TSI AGAR: MAKATUWIRAN, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang TSI agar o triple sugar iron agar ay isang solidong daluyan na nagsisilbing isang biochemical test upang gabayan ang paunang pagkakakilanlan ng Gram negatibong bacilli. Ito ay batay sa pagpapakita ng pagbuburo ng mga sugars na naroroon, at ang paggawa ng hydrogen sulfide at gas.

Ang komposisyon at batayan nito ay halos kapareho ng pagsubok sa iron ng Kligler, na may pagkakaiba na naglalaman lamang ang huli ng glucose at lactose. Sa halip, tulad ng ipinahihiwatig ng pangalan nito, ang triple sugar agar agar ay naglalaman ng tatlong mabibigat na karbohidrat: glucose, lactose at sucrose.

Ang mga imahe ng pagsubok sa TSI na may iba't ibang mga microorganism A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Pinagmulan: Witmadrid, mula sa Wikimedia Commons

Bilang karagdagan, ang daluyan ng TSI ay may apat na mga derivatives ng protina na ginagawa itong isang napaka-nakapagpapalusog agar: katas ng lebadura, katas ng karne, peptone at proteose peptone. Naglalaman din ito ng ferrous ammonium sulfate, sodium thiosulfate, sodium chloride, phenol red, at agar.

Ang kawalan ng kakayahan ng isang microorganism sa pagbuburo ng glucose na naroroon sa daluyan ay agad na hindi kasama mula sa pag-aari sa Pamilyang Enterobacteriaceae. Samakatuwid ang pagsubok na ito ay mahalaga sa pagpapasya kung aling mga ruta ng pagkakakilanlan ang dapat gawin upang matukoy ang genus at species.

Ang bawat laboratoryo ay nagpapasya kung magtrabaho sa TSI agar o sa Kligler iron agar.

Batayan

Ang bawat isa sa mga compound ay nagtutupad ng isang function sa loob ng daluyan.

Sodium klorido at agar

Ang sodium klorido ay kinakailangan upang mapanatili ang balanse ng osmotic ng medium. Habang ang agar ay nagbibigay ng solidong pagkakapareho.

Tagapagpahiwatig ng PH (pula ng pula)

Ang pH ng handa na daluyan ay balanse sa 7.3 at ang tagapagpahiwatig ng pH (phenol red) ay nagiging dilaw sa ibaba 6.8. Nangangahulugan ito na ang maliit na halaga ng mga acid na ginawa ng pagbuburo ng mga asukal ay magpapasara sa daluyan mula sa pula-orange hanggang dilaw.

Kung walang pagbuburo ay nangyayari magkakaroon ng alkalinization ng daluyan sa pamamagitan ng paggamit ng mga peptones, na lumiliko mula sa pula-orange hanggang sa malakas na pula.

Mga derivatives ng protina (extract ng lebadura, katas ng karne, peptone at proteose peptone)

Kapag na-metabolize ng bakterya ang mga protina na naroroon sa TSI agar, ang mga amin ay ginawa na alkalize ang daluyan (pangunahin sa antas ng bevel), dahil ang reaksyon ay nangangailangan ng oxygen. Ang mga amin ay pinihit ang bezel maliwanag na pula.

Ngunit ito ay depende sa kakayahan ng bakterya sa pagbuburo ng mga karbohidrat o hindi.

Fermentation ng mga karbohidrat (glucose, lactose at sucrose)

Ang pag-aaral ng pagbuburo ng mga asukal ay maaaring magbigay ng maraming mga imahe at ang bawat isa ay naiiba sa kahulugan. Ang interpretasyon sa pagsubok ay naghahati ng mga microorganism sa 3 kategorya: glucose non-fermenter, lactose non-fermenter, at lactose / sucrose fermenter.

Dapat pansinin na ang halaga ng glucose sa daluyan ay limitado, habang ang konsentrasyon ng lactose at sucrose ay 10 beses na mas mataas.

