MALIWANAG NA BERDENG AGAR: MAKATUWIRAN, PAGHAHANDA, AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang makikinang na berdeng agar ay isang solidong daluyan ng kultura na may mataas na antas ng pagpili. Ginagamit ito ng eksklusibo para sa paghihiwalay ng mga strain ng genus Salmonella, gayunpaman mayroong ilang mga pagbubukod, tulad ng typhi at paratyphi species na hindi lumalaki sa daluyan na ito.

Ang paghahanap para sa genus Salmonella ay madalas sa dumi ng tao, tubig o mga sample ng pagkain. Sa kahulugan na ito, ang daluyan na ito ay maaaring maging kapaki-pakinabang. Ang agar na ito ay nilikha noong 1925 nina Kristensen, Lester at Jurgens, kalaunan ay nabago ito ni Kauffmann.

Maliwanag na berdeng agar. Fermenting at non-fermenting colony ayon sa pagkakabanggit. Pinagmulan: exhibition ng MJ Richardson / Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Lisensya ng Creative Commons.

Binubuo ito ng mga pluripeptones mula sa peptic digest ng tissue ng hayop at pancreatic digest ng casein, naglalaman din ito ng yeast extract, sodium chloride, lactose, sucrose, phenol red, maliwanag na berde at agar-agar.

Ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng pagiging isang hindi nakakaaliw na kapaligiran para sa karamihan ng mga bakterya, na pinapaboran ang paglaki ng Salmonella, gayunpaman ang ilang mga coliform ay may kakayahang mag-subsist dito, na mahina ang pagbuo.

Mahalagang tandaan na ang genus ng Shigella ay hindi lumalaki sa daluyan na ito, ni ang Salmonella typhimurium o Salmonella paratyphi. Samakatuwid, kung nais mong ihiwalay ang mga microorganism na ito, dapat gamitin ang iba pang media, tulad ng XLD agar, bukod sa iba pa.

Batayan

Maliwanag na berdeng agar

Ang bawat isa sa mga sangkap na bumubuo sa daluyan ay tinutupad ang isang tiyak na pag-andar na tumutukoy sa mga katangian at katangian ng agar.

Ang mga pluripeptones at yeast extract ay ang mapagkukunan ng mga nutrisyon kung saan kinuha ng mga microorganism ang nitrogen at mineral na kinakailangan para sa kanilang pag-unlad. Ang lactose at sukrose ay mga mapagkukunan ng enerhiya para sa mga microorganism na may kakayahang mapalakas ang mga ito.

Ang maliwanag na berde ay ang sangkap na nagbalat na pumipigil sa paglaki ng mga positibong bakterya ng Gram at isang malaking bilang ng mga negatibong microorganism ng Gram.

Ang sodium klorido ay nagbibigay ng katatagan ng osmotic na katamtaman. Habang ang pula ng phenol ay ang tagapagpahiwatig ng pH, lumiliko ang kulay kapag nakita ang paggawa ng acid mula sa pagbuburo ng karbohidrat.

Ang mga kolonyal na di-fermenting ng lactose at sucrose ay lumalaki sa medium na ito sa isang pinkish o transparent na puting kulay, sa isang pulang background. Halimbawa, ang bakterya ng genus na Salmonella.

Habang ang bakterya ng lactose o sucrose na may kakayahang lumaki sa medium na ito ay nagkakaroon ng dilaw-berde o dilaw-berde na mga kolonya sa isang maberde-dilaw na background. Halimbawa, ang Escherichia coli at Klebsiella pneumoniae.

Maliwanag na berde agar (BGA) na variant

Mayroong iba pang mga variant ng maliwanag na berdeng agar; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) Agar at Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.

Novobiocin Maliwanag na Green Glucose Agar

Naglalaman ng Trypticase Soy Agar, Ferric Ammonium Citrate, Sodium Thiosulfate Pentahydrate, Phenol Red, Glucose, Bright Green, Novobiocin, at Distilled Water.

Ginagamit ito para sa paghihiwalay ng mga kolonya ng Salmonella mula sa mga sample ng dumi.

Sa kasong ito, ang maliwanag na berde at novobiocin ay ang mga inhibitory sangkap na pumipigil sa paglaki ng mga Gram na positibong bakterya at ilang mga negatibong Gramikong microorganism.

Ang sodium thiosulfate ay ang mapagkukunan ng sulfide at ferric citrate ay ang mapagkukunan ng bakal, kapwa kinakailangan upang maihayag ang paggawa ng hydrogen sulfide sa pamamagitan ng pagbuo ng isang itim na ferric sulfide na pag-umit.

