PHOSPHATE BUFFER (PBS): MAKATUWIRAN, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang pospeyt buffer, posporo buffered saline o BPS ay isang buffer isotonic, na ang pagpapaandar ay upang mapanatili ang pH at osmotic pressure na malapit sa natural na biological environment (physiological). Ang acronym PBS ay nakatayo para sa pospeyt na buffered saline.

Ang PH at osmolarity ay dalawang napakahalagang aspeto na dapat kontrolin sa ilang mga protocol sa laboratoryo. Sa kaso ng pH, kinakailangang kontrolin ito, lalo na sa mga reaksyon ng biochemical, dahil ang mga ito ay maaaring magkakaiba o hindi isinasagawa kung ang mga reaksyon ay nasa isang hindi nararapat na pH.

PBS pospayd buffered saline sa dalawang magkakaibang mga pH's. Pinagmulan: Pixinio.com

Samantala, ang kontrol ng osmolarity ay mahalaga lalo na kapag nagtatrabaho sa mga buhay na selula, dahil ang mga lamad ng plasma ng mga cell ay gumanti ayon sa konsentrasyon ng mga solute kung saan nahanap ang mga ito.

Kung ang mga selula ay inilipat sa isang hypertonic medium sila ay magiging dehydrated, dahil ang gradient ng tubig ay dadalhin sa gilid kung saan may mas mataas na konsentrasyon ng mga solute. Kung, sa kabilang banda, ang mga cell ay inilalagay sa isang hypotonic medium, ang mga cell ay sumisipsip ng likido hanggang sa malagyo.

Iyon ang dahilan kung bakit ginagamit ang PBS buffer para sa mga protocol ng laboratoryo na nangangailangan ng pagpapanatili ng mga cell sa vitro, sa ganitong paraan ay hindi masisira ang mga cell.

Ang PBS ay binubuo ng isang kumbinasyon ng mga asing-gamot, tulad ng sodium chloride, sodium phosphate, potassium chloride, at potassium phosphate. Ang komposisyon ng PBS ay maaaring magkakaiba depende sa protocol.

Batayan

Karaniwan ang pag-andar ng pospeyt buffer ay upang mapanatili ang isang pare-pareho na pH physiological pH kasama ang isang electrolyte na konsentrasyon na katulad sa natagpuan sa loob ng katawan.

Sa kapaligiran na ito, ang mga cell ay maaaring manatiling matatag, dahil ang mga kondisyon sa pisyolohikal ay ginagaya hangga't maaari.

Ang iba pang mga compound ay maaaring idagdag sa orihinal na pagbabalangkas ng PBS kung kinakailangan, halimbawa, ang pagdaragdag ng EDTA sa buffer ay kapaki-pakinabang para sa paghuhugas ng mga pulang selula ng dugo sa cross-incompatibility test.

Pinipigilan ng EDTA ang maliit na bahagi ng pandagdag C1 na naroroon sa suwero mula sa pagiging malinis at lysed sa mga pulang selula ng dugo, iyon ay, maiiwasan ang mga maling resulta na hindi pagkakatugma. Bilang karagdagan, ang EDTA ay tumutulong sa pag-dissociate cells.

Paghahanda

Ang dami ng mga asing-gamot na dapat timbangin para sa paghahanda ng PBS phosphate buffered saline ay depende sa dami na kailangang ihanda:

-Phosphate buffered saline stock solution (10X PBS)

Para sa isang litro ng solusyon:

Timbangin:

80.6 g ng NaCl,

2.2 g ng KCl,

11.5 g ng Na ₂ HPO ₄ ,

2.0 g KH ₂ HPO ₄

Diskarte sa paghahanda

Ilagay ang mga mabibigat na asing-gamot sa isang beaker, magdagdag ng sapat na tubig (80%) at ihalo sa pagpapakilos na plato na may magnetic bar hanggang matunaw ang mga asing-gamot.

Paghahanda ng PBS gamit ang isang nakapupukaw plate na may magnetic bar. Pinagmulan: Gumagamit: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Salain upang alisin ang mga hindi nalutas na mga particle. Gumamit ng mga filter na may 0.45 µm pores. Autoclave at ipamahagi ang aseptically sa isang laminar flow hood sa mga garapon ng baso na may mga lids.