Ang bakterya ng Pamilyang Enterobacteriaceae at iba pang mga microorganism ng glucose-fermenting ay magsisimulang mag-ferment ng asukal na ito dahil ito ang pinakasimpleng karbohidrat para sa enerhiya.

Sa kabilang banda, ang lactose at sucrose ay mga kumplikadong karbohidrat na dapat masira at ma-convert sa glucose upang mapasok sila sa siklo ng Embden-Meyerhof.

-Microorganism hindi fermenting glucose

Kapag ang inoculated microorganism ay hindi mag-ferment glucose, mas kaunti ang magagawa nitong mag-ferment ng iba pang mga karbohidrat. Samakatuwid, walang mga acid na nabuo dito, ngunit mayroong pagbuo ng mga amin sa bevel sa pamamagitan ng paggamit ng mga peptones.

Sa kasong ito ang bezel ay lumiliko sa isang mas malakas na pula at sa ilalim ng tubo ay maaaring manatiling hindi nagbabago o maaari ring ma-alkalize, na iwan ang pulang tubo na pula.

Pagbibigay kahulugan: K / K ay nangangahulugang alkalina bevel / alkalina o neutral na ibaba

Sa imahe sa simula ng artikulo tingnan ang imahe ng tubo D.

Ang resulta na ito ay nagpapahiwatig na ang microorganism ay hindi kabilang sa Pamilyang Enterobacteriaceae.

-Microorganism hindi pagbuburo lactose / sucrose

Kung ang bakterya ay maaaring mag-ferment glucose ngunit hindi lactose o sucrose, ang mga sumusunod ay mangyayari:

Ang mga bakterya ay ubusin ang lahat ng glucose na naroroon pagkatapos ng humigit-kumulang na 6 hanggang 8 na oras, na ma-acidify kapwa ang bevel at ang bloke; iyon ay, ang agar ay ganap na magiging dilaw. Ngunit kapag ang glucose ay maubos at ang lactose at sucrose ay hindi magagamit, sisimulan ng bakterya ang metabolismo ng mga protina.

Ang reaksyon na ito ay nangangailangan ng oxygen, samakatuwid ang pagkasira ng mga peptones ay nangyayari sa ibabaw (bevel). Ang mga amin ay gumawa ng alkalize ang bezel na bumabaling mula sa dilaw hanggang pula. Ang reaksyon na ito ay napatunayan pagkatapos ng 18 hanggang 24 na oras ng pagpapapisa ng itlog.

Pagbibigay kahulugan: K / A ay nangangahulugang alkalina bevel at acid wad.

Sa imahe sa simula ng artikulo tingnan ang imahe ng tubo B.

-Lactose / sucrose fermenting microorganism

Ang mga microorganism na may kakayahang mag-fermentate ng lactose at sucrose ay maaaring malinaw na pagbuburo ng glucose. Matapos ang minimum na halaga ng glucose na naroroon sa daluyan, naubos ang pyruvate na nagsisimula upang mag-metabolize upang makabuo ng mga acid sa pamamagitan ng aerobic Krebs cycle, at sa panahon ng 8 hanggang 12 na oras ang lahat ng daluyan ay magiging dilaw.

Kung ang bakterya ay may kakayahang masira ang lactose o sucrose, ang mga acid ay patuloy na magagawa, at pagkatapos ng 18 hanggang 24 na oras ang buong tubo - bevel at plug - ay magpapatuloy na dilaw.

Dapat pansinin na ang paggamit ng glucose ay isinasagawa sa dalawang paraan: ang isang aerobically sa bevel ng tubo, at ang iba pang anaerobically sa ilalim ng tubo.

Pagbibigay kahulugan: A / A ay nangangahulugang acid bevel / acid sa ilalim. Ito ay maaaring o maaaring walang gas.

Sa imahe sa simula ng artikulo tingnan ang imahe ng tubo A.

