NEUBAUER KAMARA: KASAYSAYAN, KATANGIAN, GINAGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang kamara sa Neubauer , hematometer o hemocytometer, ay isang instrumento sa laboratoryo na binubuo ng isang espesyal na makapal na plate na salamin. Ang camera na ito ay ginagamit upang mabilang ang ilang mga uri ng cell tulad ng mga pulang selula ng dugo, mga puting selula ng dugo at mga platelet, bagaman maaari itong magamit upang mabilang ang spores, sperm, parasites, atbp.

Nagtatanghal ito ng ilang mga kakaibang katangian, dahil binubuo ito ng 3 mga zone, isang gitnang isa para sa pagbilang at dalawang mga zone ng suporta. Ang bawat silid ay may dalawang bilang ng mga zon o crosshair, isa sa itaas at isa sa ibaba.

Kamara sa Neubauer. Pinagmulan: SantiBadia. Na-edit na imahe.

Ang mga ito ay may maraming mga dibisyon sa isang form ng grid. Ang mga bilang ng mga bilang ay ang mga daluyan ng mga parisukat na matatagpuan sa 4 na sulok ng parehong graticules, kasama ang gitnang parisukat.

Ang pagpupulong ng camera ay dapat gawin nang may mahusay na pag-aalaga, dahil ang anumang detalye ay nakakaimpluwensya sa bilang ng cell. Maraming mga pagkakamali na maaaring magawa, ngunit kung ang alinman sa mga ito ay nangyari, ang camera ay dapat na ma-disassembled, malinis at muling magkasama. Kasama sa mga pangunahing error ang sumusunod:

Umaapaw sa kamara o underfilling, pinapayagan ang silid ng kamara, sinusubukan na tanggalin ang labis na likido na may gasa, tipping ang silid kapag pinadalhan ito, pinupunan ang isang marumi o basang kamara, hindi pinaghahalo ang pagbabalot o halimbawang mabuti, bukod sa iba pa. Ang lahat ng mga pagkakamaling ito ay magreresulta sa isang hindi tunay na halaga.

Kasaysayan

Ang kamara sa Neubauer ay isang instrumento ng katumpakan, at ang proseso ng paggawa ay sumailalim sa mahigpit na kontrol sa kalidad. Ito ay nilikha para sa tumpak na pagbibilang ng mga particle o nabuo na mga elemento bawat mm ³ , tulad ng mga cell sa iba't ibang mga likido. Ang pinong graphic nito ay inukit ng isang lapis na brilyante.

Mga katangian ng kamara sa Neubauer

Ang buong kamara ay ang laki ng isang normal na slide upang mailagay ito sa yugto ng mikroskopyo.

Ang silid ay binubuo ng tatlong gitnang hugis-parihaba na ibabaw (a, b, c). Sa zone na "b" ay matatagpuan ang R zone o pagbilang ng zone, na tinatawag ding isang reticulum. Isa sa bawat panig ng camera, na pinaghiwalay ng zone "d".

Mga graphic na diagram ng Neubauer Chamber. Pinagmulan: Praktikal na Gabay sa Hematology. Paaralan ng Bioanalysis ng University of Carabobo, Venezuela.

Ang bawat graticule ay isang pinakintab na lugar na naglalaman ng bilang ng bilang ng mga nakaukit. Binubuo ito ng isang parisukat na may isang ibabaw na lugar na 9 mm ² at panloob na nahahati sa 9 na mga parisukat na may isang lugar na pang-ibabaw na 1 mm ² bawat isa. Ang apat na mga parisukat na sulok ay nahahati sa 16 na mas maliit na mga parisukat (0.0625 mm ² sa lugar).

Ang mga grids na ito ay nabuo sa pamamagitan ng isang serye ng mga linya ng milimetro na magkatugma sa bawat isa, na bumubuo ng perpektong graphed grids na pinapaburan sa mga sukat na natukoy. Ang mga linyang ito ay nakaukit ng tip sa brilyante.

Pinahusay na Neurauer reticulum. Pinagmulan: Praktikal na gabay ng Hematology ng School of Bioanalysis ng University of Carabobo, Venezuela.

Ang apat na panig ay tumutugma sa lugar ng pagbilang. Sa mga panig o sulok na ito na ang karamihan ng mga cell (pulang mga selula ng dugo at leukocytes) ay binibilang, habang ang mga platelet ay binibilang sa gitnang lugar.

