HISTOCHEMISTRY: RATIONALE, PROCESSING, PAGLAMLAM - BIOLOGY - 2025

Ang histochemical ay isang kapaki-pakinabang na tool sa pag-aaral ng morphology ng iba't ibang mga biological tisyu (halaman at hayop) dahil sa reaksyon na reaksyon nito ng mga sangkap ng tisyu tulad ng mga karbohidrat, lipid at protina, bukod sa iba pang mga kemikal na tina.

Ang mahalagang tool na ito ay nagbibigay-daan hindi lamang upang makilala ang komposisyon at istraktura ng mga tisyu at mga cell, kundi pati na rin ang iba't ibang mga reaksyon na nagaganap sa kanila. Gayundin, ang posibleng pinsala sa tisyu na sanhi ng pagkakaroon ng mga microorganism o iba pang mga pathologies ay maaaring mapatunayan.

Mga batik sa histochemical. Ang virus ng ilong, positibo ang Gram at negatibong bakterya ng Gram (Gram), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Pinagmulan: Pixinio.com/Wikipedia.org/Nephron / CDC / Dr. George P. Kubica

Ang histochemistry, mula noong mga nakaraang siglo ay nagbigay ng mahahalagang mga kontribusyon, tulad ng pagpapakita ng pagkakaroon ng hadlang sa dugo-utak ni Paul Ehrlich. Posible ito dahil ang utak ng eksperimentong hayop na ginamit ni Ehrlich ay hindi marumi sa aniline, na isang pangunahing pangulay.

Ito ay humantong sa paggamit ng iba't ibang mga tina tulad ng methylene na asul at indophenol, upang mapanatili ang iba't ibang uri ng mga cell. Ang paghanap na ito ay humantong sa pag-uuri ng mga cell sa acidophilic, basophilic at neutrophilic, ayon sa kanilang tukoy na paglamlam.

Inilapat ng mga kamakailang pag-aaral ang pamamaraang ito upang maipakita ang pagkakaroon ng iba't ibang mga compound, kabilang ang mga phenol, pati na rin ang mga karbohidrat at non-struktural lipid, sa mga tisyu ng mga species ng glaucescens ng Litsea, na mas kilala bilang laurel. Ang paghahanap ng mga ito, kapwa sa dahon at sa kahoy.

Gayundin, kinilala ni Colares et al, 2016 ang halaman ng interes sa panggamot na si Tarenaya hassleriana, gamit ang mga diskarte sa histochemical. Sa species na ito ang pagkakaroon ng starch, myrosine, pati na rin ang mga phenolic at lipophilic compound ay napatunayan.

Batayan

Ang histochemistry ay batay sa paglamlam ng mga cellular na istruktura o mga molekula na naroroon sa mga tisyu, salamat sa kanilang pagkakaugnay sa mga tiyak na tina. Ang reaksyon ng kulay ng mga istrukturang ito o molekula sa kanilang orihinal na format, ay kalaunan ay isinalarawan sa optical mikroskopyo o elektron mikroskopyo.

Ang pagiging tiyak ng paglamlam ay dahil sa pagkakaroon ng mga pangkat na tinatanggap ng mga ion na naroroon sa mga cell o mga molekula ng tisyu.

Sa wakas, ang layunin ng mga reaksyon ng histochemical ay upang maipakita ito sa pamamagitan ng paglamlam. Mula sa pinakamalaking pinakamalaking istraktura hanggang sa pinakamaliit ng mga tisyu at mga cell. Ito ay maaaring makamit salamat sa ang katunayan na ang mga tina ay gumanti nang kemikal sa mga molekula ng mga tisyu, mga cell o mga organelles.

Pag-uusig

Ang reaksyon ng histochemical ay maaaring kasangkot sa mga hakbang bago isagawa ang pamamaraan, tulad ng pag-aayos, pag-embed at pagputol ng tisyu. Samakatuwid, dapat isaalang-alang na sa mga hakbang na ito ang istraktura na makikilala ay maaaring masira, na magbubunga ng mga maling negatibong resulta, kahit na ito ay naroroon.

Sa kabila nito, mahalaga ang naunang pag-aayos ng tisyu nang maayos, dahil pinipigilan nito ang autolysis o pagkasira ng cell. Para sa mga ito, ang mga reaksyon ng kemikal ay ginagamit sa mga organikong solvent tulad ng: formaldehyde o glutaraldehyde, bukod sa iba pa.