Paggawa ng gas

Ang ilang mga microorganism ay may kakayahang gumawa ng gas sa panahon ng pagbuburo ng mga asukal. Ang gas ay napatunayan sa tubo sa pamamagitan ng presyon na inilalabas nito sa loob ng agar. Ang presyon ay nagiging sanhi ng pagbuo ng bubble o pag-aalis ng agar. Minsan ang pagbuo ng gas ay maaaring baliin ang daluyan.

Mahalaga na sa oras ng paghahasik ng daluyan ng TSI, ang pagbutas ay ginawang malinis sa pamamagitan ng gitna ng agar hanggang sa maabot ito sa ilalim. Kung ang pagbutas ay inililipat patungo sa mga dingding ng tubo, maaari itong magdulot ng mga maling positibo sa paggawa ng gas, dahil makatakas ito sa maling nabuo na channel.

Ang paggawa ng gas, pati na rin ang mga reaksyon na nagaganap sa agar bevel, nangangailangan ng oxygen, samakatuwid inirerekomenda na ang tubo ay matakpan ng isang cotton plug, at kung ang isang takong ng Bakelite ay ginagamit, hindi ito dapat lubusang masikip.

Ang paggawa ng gas ay naiulat bilang positibo (+) o negatibo (-).

Mga pattern ng pagbuo ng gas. Pinagmulan: Scheme na ginawa ni MSc. Marielsa Gil. Pinagmulan ng imahe: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, sa pamamagitan ng Wikimedia Commons

Ang sodium thiosulfate at ferrous ammonium sulfate

Ang bakterya na may kakayahang gumawa ng hydrogen sulfide (walang kulay na gas) ay kumukuha ng asupre mula sa sodium thiosulfate na nasa medium. Kapag nabuo, ang H ₂ S ay gumanti sa ferrous ammonium sulfate, na gumagawa ng iron sulfide (malinaw na nakikitang itim na pag-urong).

Ang produksiyon ng H ₂ S ay iniulat bilang positibo (+) o negatibo (-).

Sa imahe sa simula ng artikulo tingnan ang imahe ng tubo C.

Paghahanda

Timbang 62.5 g ng dehydrated triple sugar iron agar (TSI) medium at matunaw sa isang litro ng distilled water.

Ang init hanggang ang agar ay ganap na matunaw. Pakuluan para sa isang minuto, madalas na pagpapakilos. Ipamahagi ang 4 ml ng daluyan sa 13/100 mga tubo ng pagsubok na may mga takip ng koton.

Sterilize sa isang autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto. Alisin mula sa autoclave at hayaan itong magpahinga sa isang anggulo. Ang pangangalaga ay dapat gawin na ang parehong base at bezel ay may parehong distansya.

Pagtabi sa isang ref 2-8 ° C. Hayaan itong magpainit bago ihasik ang bakterya na pilay.

Ang kulay ng dehydrated medium ay light beige at ang handa na daluyan ay pula-orange.

Ang panghuling pH ng handa na daluyan ay 7.3 ± 0.2.

Aplikasyon

Ang pagsubok ng TSI ay malawakang ginagamit sa antas ng laboratoryo ng microbiology. Mahalaga ang pagsubok na ito upang gabayan ang uri ng pagsubok na dapat mailapat upang makilala ang genus at species. Ang mabuting pagpapatupad at pagpapakahulugan nito ay makakapagtipid sa materyal at paggawa.

Kung ang resulta ay isang TSI K / K at ang pagsubok ng cytochrome oxidase ay positibo, kilala na ang mga pagsusuri ay dapat gamitin upang makilala ang mga di-pagbubuong mga negatibong riles ng Gram, tulad ng Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, bukod sa iba pang genera. Kung negatibo ang oxidase, nakatuon ito sa genera Acinetobacter, Stenotrophomonas, atbp.