Ang gitnang zone ay may higit pang mga dibisyon, binubuo ito ng isang 1 mm ² square na nahahati sa 25 mga parisukat na may isang lugar na pang-ibabaw na 0.04 mm ² bawat isa. Ang mga ito ay nahahati sa 16 grids na may isang lugar na 0.0025 mm ² .

Paglalarawan ng pinahusay na Neubauer reticulum. a) square ng mga sulok, b) gitnang parisukat, c) median square ng gitnang parisukat. Pinagmulan: Praktikal na gabay ng Hematology ng School of Bioanalysis ng University of Carabobo, Venezuela.

Ang Zone "a" at "c" ay nagsisilbing suporta upang maglagay ng isang espesyal na takip ng takip na tinatawag na isang hematometric slide o hematimeter cover.

Ang taas sa pagitan ng foil at ang pagbilang ng ibabaw ay 0.1 mm. Ang mga pagsukat ng lugar ng ibabaw ng mga kahon ng tally, pati na rin ang taas ng kamara at pagbabanto ng sample, ay kinakailangan ng data upang makagawa ng pangwakas na mga kalkulasyon.

Aplikasyon

Ginagamit ito para sa pagbibilang ng cell. Kapaki-pakinabang lalo na sa lugar ng hematology, dahil pinapayagan nito ang pagbibilang ng 3 serye ng selula ng dugo; ibig sabihin, ang mga pulang selula ng dugo, mga puting selula ng dugo, at mga platelet.

Gayunpaman, maaari itong magamit sa ibang mga lugar, halimbawa upang mabilang ang tamud, spora, bakterya o iba pang mga item na mahalaga depende sa uri ng sample.

Paano gamitin?

Halimbawang paghahanda

Upang maisagawa ang bilang ng cell, karaniwang nagsisimula ito mula sa isang nakaraang pagbabanto. Halimbawa: upang mabilang ang mga puting selula ng dugo, maghanda ng isang 1:20 pagbabanto sa likido ng Turk. Ang pagbabanto ay halo-halong mabuti bago ang pag-load ng pipette at pag-mount sa silid ng Neubauer.

Mayroong mga oras na ang isang pagbabawas ng 1:20 ay hindi sapat upang mabilang. Halimbawa, sa mga pasyente na nagdurusa mula sa ilang mga uri ng talamak na leukemias. Sa mga kasong ito, dapat gawin ang mas mataas na mga panlabas tulad ng 1: 100.

Kung, sa kabilang banda, ang bilang ay napakababa, tulad ng sa malubhang leukopenias, ang mga mas maliit na mga pagbabawas ay maaaring gawin upang tumutok ang sample. Halimbawa: maaari kang gumawa ng isang pagbabawas ng 1:10.

Ang mga pagbabago na ginawa ay nakakaimpluwensya sa mga kalkulasyon.

Pag-mount ng silid ng Neubauer

Ang silid ng Neubauer ay tipunin sa pamamagitan ng paglalagay ng hematometric slide sa gitnang lugar. Parehong dapat maging malinis at tuyo. Upang mailagay ang lamella, kinuha ito ng mga gilid at malumanay na bumaba sa camera.

Napupuno ito sa pamamagitan ng paglalagay ng dulo ng isang awtomatikong pipet o pipet ng Thoma sa isang anggulo ng 35 ° sa gilid ng zone ng paglo-load. Ang likido ay pinalabas ng maayos at ang lugar ng paglo-load ay napuno ng capillarity. Ginagawa ito mula sa magkabilang panig upang mai-load ang dalawang crosshair.

Ang mga reticle ay hindi dapat labis na ma-overload at hindi rin dapat tanggihan ang likido. Ang pag-load ay dapat eksaktong. Mahalaga na ang pagpuno ay ginagawa nang homogenous, iyon ay, hindi dapat magkaroon ng mga bula.

Sa sandaling tipunin ang silid, maiiwan upang magpahinga ng 2 minuto upang ang mga cell ay tumubo sa ilalim at mas madali ang kanilang paggunita at pagbibilang.

Matapos ang oras ng pahinga, naka-mount ito sa entablado ng light mikroskopyo para sa pagmamasid. Una ay nakatuon ito sa isang layunin ng 10X at kung kinakailangan pagkatapos ay pupunta ito sa 40X.