Ang pagsasama ng tela ay ginagawa upang mapanatili ang katatagan nito kapag pinutol at sa gayon ay pinipigilan ito mula sa pag-deform. Sa wakas, ang hiwa ay ginawa gamit ang isang microtome para sa pag-aaral ng mga sample sa pamamagitan ng optical microscopy.

Bilang karagdagan, bago magpatuloy sa paglamlam sa histochemical, inirerekomenda na isama ang panlabas o panloob na positibong kontrol sa bawat batch ng mga pagsubok. Pati na rin ang paggamit ng mga tukoy na tina para sa mga istruktura na pag-aralan.

Mga batik sa histochemical

Mula sa paglitaw ng mga pamamaraan ng histochemical hanggang sa kasalukuyan, ang isang malawak na hanay ng mga batik ay ginamit, kasama na ang mga madalas na ginagamit tulad ng: Panahong acid Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen at Gram.

Gayundin, ang iba pang mga tina ay ginamit nang hindi gaanong madalas tulad ng India tinta, orcein o mantsa ng trichrome ng Masson, bukod sa iba pa.

Panahon ng Acid Schiff (PAS)

Sa pamamagitan ng kulay na ito, ang mga molekula na may mataas na nilalaman ng karbohidrat ay maaaring sundin, tulad ng: glycogen at mucin. Gayunpaman, kapaki-pakinabang din ito para sa pagkilala sa mga microorganism tulad ng fungi at parasites. Bilang karagdagan sa ilang mga istraktura (basement membrane) sa balat at iba pang mga tisyu.

Ang batayan para sa paglamlam na ito ay ang pangulay na nag-oxidize ng mga bono ng carbon sa pagitan ng dalawang kalapit na grupo ng hydroxyl. Ginagawa nito ang pagpapakawala ng pangkat ng aldehyde, at ito ay napansin ng reakent ng Schiff, na nagbibigay ng kulay na lilang.

Ang reagent ng Schiff ay binubuo ng mga pangunahing fuchsin, sodium metabisulfite at hydrochloric acid, ang mga sangkap na ito ay responsable para sa lila na kulay, kapag ang mga pangkat ng aldehyde. Kung hindi man ay nabuo ang isang walang kulay na acid.

Ang kasidhian ng kulay ay depende sa dami ng mga pangkat ng hydroxyl na naroroon sa monosaccharides. Halimbawa, sa fungi, basement membranes, mucins at glycogen ang kulay ay maaaring pumunta mula pula hanggang lila, habang ang asul na batik ay asul.

Grocott

Ito ay isa sa mga mantsa na may pinakamataas na sensitivity sa pagkilala ng mga fungi sa mga paraffin-embed na tisyu. Pinapayagan nito ang pagkilala sa iba't ibang mga istruktura ng fungal: hyphae, spores, endospores, bukod sa iba pa. Samakatuwid, ito ay itinuturing na isang regular na mantsa para sa diagnosis ng mycosis.

Lalo na ginagamit ito sa diagnosis ng pulmonary mycoses tulad ng pneumocystosis at aspergillosis na sanhi ng ilang mga fungi ng genera Pneumocystis at Aspergillus, ayon sa pagkakabanggit.

Ang solusyon na ito ay naglalaman ng pilak na nitrate at chromic acid, ang huli ay isang fixative at colorant. Ang katwiran ay ang acid na ito ay gumagawa ng oksihenasyon ng mga pangkat ng hydroxyl sa aldehydes, sa pamamagitan ng mucopolyacharides na naroroon sa mga fungal na istruktura, halimbawa sa cell wall ng fungi.

Sa wakas, ang pilak na naroroon sa solusyon ay na-oxidized ng aldehydes, na nagiging sanhi ng isang itim na kulay, na tinatawag na reaksyon ng argentafin. Ang mga konting dyes tulad ng light green ay maaari ding magamit at sa gayon ang mga istruktura ng fungal ay masusunod sa itim na may isang ilaw na berdeng background.

Ziehl-Neelsen

Ang paglamlam na ito ay batay sa pagkakaroon ng resistensya ng acid-alkohol, bahagyang o ganap, sa ilang mga microorganism tulad ng Nocardia, Legionella at Mycobacterium genera.

Inirerekomenda ang paggamit ng mantsa na ito, dahil ang cell pader ng dating nabanggit na microorganism ay naglalaman ng mga kumplikadong lipid na pumipigil sa pagtagos ng mga tina. Lalo na sa mga sample mula sa respiratory tract.