Sa kabilang banda, kung ang isang TSI A / A o K / A ay nakuha at negatibo ang pagsubok ng cytochrome oxidase, mas mababawasan ang nitrates sa mga nitrites, tiyak na tiyak na ito ay isang microorganism na kabilang sa Pamilyang Enterobacteriaceae. Sa kasong ito, ang ruta ng pagkakakilanlan ay tututuon sa mga tukoy na pagsubok para sa pangkat na ito ng bakterya.

Sa kabilang banda, kung ang isang imahe ng K / A o A / A ay nakuha at positibo ang pagsubok ng cytochrome oxidase, ang mga karagdagang pagsubok na tipunin ay layon sa pagkilala sa mga fermenting strains na hindi kabilang sa Pamilyang Enterobacteriaceae, tulad ng: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio at Pasteurella.

Ang isang TSI na may hydrogen sulfide, negatibong oxidase, ay gagabay sa pagkilala sa mga sumusunod na genera ng Pamilyang Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella o Salmonella.

Ang isang TSI na may kaunti o katamtaman na hydrogen sulfide sa alkalina na bevel na may isang alkaline background at isang positibong oxidase ay gagabay sa paggamit ng mga pagsubok para sa pagkakakilanlan ng non-fermenting H ₂ S- paggawa ng mga gram-negatibong rod, tulad ng Shewanella putrefaciens.

Sa wakas, ang TSI ay maaaring magamit para sa pagsisiyasat ng paggawa ng hydrogen sulfide sa Gram positibong bacilli, lalo na kung ang Erysipelothrix rhusiopathiae ay pinaghihinalaan.

Sown

Ang daluyan ng TSI ay dapat na inoculated na may purong kolonya, na nakahiwalay sa mga pangunahing o piniling kultura. Kung ang kolonya ay kinuha mula sa pumipili media na binigyan ng mga sample na may halo-halong flora, dapat gawin ang pangangalaga na kumuha lamang mula sa ibabaw, dahil ang mabubuhay na mga galaw na inilipat sa daluyan ay maaaring umiiral sa mas mababang bahagi ng kolonya.

Samakatuwid, ang loop ay hindi dapat cooled sa pumipili daluyan at pagkatapos ay ang kolonya ay dadalhin at inoculated na may TSI medium.

Ang paghahasik ay gagawin gamit ang isang tuwid na loop o karayom. Ang isang pagbutas ay gagawin, pag-aalaga na ito ay sa pamamagitan ng gitna ng gitna hanggang sa pag-abot sa ilalim, at pagkatapos ang paghahasik ay natapos sa pamamagitan ng inoculate ang ibabaw sa isang hugis ng zigzag. Huwag gumawa ng dalawang puncture.

Mag-incubate sa 37 ° C sa aerobiosis para sa 18-24 na oras. I-interpret sa oras na ito, ni bago o pagkatapos nito.

Mga Limitasyon

Ang pagsusuri sa TSI ay dapat basahin sa loob ng 18 hanggang 24 na oras ng pagkapisa. Ang pagbabasa bago ang oras na ito ay maaaring magbigay ng isang maling positibo para sa A / A pagbuburo. Sapagkat, ang isang pagbabasa pagkatapos ng oras na ito ay maaaring magdulot ng isang maling negatibong imahe ng isang di-fermenter, dahil sa pagkonsumo ng mga peptones na nag-alkalize ng daluyan.

Mga Sanggunian

1. Mac Faddin J. (2003). Mga pagsubok sa biochemical para sa pagkilala ng mga bakterya na kahalagahan ng klinikal. 3rd ed. Editoryal Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
4. "TSI agar." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 10 Jul 2018, 08:09 UTC. 10 Pebrero 2019, 03:33 Magagamit sa: es.wikipedia.org
5. Britannia Laboratories. TSI Agar (Triple sugar iron agar). 2015.Magagamit sa: britanialab.com
6. Mga Laboratoryo ng BD. Triple sugar agar agar (TSI Agar). 2003.Magagamit sa: bd.com