Upang mapabuti ang visualization nito, ang pagpasa ng ilaw mula sa mikroskopyo ay nabawasan. Upang gawin ito, ang condenser ay binabaan at ang dayapragm ay bahagyang sarado.

Nagbibilang

Para sa bilang ng mga puting selula ng dugo o leukocytes, dapat na mabilang ang buong ibabaw ng apat na mga parisukat na sulok ng panggitna at ang gitnang parisukat ng bawat reticulum.

Ang pagbibilang ay nagsisimula sa parisukat sa kanang kaliwang sulok. Nagsisimula ito mula sa unang parisukat ng unang hilera, iyon ay, mula kaliwa hanggang kanan hanggang sa marating ang kabaligtaran.

Doon ka bumababa at tumingin sa likod mula sa kanan hanggang kaliwa hanggang sa maabot mo ang kabilang dulo, at iba pa, ang mga cell sa loob ng bawat grid ay binibilang sa isang zigzag fashion. Ang 16 grids ng bawat median square ay binibilang.

Upang maiwasan ang pagbilang ng isang cell nang dalawang beses, may mga patakaran tungkol sa mga cell na matatagpuan sa mga hangganan na linya ng bawat grid. Ang mga cell sa kaliwa at tuktok na linya ay binibilang at ang mga cell sa kanan at ilalim na linya ay hindi pinansin.

Ang isang manu-manong cell counter ay dapat na magagamit upang ang operator ay pinindot ang key ng aparato nang maraming beses dahil may mga cell na sinusunod. Sa paggamit ng counter, ang operator ay maaaring mabilang nang hindi kinakailangang tumingin mula sa larangan ng mikroskopiko. Sa pagtatapos ng bilang, makikita mo ang kabuuang bilang ng mga cell na binibilang.

Pagkalkula

Ang mga pagkalkula ay maaaring gawin sa iba't ibang paraan. Ang isang solong graticule ay mabibilang o maaaring mabilang at pareho ay naiiba. Sa dalawang sitwasyong ito, ang mga bilang ng mga cell ay dapat na dumami ng isang kadahilanan, na sa kasong ito ay magiging 40. At sa gayon ang kabuuang bilang ng bawat mm ^{3 ay nakuha} .

Ngunit kung ang dalawang grids ay binibilang at ang average ay hindi kinuha, dapat itong dumami ng ibang kadahilanan, sa kasong ito sa pamamagitan ng 20.

-Multiplication factor

Narito kung paano kinakalkula ang kadahilanan ng pagpaparami.

Ang iba't ibang data ay isinasaalang-alang para sa mga kalkulasyon, kabilang ang titer ng pagbabawas, ang taas ng kamara at ang lugar na binibilang.

Paglabas

Ang karaniwang pagbabanto na ginamit ay 1:20 para sa bilang ng leukocyte.

Ang taas ng silid

Ang taas sa pagitan ng silid at ng selula ng dugo ay 0.1 mm.

Binibilang na lugar

Kung 5 mga parisukat ng 1mm ^{2 na} lugar ay binibilang , nangangahulugan ito na ang kabuuang bilang ng lugar ay 5mm ² . Ang data na ito ay dapat na pinarami ng taas ng kamara upang makuha ang kabuuang bilang ng bilang. Iyon ay, 5mm ² x 0.1mm = 0.5mm ³ .

Mga formula at kalkulasyon

Gamit ang data na mayroon kami ay sinabi:

Kung sa 0.5 mm ³ - mayroong --- bilang ng mga cell na binibilang

Sa 1 mm ³ --- magkakaroon ng - X n ° ng mga cell

X no. Ng mga cell = (hindi. Ng mga cell na binibilang x 1) / 0.5 mm ³

Ngunit ang pagbabanto ay dapat ding isaalang-alang. Samakatuwid, ang pormula ay ang mga sumusunod:

(bilang ng mga cell na binibilang x 1) x 20 / 0.5 mm ³

Sa wakas, upang mabubuod, ang bilang ng mga cell na binibilang ay maaaring dumami ng 40. Sa gayon, ang halaga ng mga leukocytes bawat mm ^{3 ay nakuha} .

