XLD AGAR: MAKATUWIRAN, PAGHAHANDA, AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang XLD agar o Xylose Lysine desoxycholate agar medium ay isang pumipili at pagkakaiba ng solidong kultura para sa paghihiwalay ng mga enteropathogens. Dinisenyo ni Taylor ang XL agar (Xylose, Lysine) na formula upang mapagbuti ang paghihiwalay ng genus ng Shigella.

Napansin niya na ang genus na ito ay hinarang sa karamihan ng media na inilaan para sa paghihiwalay ng mga enteropathogens. Kasunod nito, ang sodium deoxycholate, sodium thiosulfate at ferric ammonium citrate ay idinagdag upang madagdagan ang selectivity nito. Ang pormula na ito ay napatunayan na kapaki-pakinabang para sa parehong paghihiwalay ng Shigella at Salmonella.

Mga pagkakaiba-iba ng mga kolonya ng Shigella, Salmonella at coliforms sa XLD agar. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Mga Kulay. Mga Pinagmumulan: A. Ni: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, Kagandahang-loob: Public Library Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Ni: CDC / Dr. JJ magsasaka, Kagandahang-loob: Public Library Image Library

Ang XLD agar ay binubuo ng yeast extract, sodium deoxycholate, xylose, lysine, lactose, sucrose, sodium thiosulfate, ferric ammonium citrate, sodium chloride, phenol red at agar. Sa karamihan ng mga laboratoryo ng bacteriology, ang duo XLD agar at SS agar ay ginagamit para sa pagsusuri ng mga fecal sample para sa Shigella at Salmonella.

Mas gusto ng ibang mga laboratoryo ang pagsasama ng CHROMagar Salmonella at XLD agar, bukod sa iba pang magagamit na mga pagpipilian. Ang mga duos na ito ay maaaring ihanda sa dobleng pinggan ng Petri. Sa isang tabi inilalagay nila ang XLD agar at sa kabilang panig ang iba pang napiling daluyan.

Batayan

-Nagiging kapangyarihan

Ang XLD agar ay may yeast extract, na nagsisilbing mapagkukunan ng mga nutrisyon para sa mga microorganism na lumalaki sa agar na ito. Bilang karagdagan, ang pagkakaroon ng mga karbohidrat (xylose, sucrose at lactose) ay nagbibigay ng enerhiya sa mga bakterya na maaaring mag-ferment sa kanila.

-Selectivity ng medium

Bilang isang nakakapagpigil na sangkap, nagtatanghal ito ng sodium deoxycholate; Pinipigilan nito ang paglaki ng Gram positibong bakterya, na nagbibigay sa daluyan ng isang pumipili na character.

-Magkakaroon ng kapangyarihan

Karaniwang mga kolonya ng Shigella

Tulad ng nabanggit na, ang XLD agar ay naglalaman ng xylose; Ang karbohidrat na ito ay ferment ng lahat ng mga bakterya na lumalaki sa daluyan na ito maliban sa genus ng Shigella.

Ito ay isa sa mga katangian na nagbibigay sa katangian nito sa pagkakaiba-iba, dahil ang mga kolonya ng Shigella ay nakikilala mula sa natitira sa pamamagitan ng pagbuo ng mga pulang kolonya, habang ang iba pang mga bakterya ay gumagawa ng mga dilaw na kolonya.

Karaniwang mga kolonya ng Salmonella

Ang genus Salmonella ay nagbibigay din ng xylose, una na bumubuo ng mga dilaw na kolonya. Gayunpaman, pagkatapos na maubos ang carbohydrate xylose, inaatake nito ang lysine para sa enzyme na lysine decarboxylase. Ang decarboxylation ng lysine ay bumubuo ng alkalis na bumabago ang kulay ng kolonya at ang nakapalibot na daluyan sa orihinal na pula.