Sa loob nito, ang mga malakas na colorant tulad ng carbol fuchsin (pangunahing colorant) ay ginagamit at inilalapat ang init upang mapanatili ng microorganism ang colorant at hindi ito madidiskubre ng mga acid at alcohol. Sa wakas, ang isang solusyon ng asul na methylene ay inilalapat upang kulayan ang mga istruktura na naging pagkawalan ng kulay.

Ang pagkakaroon ng paglaban ng acid-alkohol ay sinusunod sa mga istruktura na may mantsa na pula, habang ang mga istruktura na hindi lumalaban sa pagkupas ay namantsahan na asul.

Gram at chinese tinta

Ang Gram ay isang napaka-kapaki-pakinabang na mantsa sa diagnosis ng mga impeksyon sa bakterya at fungal, bukod sa iba pa. Ang paglamlam na ito ay nagbibigay-daan sa pagkakaiba sa pagitan ng Gram-positibo at Gram-negatibong microorganism, malinaw na ipinapakita ang mga pagkakaiba-iba na umiiral sa komposisyon ng cell wall.

Habang ang tinta ng India ay isang mantsa na ginagamit upang maihahambing ang mga istruktura na naglalaman ng polysaccharides (kapsula). Ito ay dahil ang isang singsing ay nabuo sa kapaligiran, posible sa Cryptococcus neoformans.

Orcein

Gamit ang paglamlam na ito, ang nababanat na mga hibla at kromosom ng iba't ibang mga cell ay may kulay, na pinapayagan ang pagsusuri ng proseso ng pagkahinog ng huli. Para sa kadahilanang ito, naging kapaki-pakinabang ito sa mga pag-aaral ng cytogenetic.

Ito ay batay sa pag-aalsa ng pangulay sa pamamagitan ng negatibong singil ng mga molekula tulad ng DNA, na naroroon sa nuclei ng isang iba't ibang uri ng mga cell. Kaya ang mga ito ay namantsahan asul hanggang sa madilim na lila.

Trichrome ng Masson

Ang mantsang ito ay ginagamit upang makilala ang ilang mga microorganism o mga materyales na naglalaman ng melanic pigment. Ito ang kaso ng mycoses, na sanhi ng dematiaceous fungi, pheohifomycosis at sa itim na butil eumycetoma.

Pangwakas na mga saloobin

Sa mga nagdaang taon maraming mga pagsulong sa paglikha ng mga bagong pamamaraan ng diagnostic, kung saan kasangkot ang histochemistry ngunit naka-link sa iba pang mga pundasyon o prinsipyo. Ang mga pamamaraan na ito ay may ibang layunin, tulad ng sa kaso ng immunohistochemistry o enzymohistochemistry.

Mga Sanggunian

1. Acuña U, Elguero J. Histoquímica. Isang Chem. 2012; 108 (2): 114-118. Magagamit sa: ay.iqm.csic.es
2. Ang Mestanza R. Dalas ng PAS, Grocott at Ziehl-Neelsen na mga statochemical stain na ginamit para sa pagkilala sa mga microorganism, na isinagawa sa Pathological Anatomy Service ng Eugenio Espejo Specialty Hospital noong 2015.. Central University ng Ecuador, Quito; 2016.Ang magagamit sa: dspace.uce.edu
3. Tapia-Torres N, de la Paz-Pérez-Olvera C, Román-Guerrero A, Quintanar-Isaías A, García-Márquez E, Cruz-Sosa F. Kasaysayan, kabuuang nilalaman ng phenol at antioxidant na aktibidad ng dahon ng litaw at kahoy glaucescens Kunth (Lauraceae). Kahoy at Kagubatan 2014; 20 (3): 125-137. Magagamit sa: redalyc.org
4. Colares, MN, Martínez-Alonso, S, Arambarri, AM. Ang anatomy at histochemistry ng Tarenaya hassleriana (Cleomaceae), isang species ng interes sa panggamot. Latin American at Caribbean Bulletin ng Mga Gamot at Aromatikong Halaman 2016; 15 (3): 182-191. Magagamit sa: redalyc.org
5. Bonifaz A. Pangunahing medikal na mycology. Ika-4 na edisyon. Mexico: Mga editor ng McGraw-Hill Interamericana, SA de CV 2012.
6. Silva Diego Filipe Bezerra, Santos Hellen Bandeira de Pontes, León Jorge Esquiche, Gomes Daliana Queiroga de Castro, Alves Pollianna Muniz, Nonaka Cassiano Francisco Weege. Clinico pathological at immunohistochemical analysis ng spindle cell squamous cell carcinoma ng dila: isang bihirang kaso. Einstein (São Paulo) 2019; 17 (1): eRC4610. Magagamit mula sa: scielo.br