sabouraud dextrose agar

Timbangin:

- 40 gr ng dextrose

- 10 g ng peptone

- 15 gr ng agar-agar

- Sukatin ang 1000 ml ng distilled water

Ang lahat ng mga sangkap ay halo-halong, ang pH ay nababagay sa 5.6. Ang mga solute ay natutunaw sa pamamagitan ng kumukulo, 20 ml ng daluyan ay ipinamamahagi sa mga tubo na 25 x 150 mm, nang walang rim at mas mabuti na may isang takip na koton.

Mga tubo na may cotton cap. Pinagmulan: Larawan na kinunan ng may-akda na si MSc. Marielsa gil

Ang iba pang mga laki ng tubo ay maaari ding magamit, depende sa pagkakaroon.

Sila ay autoclaved para sa 10 minuto sa isang kapaligiran ng presyon (121 ° C). Ang oras ng autoclaving ay hindi dapat lumampas. Kapag umaalis sa autoclave, ang mga tubo ay nakakiling sa tulong ng isang suporta hanggang sa solidong ito sa isang tuka ng plauta.

Ang isa pang paraan ay upang matunaw ang mga sangkap sa pamamagitan ng pag-init hanggang sa kumulo. Ang Autoclave sa loob ng 10 minuto sa parehong vial at pagkatapos ay ipamahagi ang 20 ml sa pinggan ng Petri.

Kung mayroon kang isang medium medium na Sabouraud dextrose na naglalaman ng lahat ng mga sangkap, magpatuloy upang timbangin ang halaga na tinukoy ng komersyal na kumpanya para sa isang litro ng tubig. Ang natitirang mga hakbang ay pareho sa mga inilarawan sa itaas.

Sabouraud dextrose agar (Pagbago ng Emmons)

Timbangin:

- 20 gr ng dextrose

- 10 g ng peptone

- 17 gr ng agar-agar

- Sukatin ang 1000 ml ng distilled water

Ang lahat ng mga sangkap ay halo-halong, ang pH ay nababagay sa 6.9. Magpatuloy sa parehong paraan tulad ng nakaraang kaso.

May mga komersyal na bahay na nag-aalok ng daluyan sa lahat ng mga sangkap. Sa kasong ito, timbangin at maghanda tulad ng inilarawan sa insert.

Sabouraud dextrose agar (Emmons modification) na may chloramphenicol

Chloramphenicol Stock Solution

- Timbang 500 mg ng base sa chloramphenicol

- Sukatin ang 100 ml ng 95% ethanol

- Paghaluin

Ang Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) ay inihanda tulad ng dati na inilarawan at karagdagan sa bawat litro ng daluyan magdagdag ng 10 ml ng solusyon ng stock ng chloramphenicol bago ang autoclaving.

Sabouraud Emmons Dextrose Agar kasama ang Cycloheximide

Cycloheximide Stock Solution

- Tumimbang ng 5 gr ng cycloheximide

- Sukatin ang 100 ml ng acetone

- Paghaluin

Ang Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) ay inihanda tulad ng na inilarawan at karagdagan sa bawat litro ng daluyan magdagdag ng 10 ml ng cycloheximide stock solution bago autoclaving.

Sabouraud dextrose agar (Emmons) na may chloramphenicol at cycloheximide

Ang Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) ay inihanda tulad ng na inilarawan at Bukod pa sa bawat litro ng daluyan magdagdag ng 10 ml ng solusyon ng stock ng chloramphenicol at 10 ml ng solusyon ng stock ng cycloheximide bago ang autoclaving.

Iba pang mga antibiotics na maaaring maidagdag

20,000 hanggang 60,000 mga yunit ng penicillin bawat litro ng daluyan.

30 mg ng streptomycin bawat litro ng daluyan.

Ang parehong ay dapat na isama pagkatapos ng daluyan ay na-autoclaved, bahagyang pinalamig (50-55 ° C).

0.04 g ng neomycin bawat litro ng daluyan.

0.04 g ng gentamicin bawat litro ng daluyan.

Mga espesyal na pagsasaalang-alang

Para sa kaligtasan, mas pinipili ang maghasik ng Sabouraud dextrose agar sa mga tubo na may hugis ng wedge (hilig sa flute beak) kaysa sa pinggan ng Petri, upang maiwasan ang pagkalat at paglanghap ng mga spores.