Kung ang dalawang reticle ay nabibilang, ang data para sa binibilang na lugar ay binago, na sa kasong ito ay magiging 10 mga parisukat, iyon ay, 10 mm ² . At isang kabuuang bilang ng dami ng 1 mm3. Ang pormula ay:

(bilang ng mga cell na binibilang x 1) x 20/1 mm ³

Samakatuwid, sa kasong ito ang kadahilanan ng pagpaparami ay 20.

Pagkakamali

-Kung kapag naglo-load ng camera ito ay lumampas o lumampas sa likido, magkakaiba-iba ang taas ng camera. Nagreresulta ito sa bilang na mas mataas kaysa sa totoong bagay. Kung susubukan mong alisin ang labis na may gasa o koton, ito ay isang malaking pagkakamali. Ang pagkilos na ito ay magiging sanhi ng mga cell na tumutok, tumataas ang bilang.

-Kung ito ay nai-load nang mahina, ang bilang ay bababa kaysa sa tunay.

-Kung ang camera ay naka-mount at pinapayagan na matuyo, hindi na posible na mabilang dahil magbibigay ito ng maling resulta.

-Kung ang halimbawang sample ay hindi halo-halong mabuti bago ang paglo-load ng kamara, mayroong panganib ng isang error sa pagbabasa, dahil ang mga cell ay hindi ibinahagi sa homogenous. Samakatuwid, magkakaroon ng isang mas mababa o mas mataas na konsentrasyon ng mga cell, depende sa kung ang sample ay kinuha mula sa ibabaw ng likido o mula sa ilalim ng tubo ayon sa pagkakabanggit.

-Ang pagkakaroon ng mga bula ay binabawasan ang dami ng likido na dapat pumasok sa reticulum, nakakasagabal sa tamang paggunita at pamamahagi ng mga cell. Ang lahat ng ito ay makabuluhang nakakaapekto sa mga resulta.

-During pagbibilang, huwag tumingin mula sa mikroskopyo hanggang ang bawat malaking parisukat ay nakumpleto upang hindi mawala.

-Ang isang kadahilanan sa pagkakamali ay ang pagtagilid sa camera pagkatapos ng pag-mount. Para sa kadahilanang ito, ang yugto ng mikroskopyo ay dapat na maingat na itataas.

Rekomendasyon

Kung sa anumang kadahilanan na napansin mo ang isang abnormality sa pagpuno ng silid, mas mahusay na i-disassemble ang paghahanda na ito, linisin ang silid at muling pagsamahin mula sa simula.

Mag-ingat nang mabuti kapag nililinis ang camera upang maiwasan ang pag-alis ng mga cross hairs. Sa kabilang banda, magkaroon ng kamalayan na ang hematometric slide ay maselan at marupok. Ang hindi maayos na paghawak ay maaaring masira ito.

Bago ka magsimulang magbilang, siguraduhin na ang mga selula ay mahusay na ipinamamahagi. Ang isang hindi pantay na pamamahagi ng mga cell ay nangyayari mula sa hindi magandang sample ng paghahalo o pagbabanto. Kung nangyari ito, dapat na ulitin ang pagpupulong.

Ang isang paraan upang malaman kung ang mga selula ay mahusay na ipinamamahagi ay sa pamamagitan ng paghahambing ng bilang ng bawat malaking parisukat, ang bilang ng mga selula na binibilang ng bawat parisukat ay hindi dapat pinalaking naiiba sa isa't isa.

-Kung ang puting selula ng dugo ay higit sa 50,000 mm ^3, ipinapayong ulitin ang bilang, paggawa ng mas malaking pagbabanto.

Kung binago mo ang pagbabanto, dapat mong kalkulahin ang kadahilanan ng pagpaparami, dahil nakakaimpluwensya ito sa formula.

Mga Sanggunian

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Paghahambing ng konsentrasyon ng tamud gamit ang kamara ni Makler at kamara ni Neubauer. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Magagamit sa: scielo.
2. Kamara sa Neubauer. (2018, Marso 27). Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. Petsa ng konsultasyon: 04:10, Hunyo 23, 2019 mula sa es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Application ng isang alternatibong paraan ng pagbibilang sa Neubauer Chamber upang matukoy ang konsentrasyon ng Trichomonas vaginalis. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Magagamit sa: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Pagsusuri ng Spermogram. Rev. Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Magagamit sa: ve.scielo
5. Ang praktikal na gabay ng Hematology ng School of Bioanalysis ng University of Carabobo. Venezuela. 1998