PEPTONE WATER: MAKATUWIRAN, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang tubig ng peptone ay isang daluyan ng enrichment medium, hindi mabagal, na pangunahin na ginagamit bilang mga natutunaw na sample ng pagkain o iba pang mga materyales. Ang daluyan na ito mula sa isang punto ng kemikal ay napaka-simple, naglalaman ito ng karne ng peptone, sodium klorido at tubig.

Mayroon itong isang tiyak na nutritional halaga, na nagpapahintulot sa pagyamanin ang halimbawang. Kung may mga naabuso na bakterya, ang daluyan na ito ay may lakas upang maayos ang pagiging epektibo. Lalo na kapaki-pakinabang ito sa pagbawi ng mga bakterya na kabilang sa pamilyang Enterobacteriaceae.

Peptone water sa mga bote. Pinagmulan: MSc. Marielsa gil

Sa kaso ng pagbawi ng Salmonellas, inirerekomenda ang paggamit ng varied na may peptone water variant; Ito ay nagsisilbing isang pre-enrichment medium para sa sample, sa kasong ito naglalaman ito ng iba pang mga elemento tulad ng disodium phosphate at dipot potassium phosphate.

Karaniwan ang tubig ng peptone ay inihanda sa neutral na pH, gayunpaman mayroong iba pang mga variant kung saan kinakailangan para sa pH na 8.5 ± 0.2 (alkalina), dahil ang bakterya na ihiwalay ay alkaliphilic, tulad ng Vibrio cholerae.

Bukod dito, ang daluyan na ito ay maaaring magamit bilang isang base medium para sa mga pagsusuri sa karbohidrat.

Batayan

Nagbibigay ang mga peptones ng mga nutrisyon na kinakailangan para sa paglaki ng bakterya, lalo na ang nitrogen at short-chain amino acid, habang ang sodium chloride ay nagpapanatili ng osmotic balanse.

Bukod dito, ginagawang posible ang medium na magkalat, homogenize at ayusin ang mga selula ng bakterya na nasira ng mga proseso ng industriya.

Bilang isang diluent na ito ay mainam, epektibong pinapalitan ang physiological solution (SSF) o solusyon sa pospeyt buffer (PBS).

Ang paglaki ng bakterya ay nakikita sa pamamagitan ng pag-obserba ng kaguluhan nito.

Paghahanda

Paghahanda ng gawang bahay (hindi komersyal)

Tumimbang ng 1 g ng peptone at 8.5 g ng sodium chloride, matunaw sa 1 litro ng distilled water. Ang pH ay dapat na nababagay sa 7.0. Para sa mga ito, maaaring magamit ang 1N sodium chloride.

Paghahanda gamit ang komersyal na daluyan

Tumimbang ng 15 g ng dehydrated medium at matunaw sa isang litro ng distilled water. Homogenize ang pinaghalong. Kung kinakailangan, ang halo ay pinakuluan ng 1 minuto upang matulungan ang kabuuang pagkabulok. Paglilingkod sa 100 ML bote o 10 ml tubes kung kinakailangan. Ang Autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.

Palamig at gamit o tindahan sa isang ref. Ang pangwakas na pH ng daluyan ay 7.2 ± 0.2.

Ang kulay ng dehydrated medium ay light beige at ang handa na daluyan ay light amber.

Paghahanda para sa mga pagsusulit sa pagbuburo

Sa nakaraang paghahanda-bago ang pag-isterilisasyon - ang karbohidrat ay dapat idagdag sa isang pangwakas na konsentrasyon ng 1%, kasama ang tagapagpahiwatig ng Andrade (acid fuchsin) o pula na pula (0,018 g / L). Ang mga tubo ay dapat na marapat sa isang kampana ng Durham upang obserbahan ang pagbuo ng gas.

Iba pang mga variant ng tubig ng peptone

Na-buffered o buffered na tubig na peptone

Naglalaman ito ng enzymatic hydrolyzate ng casein, sodium chloride, dihydrogen potassium phosphate at sodium hydrogen phosphate dodecahydrate. Ang panghuling pH ay 7.0 ± 0.2.

Para sa paghahanda nito, timbangin 20 g ng dehydrated medium at matunaw sa 1 litro ng distilled water. Hayaan itong magpahinga ng humigit-kumulang 5 minuto. Init sa loob ng 1 minuto hanggang sa ganap na matunaw.

Ibuhos sa angkop na garapon kung kinakailangan. Sterilize ang paggamit ng autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.

-Alkaline peptone tubig

Tumimbang ng 25 g ng dehydrated medium at matunaw sa 1 litro ng tubig. Magpatuloy tulad ng inilarawan sa itaas. Ang pH ay saklaw mula sa 8.3 hanggang 8.7.

Gumamit

Ang inoculum ay ginagawa sa pamamagitan ng paglalagay ng sample nang direkta.