Mahalaga na ang mga tubo ng Sabouraud agar ay sakop ng koton at hindi sa isang takip ng tornilyo, dahil ang mga kundisyon na semi-anaerobic ay ipinakita upang mapigilan ang pagbuo ng spore sa ilang mga strain, halimbawa Coccidioides immitis. Gayundin, ang karamihan sa fungi ay aerobic.

Sa kaso ng paggamit ng takip ng takip, huwag isara ang hermetically.

QA

Ang handa na media ay dapat sumailalim sa kontrol sa kalidad upang mapatunayan ang wastong paggana nito. Para sa mga ito, ang ilang mga control control ay inihasik.

Para sa Sabouraud dextrose agar na may chloramphenicol, maaaring magamit ang ATCC strains ng Candida albicans, na dapat magkaroon ng mahusay na paglaki. Ang isa pang plato ay inoculated sa mga strain ng Escherichia coli, na dapat na ganap na mapigilan.

Ang isang hindi nakaayos na plato ay natutuyo din kung saan hindi dapat lumaki ang mga microorganism.

Para sa Sabouraud dextrose agar na may chloramphenicol at cycloheximide, maaaring magamit ang mga strain ng Trichophyton mentagrophytes, at dapat silang bumuo ng maayos. Ang isa pang plato ay inoculated na may isang pilay ng Aspergillus flavus, kung saan dapat mayroong kaunti o walang paglago. Bilang karagdagan, ang isang uninoculated plate ay natamo upang ipakita ang tibay nito.

Para sa Sabouraud dextrose agar na may cycloheximide, ginagamit ang mga strain ng Candida albicans, Trichophyton rubrum o Microsporum canis, na dapat ipakita ang mahusay na paglaki.

Gayundin, ang isang pilay ng Aspergillus flavus ay kasama, na nagpapakita ng kaunti o walang paglaki. Sa wakas, mag-incubate ng isang uninoculated plate upang makontrol ang tibay.

Aplikasyon

Pangunahing kultura

Ang klasikong Sabouraud dextrose agar ay naglalaman ng 4 gramo ng dextrose at napakahusay bilang isang pangunahing medium ng paghihiwalay, dahil ipinapakita nito ang katangian ng morpolohiya ng bawat fungus.

Napakahusay din ito para sa pagpapakita ng paggawa ng pigment. Gayunpaman, hindi ito ang pinakamahusay na paraan ng pag-obserba ng sporulation.

Hindi rin inirerekomenda para sa paglilinang ng Blastomyces dermatitidis, na kung saan ay hinarang ng mataas na konsentrasyon ng glucose na naroroon.

Sa kabilang banda, para sa paglilinang ng ilang mga pagsasaalang-alang ay dapat isaalang-alang.

Ang ilang mga fungi ay pinakamahusay na lumago sa temperatura ng silid, tulad ng mga hulma, ang iba ay matagumpay na lumago sa 37 ° C, tulad ng ilang mga lebadura, at ang iba ay maaaring lumago sa parehong temperatura (dimorphic fungi).

Para sa kadahilanang ito, kung minsan kinakailangan na gumamit ng maraming mga plate na agar para sa Sabouraud para sa parehong sample, dahil ang dobleng pag-seeding ay madalas na ginagawa upang mag-incubate ng isang plato sa temperatura ng silid at isa pa sa 37 ° C.

Halimbawa, ang Sporothrix schenckii ay inihasik sa dalawang plato; ang isa ay nabubulok sa temperatura ng silid upang makuha ang phase ng magkaroon ng amag at ang iba ay natupok sa 37 ° C upang makakuha ng lebadura ng lebadura, ngunit sa huli kinakailangan upang magdagdag ng 5% ng dugo sa daluyan.

Sa iba pang mga kaso, tulad ng mga halimbawa ng mycetoma, dalawang mga plato para sa Sabouraud agar, ang isa ay may chloramphenicol at ang isa ay may cycloheximide. Pinahihintulutan ng una ang paglaki ng mycotoma causative agents ng fungal origin (Eumycetoma) at ang pangalawang mga ahente ng sanhi ng mycetoma ng pinagmulan ng bakterya, tulad ng actinomycetomas.

Sporulation

Ang Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agar ay naglalaman ng 2 gramo ng dextrose at hindi lamang ginagamit para sa paghihiwalay, kundi pati na rin para sa sporulation at pangangalaga ng mga fungi.

Sa daluyan na ito, maaaring mabawi ang mga strain ng Blastomyces dermatitidis.