Ang 10X solution (puro) ay hindi inaayos ang pH. Ang pagsasaayos ay ginawa sa sandaling diluted sa konsentrasyon ng buffer ng 1X PBS, (1:10 pagbabanto).

-Buffer phosphate saline (1X PBS)

Ang 1X PBS ay maaaring ihanda nang direkta sa pamamagitan ng pagtimbang ng kaukulang halaga ng bawat asin o maaari itong ihanda sa pamamagitan ng pag-dilute ng stock solution (1:10) na may sterile distilled water.

-Upang maghanda nang direkta sa isang litro ng 1X PBS pospayd na buffered saline, timbangin:

8.06 g ng NaCl,

0.22 g ng KCl,

1.15 g ng Na ₂ HPO ₄ ,

0.20 g ng KH ₂ HPO ₄

Diskarte sa paghahanda

Magpatuloy tulad ng ipinaliwanag sa puro solusyon. Kasunod nito, dapat ayusin ang pH. Upang gawin ang panukalang ito ng pH at depende sa paggamit ng acid acid (HCl) o base (NaOH) upang bawasan o itaas ang pH ayon sa kinakailangan, hanggang sa ito ay 7.4.

Ang acid o base ay idinagdag patak sa pamamagitan ng pag-drop habang sinusubaybayan ang halaga ng pH ng solusyon gamit ang isang metro ng pH. Ang filter, autoclave, at aseptically namamahagi sa mga conical tubes o garapon kung kinakailangan.

-Upang maghanda ng 1X PBS mula sa 10X stock solution:

Gumawa ng isang 1:10 pagbabanto. Halimbawa, upang maghanda ng 1 litro ng 1X PBS, sukatin ang 100 ML ng solusyon sa stock at magdagdag ng 700 ml ng sterile distilled water. Ayusin ang pH at punan ang dami ng tubig hanggang sa 1000 ml.

Ang handa na PBS buffer ay walang kulay at malinaw.

Ang araw-araw na PBS ay maaaring maiimbak sa temperatura ng silid at ang natitira sa ref.

Mga solusyon para sa pagsasaayos ng pH

HCl

Para sa 100 ml ng 1 molar HCL (hydrochloric acid).

Sukatin ang 91 ML ng distilled water at ilagay ito sa isang 250-mL beaker.

Sukatin ang 8.62 mL ng concentrated HCl at dahan-dahang idagdag ito sa beaker na naglalaman ng tubig (huwag gawin ito sa ibang paraan). Kumuha ng naaangkop na mga hakbang sa biosafety kapag paghawak ng mga malakas na acid (mataas na kinakaing unti-unti na sangkap).

Paghaluin para sa 5 minuto mas mabuti gamit ang isang nakapupukaw plate na may magnetic bar sa loob ng baso. Maglipat sa isang 100 ml na flask at gumawa ng hanggang sa 100 ml na may distilled H ₂ O.

NaOH

Para sa 100 ML ng NaOH (sodium hydroxide) 10 molar.

Sukatin ang 40 ML ng distilled water at ilagay ito sa isang 250-mL beaker. Sukatin ang 40 g ng NaOH at idagdag sa tubig. Paghaluin gamit ang isang nakapupukaw plate na may magnetic bar sa loob ng baso.

Lumipat sa isang 100 ml volumetric flask at bumubuo sa marka na may distilled water. Sumunod sa mga regulasyon ng biosafety, dahil ang reaksyon na ito ay exothermic (naglalabas ito ng enerhiya sa anyo ng init).

Kung nais mong maghanda ng iba pang mga halaga ng solusyon sa pospeyt na asin, maaari kang kumunsulta sa sumusunod na talahanayan:

Pinagmulan: «Laboratory of Viral and Human Genomics, UASLP School of Medicine»

Aplikasyon

Pangunahin itong ginagamit sa cell biology, immunology, immunohistochemistry, bacteriology, virology, at mga laboratoryo sa pananaliksik.