Ginagamit ito upang maghalo ng mga halimbawa, lalo na kung pinaghihinalaang na maaaring may nasira na bakterya. Karaniwan ang mga panlabas ay 1:10 at 1: 100.

Mag-incubate ng 24 na oras sa aerobiosis sa 35-37 ° C.

Stool sample

Para sa mga sample ng dumi para sa Salmonella, ang paggamit ng buffered o buffered water ay inirerekomenda bilang isang pre-enrichment medium.

Upang gawin ito, magpatuloy tulad ng sumusunod:

Kung ang dumi ng tao ay nabuo, kumuha ng 1 g ng sample. Kung sila ay likido, kumuha ng 1 ml ng mga feces at suspindihin sa isang tubo na may 10 ml ng buffeted peptone na tubig. Sa kaso ng mga rectal swab, ilabas ang materyal na nilalaman sa swab sa tubo na may buffered na tubig na peptone.

Sa lahat ng mga kaso, ihalo at homogenize ang sample nang maayos.

Mag-incubate sa 37 ° C para sa 18 hanggang 24 na oras. Kasunod nito ang subculture sa isang sabaw ng pagpapayaman tulad ng selenite na sabaw ng cystine o sabaw ng tetrathionate sa 37 ° C para sa 18-24 na oras pa. Sa wakas, linangin ang pumipili media para sa Salmonella, tulad ng SS agar, XLD agar, Hektoen agar, bukod sa iba pa.

Mga sample ng pagkain

Ang tubig ng peptone ay ginagamit bilang isang medium na pagpapayaman o bilang isang simpleng diluent, ngunit kung hinahangad ang mga species ng Salmonella, ginagamit ito bilang isang daluyan ng pre-enrichment, tulad ng inilarawan.

Sa pagpapatuloy ng pagkain tulad ng sumusunod:

Para sa mga solidong pagkain na may timbang na 25 g ng sample at para sa mga likidong pagkain ay sumusukat ng 25 ml dito. Inilahad ng lugar na bahagi sa mga flasks na naglalaman ng 225 ml ng tubig ng peptone. Paghaluin at homogenize ang sample.

Kung ang microbial load ay pinaghihinalaang mataas, ang mga serial o desimal na maaaring maisagawa upang mapadali ang pagbibilang ng mga yunit ng colony na bumubuo (CFU).

Ang bilang ng mga panlabas ay depende sa uri ng sample at ang karanasan ng analyst.

Kung, sa kabilang banda, ang pag-load ng microbial ay pinaghihinalaang napakababa, walang kinakailangang mga pagbabawas. Kasunod nito, ang subculture sa pumipili media.

Sa kaso ng pagkain mula sa dagat, tulad ng shellfish, isda, bukod sa iba pa, sa paghahanap ng Vibrio cholerae o iba pang mga species ng Vibrio, ang tubig ng peptone na nababagay sa pH 8.5 (alkaline peptone water) ay dapat gamitin.

QA

Mula sa bawat batch na inihanda, ang isa hanggang dalawang tubes ay dapat na ma-incubated nang walang inoculation para sa 24 na oras sa aerobiosis sa 37 ° C. Sa pagtatapos ng oras, walang kaguluhan o pagbabago ng kulay ang dapat sundin.

Ang mga kilalang control control ay maaari ding magamit upang suriin ang kanilang pagiging epektibo:

Para sa mga ito, ang mga sumusunod na mga bakterya ng bakterya ay maaaring magamit: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Sa lahat ng mga kaso ay inaasahan ang kasiya-siyang pag-unlad ng microbial, na sinusunod ng kaguluhan ng daluyan.

Mga Limitasyon

-Ang dehydrated medium ay napaka hygroscopic, kaya dapat itong itago mula sa kahalumigmigan.

-Ang daluyan ay hindi dapat gamitin kung anumang uri ng pagkasira ay sinusunod.

-Ang dehydrated culture medium ay dapat na nakaimbak sa pagitan ng 10 - 35 ° C

-Ang inihandang daluyan ay dapat na panatilihing palamig (2-8 ° C).

Mga Sanggunian

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B at Velázquez O. Mga pamamaraan para sa Microbiological Pagsusuri ng Mga Pagkain. 2009, ika-2 ed. Faculty ng Chemistry, UNAM. Mexico. Bersyon para sa Mga Manwal at Doktor ng Administrador (AMyD) ng Faculty of Chemistry, UNAM 1. Magagamit sa: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories. Ang natapos na tubig na peptone. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Peptone water. Magagamit sa: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Peptone water. 2015.Magagamit sa: britanialab.com
5. Mga Merck Laboratories. Naglagay ng tubig na peptone. Magagamit sa: merckmillipore.com
6. Mga Laboratories ng Conda. Alkaline peptone water. Magagamit sa: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.