Pag-iingat

Upang mapanatili ang mga kultura ng kabute, maaari silang maiimbak sa isang ref (2-8 ° C). Ang oras ng pag-iingat ay maaaring magkakaiba sa pagitan ng 2 hanggang 8 linggo. Matapos ang oras na ito dapat silang maging subcultured upang ulitin ang proseso.

Ang ilan sa mga fungi ay pinananatiling pinakamahusay sa temperatura ng silid, tulad ng Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum, at Microsporum audounii.

Ang pagpapanatili ng pilay ay maaaring mapahaba upang maiwasan ang pleomorphism kung ang dextrose ay ganap na tinanggal mula sa agar at kung ang halaga ng agar sa medium ay nabawasan upang maiwasan ang pagkatuyo.

Microcultures

Para sa pagkilala ng ilang mga filamentous fungi, kinakailangan upang magsagawa ng microcultures gamit ang Sabouraud agar o iba pang mga espesyal na paraan upang obserbahan ang mga istruktura ng sekswal at aseksuwal na pagpaparami.

Sa mycology ng tao

Ito ay ginagamit pangunahin para sa pagsusuri ng mga fungal disease, lalo na ang mga nakakaapekto sa balat at mga attachment nito (buhok at mga kuko).

Ang mga sample ay maaaring maging mga secretion, exudates, balat, buhok, kuko, plema, CSF o ihi. Ang mga karaniwang nakahiwalay na pathogens ay dermatophytes, fungi na nagdudulot ng subcutaneous at systemic mycoses.

Mycology ng mga hayop

Ang mga hayop ay madalas na naapektuhan ng impeksyon sa fungal, samakatuwid ang Sabouraud agar ay kapaki-pakinabang sa mycology ng hayop tulad ng sa mga tao.

Halimbawa, ang mga dermatophyte ay madalas na nakakaapekto sa mga hayop. Ganito ang kaso sa Microsporum canis var distortum, na madalas na nakakaapekto sa mga aso, pusa, kabayo, baboy at unggoy. Gayundin, ang Microsporum dyipsum ay nakakaapekto sa mga aso, pusa at hayop.

Ang mga ibon tulad ng manok, roosters, at manok ay apektado ng Microsporum gallinae.

Ang iba pang mga fungi, tulad ng Zymonema farciminosum, ay din ang sanhi ng sakit sa mga hayop, lalo na ang mga kabayo, mules at mga asno, na gumagawa ng makabuluhang pamamaga sa mga lymphatic vessel.

Ang sporothrix schenkii at Histoplasma capsulatum ay nakakaapekto sa mga domestic hayop at tao.

Sikolohiya sa kapaligiran

Maraming mga pathogen o oportunistang fungi ang maaaring tumutok sa anumang naibigay na oras sa isang naibigay na kapaligiran, lalo na sa mga operating room at Intensive Care Units (ICU) ng mga klinika at ospital. Samakatuwid ito ay kinakailangan upang magsagawa ng isang kontrol sa kanila.

Ang iba pang mga mahina na puwang ay mga aklatan at lumang gusali, na maaaring maapektuhan ng konsentrasyon ng mga fungi sa kapaligiran.

Sa mga pag-aaral sa kapaligiran, ang Sabouraud dextrose agar ay ginagamit para sa paghihiwalay ng mga fungi.

Pang-industriya mycology

Ang Sabouraud dextrose agar ay hindi maaaring mawala para sa pag-aaral ng mga kontaminadong fungi sa paggawa ng mga pampaganda, pagkain, inumin, katad, tela, at iba pa.

Magtanim ng mycology

Ang mga halaman ay nagdurusa rin sa mga sakit na dulot ng fungi, na nakakaapekto sa iba't ibang bahagi ng halaman, na maaari ring wakasan ang pag-aani, na nagiging sanhi ng malaking pagkalugi sa agrikultura.

Mga Sanggunian

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Microbiological diagnosis ng mycoses at pag-aaral ng sensitivity ng antifungal. Mga rekomendasyon ng Spanish Society of Nakakahawang sakit at Clinical Microbiology. Magagamit sa: coesant-seimc.org
2. Laboratory ng ValteK. (2009). Sabouraud dextrose agar na may cycloheximide. Magagamit sa: tekstoamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Veterinary mycology. Pambansang Agrarian University. Nicaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editoryal Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Pangkalahatang Mycology. 1994. 2nd Ed. Central University ng Venezuela, Mga Edisyon sa Library. Venezuela Caracas.