Ang pag-uugali na ito ay isinasagawa lamang ni Salmonella, dahil ang mga coliform na decarboxylate lysine ay hindi maaaring mag-alkalize ng daluyan. Ito ay dahil ang mga coliform ay dinadagdagan ang lactose at sucrose na naroroon; samakatuwid, ang paggawa ng mga asido ay napakataas, nag-iiwan ng dilaw na kolonya sa mga bakterya na ito.

Dapat pansinin na ang genus ng Salmonella ay hindi nag-ferrose ng sucrose o lactose.

Produksyon ng H

Pinapayagan din ng XLD agar ang pagtuklas ng H ₂ S- paggawa ng mga uri ng Salmonella ; Para sa mga ito, nakasalalay ito sa mapagkukunan ng asupre na kinakatawan ng sodium thiosulfate at isang developer ng reaksyon, na kung saan ay ferric ammonium citrate.

Ang huli ay tumugon sa H ₂ S (walang kulay na gas) at bumubuo ng isang nakikitang hindi matutunaw na itim na pag-usbong ng bakal na sulpate. Sa kahulugan na ito, ang mga katangian ng mga kolonya ng salmonella ay magiging pula na may itim na sentro.

Dapat pansinin na maganap ang reaksyon ng pagbuo ng H ₂ S, kinakailangan ang isang alkalina na pH. Iyon ang dahilan kung bakit ang iba pang Enterobacteriaceae na bumubuo ng H ₂ S ay hindi magagawa o gawin itong hindi maganda sa daluyan na ito, dahil ang mataas na kaasiman na ginawa sa pamamagitan ng pagbuburo ng mga karbohidrat na naroroon ay pumipigil o humahadlang sa reaksyon.

-Sodium klorido, agar at red na phenol

Sa wakas, ang sodium klorido ay nagpapanatili ng balanse ng osmotic; ang agar ay ang solidifying agent at ang phenol red ay nakakita ng mga pagbabago sa pH, na lumiliko ang kulay ng mga kolonya at daluyan.

Paghahanda

Tumimbang ng 55 g ng dehydrated XLD medium at matunaw sa 1 litro ng tubig. Init at pukawin ang pinaghalong hanggang sa maabot ang kumukulo. Huwag mag-overheat, dahil pinapahamak ng init ang daluyan at lumilikha ng isang pag-unlad na nagbabago sa morpolohiya ng mga karaniwang kolonya.

Ang daluyan na ito ay hindi dapat ma-autoclaved. Kapag natutunaw, dapat itong maipasa sa isang paliguan ng tubig sa 50 ° C. Kapag ang paglamig, dapat itong ihain nang direkta sa sterile pinggan Petri. Maaari silang ibuhos sa iisang plate o dobleng plate. Iniwan sila upang palakasin at maiimbak sa ref hanggang magamit.

Ang temperatura bago gamitin. Dahil ito ay isang di-sterile medium, inirerekomenda na ihanda ito malapit sa petsa ng paggamit.

Ang pangwakas na pH ng daluyan ay dapat na 7.4 ± 0.2. Ang kulay ng handa na daluyan ay orange-pula, translucent, nang walang pag-asa.

Kung mayroon kang base na Xylose Lysine (XL), maaari kang magdagdag ng sodium deoxycholate, sodium thiosulfate at iron ammonium citrate. Sa ganitong paraan, ang formula ng XLD agar ay nakuha.

Aplikasyon

Ang XLD agar ay ginagamit para sa pagbawi ng mga enteropathogen, pangunahin sa genus na Shigella at pangalawa ng genus na Salmonella. Ito ay kapaki-pakinabang para sa pagtatasa ng mga stool, tubig at mga sample ng pagkain.

Mga uri ng mga sample

Mga Feces

Ang mga sample ng scool ay maaaring itanim nang diretso sa XLD agar, na gumagawa ng isang mahusay na pamamahagi ng materyal upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya.