Ito ay mainam para sa paghuhugas ng cell sa pamamagitan ng sentripugasyon (pulang selula ng dugo), paghuhugas ng cell monolayer, sa mga diskarte sa spectroscopic ellipsometry, sa dami ng mga bakterya na biofilms, sa pagpapanatili ng mga kultura ng cell para sa mga virus, bilang isang solusyon sa paghuhugas sa hindi direktang pamamaraan ng immunofluorescence at sa mga pamamaraan para sa pagkilala sa mga monoclonal antibodies.

Ginagamit din ito upang magdala ng mga cell o tisyu, bilang isang natutunaw para sa pagbibilang ng cell, ang paghahanda ng mga cellular enzymes (trypsin), bilang isang diluent para sa pamamaraan ng desiccation ng biomolecule at upang maghanda ng iba pang mga reagents.

Sa kabilang banda, ipinakita ni Martin et al. Noong 2006 na ang PBS ay kapaki-pakinabang sa mga forensic laboratories science, partikular sa pagbawi ng sperm mula sa mga vaginal smear, o sa pagbawi ng mga vaginal cells mula sa penile smear. Sa ganitong paraan maaari itong maitatag kung nagkaroon ng isang sekswal na relasyon.

Mga Limitasyon

-Ang ilan sa mga buffer ng PBS ay naglalaman ng isang sangkap na tinatawag na sodium azide bilang isang pangangalaga. Ang tambalang ito ay maaaring makabuo ng mga paputok na sangkap kung nakikipag-ugnay sa tingga o tanso. Para sa kadahilanang ito, dapat gawin ang espesyal na pangangalaga kapag itinapon ang reagent na ito sa paagusan. Kung ito ay itinapon sa paraang ito, maraming tubig ang dapat idagdag upang mapalunaw ito hangga't maaari.

Ang Zinc ay hindi dapat idagdag sa buffer ng pospeyt, dahil sanhi ito ng ilang mga asing-gamot.

-Wangen et al. Noong 2018 natukoy na ang paggamit ng PBS ay hindi angkop para sa paghuhugas ng pangunahing talamak na myeloid leukemia (AML) na mga cell na nakuha mula sa peripheral na dugo, dahil sa katotohanan na maraming mga cell ang nawala sa lysis, na may malaking pagbaba sa materyal protina.

Samakatuwid, napagpasyahan nila na ang mga pangunahing mga cell ng AML ay hindi dapat hugasan kasama ang PBS pagkatapos ng imbakan sa likidong nitrogen.

Mga Sanggunian

1. Coll J. (1993). Mga diskarte sa diagnostic sa virology. Ed Díaz de Santos. 360 pg
2. Si Rodíguez M, kultura ng Ortiz T. Cell. Pagbabago ng Katamtaman. Kagawaran ng Normal at Pathological Cytology at Histology University of Seville. Magagamit sa personal.us.es
3. Paghahanda ng Phosphate Buffered Saline (PBS). (2008). Mga Pamantayang Pamamaraan sa Operating (SOP) Human and Viral Genomics Laboratory UASLP School of Medicine. Magagamit sa: genomica.uaslp.mx
4. "Phosphate Buffer Saline." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 3 Apr 2019, 19:36 UTC. 13 Apr 2019, 02:57 en.wikipedia.org.
5. Pietrasanta L, Von-Bilderling C. Mga paksa sa molekular na biophysics. Magagamit sa: mga gumagamit.df.uba.ar
6. Rediar. Manwal. PBS + EDTA. Magagamit sa: felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurk K, Lucy D, scrimger DG. Ang paggamit ng pospeyt na buffered saline para sa pagbawi ng mga cell at spermatozoa mula sa pamunas. Hustisya ng Sci. 2006; 46 (3): 179-84. Magagamit sa: ncbi.nlm.nih.gov
8. Wangen R, Aasebø E, Trentani A, et al. Paraan ng Pag-iingat at Phosphate Buffered Saline Washing Naapektuhan ang Acute Myeloid Leukemia Proteome. Int J Mol Sci. 2018; 19 (1): 296. Magagamit sa: ncbi.nlm.nih.gov
9. Martínez R, Gragera R. (2008). Ang teoretikal at praktikal na mga pundasyon ng histochemistry. Superior Council of Scientific Investigations. Madrid. Magagamit sa: books.google.co.ve