Ang glucose ay ang fermentable na karbohidrat at ang phenol red ay ang tagapagpahiwatig ng pH.

Sa daluyan na ito, ang mga kolonya ng Salmonella ay malalaki na may isang itim na sentro na napapalibutan ng isang mapula-pula na halo at sinundan ng isang malinaw na nakikitang lugar. Ang ilang mga strain ng Citrobacter freundii ay gumagawa ng mga kolonya na magkapareho sa Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Ang daluyan na ito ay naglalaman ng trypticase soy agar, ferric ammonium citrate, sodium thiosulfate, lactose, gliserol, maliwanag na berde, novobiocin, at distilled water.

Ang pagkakaiba sa pagitan ng daluyan na ito at ang nauna ay ang glucose ay nahalili ng lactose at gliserol at phenol na pula ay hindi ginagamit.

Ginagamit din ang daluyan upang ibukod ang mga species ng Salmonella, ang mga kolonya ay nagkakaroon ng itim, dahil sa paggawa ng hydrogen sulfide.

Ang mga kolonya lamang na hindi gumagawa ng acid mula sa gliserol o lactose na nakakamit ng sapat na produksiyon ng H ₂ S, dahil ang mababang pH ay nakakasagabal sa pagbuo ng H ₂ S. Nagreresulta ito sa mga colony na walang kulay para sa karamihan ng mga species Proteus at Citrobacter.

Paghahanda

-Gawin ang 58 gramo ng komersyal na nakuha na dehydrated medium. Idagdag ito sa isang litro ng redistilled na tubig. Paghaluin, hayaang tumayo ng ilang minuto, at ilagay ang pinaghalong sa isang mapagkukunan ng init hanggang sa ganap na matunaw.

-Autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto, huwag lumampas sa oras ng isterilisasyon.

-Nagpahinga ito at maglingkod habang mainit sa sterile pinggan Petri. Ang pangwakas na pH ay dapat na 6.9 ± 0.2.

-Magtatag ng solidong at mag-imbak sa refrigerator hanggang sa gamitin. Bago ang pag-seeding ng mga plato ay dapat kumuha ng temperatura ng silid.

-Ang medium ng pulbos ay berde sa kulay at naghanda ay tumatagal ng isang kulay kahel na kayumanggi o mapula-pula-berde na kulay, depende sa PH at sa komersyal na kumpanya. Ang isang napaka-kayumanggi na kulay ay nagpapahiwatig na ang agar ay sobrang init.

-Once ang agar ay solidified, hindi inirerekumenda na muling sumama, dahil ang medium ay lumala.

Gumagamit / aplikasyon

Ginagamit ang daluyan na ito upang maghanap para sa mga strain ng genus Salmonella mula sa mga sample ng stool at mga pagkaing pagawaan ng gatas, bukod sa iba pa.

Dahil ito ay isang hindi magandang kapaligirang kapaligiran, ipinapayong maghasik ng isang masaganang inoculum kung ginagamit ang direktang sample. Kung hindi, ang isang paunang pagpapayaman at pagpapayaman ng mga ispesimen ay dapat gawin bago ang paghahasik sa daluyan na ito.

Tulad ng ilang mga salin ng Salmonella ay hinarang o lumalaki nang may kahirapan, ipinapayong isama ang daluyan na ito kasama ang iba pang mga pumipili agar para sa Salmonella.

Ang bawat kolonya na may isang pangkaraniwang katangian ng Salmonella ay dapat isumite sa mga pagsubok sa biochemical para sa tiyak na pagkakakilanlan.

QA

Upang masubukan ang mahusay na pagganap ng maliwanag na berdeng agar medium, ang ATCC strains ay maaaring magamit upang obserbahan ang kanilang pag-unlad dito.

Ang pinaka madalas na mga galaw na ginagamit para sa control control ay: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC

Ang unang 3 ay dapat magbigay ng pinkish o transparent na puting kolonya sa isang pulang background. Salmonella na may mahusay na pag-unlad at Proteus na may kaunti o regular na paglaki.

Para sa Klebsiella at Escherichia, ang mga dilaw na berde na kolonya na may dilaw na background ay inaasahan at sa kaso ng Shigella at Staphylococcus dapat silang mapigilan.

Ang dehydrated medium ay dapat na naka-imbak sa temperatura ng silid, sa isang tuyo na lugar, dahil ang daluyan ay napaka hygroscopic.

Mga Sanggunian

1. Si Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Brilliant Green Agar. 2009
2. Laboratoryo ng Britannia. Maliit na Green Agar. 2015.
3. Laboratoryo ng BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. (Ika-5 ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editoryal Panamericana SA