Upang mapabuti ang pagbawi sa Salmonella, ang XLD agar ay maaaring makitid mula sa media sa pagpapayaman ng Salmonella.

Pagkain

Sa kaso ng pagkain, maaaring magamit ang mga sabaw ng pagpapayaman para sa Salmonella at Shigella. Para sa Salmonella maaari mong gamitin ang selenite sabaw ng cystine, maliwanag na berdeng tetrathionate sabaw, bukod sa iba pa.

Sa kaso ng Shigella, maaari itong mapayaman sa sabaw ng Shigella na may 0.5 µ / ml ng novobiocin, incubated sa 42 ° ± 1 ° C sa loob ng 16-20 na oras.

Tubig

Sa pagsusuri ng tubig, ang diskarte sa pagsasala ng lamad at ang paggamit ng XLD agar ay inirerekomenda, bukod sa iba pa.

Mga kondisyon sa pagtatanim at pagkakakilanlan

Ang seeded medium ay incubated aerobically sa 35 ° C sa loob ng 24 hanggang 48 na oras.

Ang karaniwang mga kolonya ng bawat genus ay sinusunod, ang mga kahina-hinalang mga kolonya ay dapat sumailalim sa mga pagsubok sa biochemical para sa kanilang pagkakakilanlan.

QA

Upang masuri ang kalidad ng kontrol ng daluyan, maaaring gamitin ang mga sumusunod na bakterya na mga bakterya: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 422 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Ang genus Salmonella ay nailalarawan sa pamamagitan ng pagpapakita ng mga pulang kolonya na may isang itim na sentro o ganap na itim na kolonya sa daluyan na ito. Sapagkat, sa genus ng Shigella ang mga kolonya ay dapat na pula, iyon ay, ang kulay ng daluyan.

Sa kaso ng Escherichia coli, inaasahan na maging ganap o bahagyang pipigilan; kung lumalaki ang mga kolonya ay dilaw. Para sa Proteus mirabilis, ang mahinang paglaki ay inaasahan na may mga kulay rosas na kolonya na mayroon o walang isang itim na sentro. Kalaunan ang genus ng Klebsiella ay lalago bilang dilaw na kolonya.

Pangwakas na mga saloobin

Ang XLD agar ay malawakang ginagamit sa mga laboratoryo ng bacteriology para sa mataas na kahusayan para sa pagbawi ng Shigella at mayroon ding isang mahusay na pagbawi ng genus Salmonella.

Rall et al. (2005) sa kanilang trabaho na pinamagatang "Ebalwasyon ng tatlong mga sabaw ng pagpayaman at limang solidong media para sa pagtuklas ng Salmonella sa mga manok" ay nagpakita na ng 3 klasikong media na nasubok (maliwanag na berdeng agar, SS agar at XLD agar) , XLD agar ay ang pinakamahusay na rate ng pagbawi.

Ang mga porsyento ng pagbawi ay ang mga sumusunod: 13.8% para sa maliwanag na berdeng agar, 27.6% para sa SS, at 34.5% para sa XLD. Ang Rambach agar na may 48% na pagbawi at ang CHROMagar na may 79.3% ay nalampasan lamang ng chromogenic media.

Mga Sanggunian

1. Mga karamdaman sa panganak na pagkain. Shigellosis. Magagamit sa: anmat.gov.ar
2. "XLD agar." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 9 Peb 2019, 11:46 UTC. 10 Abril 2019, 19:25 wikipedia.org
3. Mga Laboratoryo ng BBL. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 Magagamit sa: bd.com
4. Lab. Neogen. XLD agar. Magagamit sa: foodsafety.neogen
5. Francisco Soria Melguizo Laboratory. XLD Agar. Magagamit sa: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Pagsusuri ng tatlong mga sabaw ng pagpapayaman at limang kalupkop na media para sa pagtuklas ni Salmonella sa mga manok. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Magagamit mula sa: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.