MALONATE SABAW: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang malonate sabaw ay ang daluyong kultura daluyan na ginagamit para sa diagnostic test (malonate), na ginamit upang makilala ang ilang genera ng pamilya na Enterobacteriaceae. Nilikha ito ni Leifson noong 1933 at kalaunan ay binago ni Ewing, na nagdagdag ng isang maliit na halaga ng dextrose at lebadura ng lebadura sa orihinal na pormula.

Kasalukuyang binubuo ang daluyan ng yeast extract, ammonium sulfate, dipot potassium phosphate, monopot potassium phosphate, sodium chloride, sodium malonate, dextrose, at bromothymol na asul. Ang pagsubok na ito ay karaniwang kasama sa baterya ng pagkilala sa biochemical para sa Enterobacteriaceae, na tumutulong sa pag-iba-iba ng ilang mga genera at species.

Ang graphic na representasyon ng malonate test. A. Negatibong pagsubok, B. (Acidification) Negatibong pagsubok, C. (Medium alkalization) Positibong pagsubok. Pinagmulan: Mga tubo ng kulay publicdomainpictures.net

Ang malonate test ay higit sa lahat batay sa kakayahan ng ilang mga microorganism na gumamit ng sodium malonate bilang kanilang nag-iisang carbon source at ammonium sulfate bilang kanilang mapagkukunan ng nitrogen.

Ang malonate test ay karaniwang positibo sa ilang mga species ng Enterobacter, Klebsiella, at Citrobacter genera. Samantalang, ang karamihan sa mga species ng genera na Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus at Providencia, ay nagbibigay ng negatibong reaksyon.

Batayan

Ang malonate test ay binubuo ng pagpapakita ng mga bakterya na may kakayahang gumamit ng sodium malonate bilang nag-iisang mapagkukunan ng carbon at ammonium sulfate bilang mapagkukunan ng nitrogen.

Karamihan sa mga Enterobacteriaceae na hindi gumagamit ng malonate ay maaaring lumaki sa daluyan na ito, na kumukuha ng dextrose at lebadura na katas bilang mga nutrisyon.

Sa kasong ito, ang anumang pagtatangka upang maging alkalinize sa pamamagitan ng paggamit ng mga peptones ay mapipigilan ng paggawa ng mga acid na nabuo sa pamamagitan ng pagbuburo ng dextrose. Gayundin, ang mga posporus ng dipot potassium at monopotassium ay kumikilos bilang isang buffer, na pinapanatili ang pH sa 6.7.

Iyon ang dahilan kung bakit, kapag negatibo ang pagsubok, ang sabaw ay nananatiling parehong orihinal na kulay (berde). Sa mga bihirang okasyon ang daluyan ay maaaring maging acidic dahil sa pagbuburo ng dextrose; nang walang paggamit ng mga peptones at tagapagpahiwatig ng pH ay ibabaling nito ang kulay ng daluyan patungo sa dilaw. Upang mangyari ito, ang pH ay dapat bumaba sa 6.

Gayunpaman, kapag positibo ang pagsubok na ito, sinasabing ang microorganism ay gumagamit ng malonate at ammonium sulfate bilang mga mapagkukunan ng carbon at nitrogen ayon sa pagkakabanggit, nang hindi ginagamit ang iba pang mga sangkap.

Sa kasong ito, ang daluyan ay nagiging alkalina dahil sa pagpapalabas ng sodium at ang kahihinatnan na pagbuo ng NaOH. Sa kahulugan na ito, ang tagapagpahiwatig ng pH (bromothymol asul) ay lumiliko ang kulay ng daluyan mula berde hanggang asul kapag ang pH ay pantay o higit sa 7.6. Ang asul ay maaaring maging magaan o matindi (asul na Prussian).

Sa wakas, pinapanatili ng sodium chloride ang osmolarity ng daluyan at tubig ang diluent ng lahat ng mga sangkap.

Pagbibigay kahulugan

Parehong Kulay ng Broth (Green) - Negatibong Pagsubok

Dilaw na sabaw: negatibong pagsubok

Banayad o malalim na asul na sabaw: positibo ang pagsubok

Mayroong isang variant na tinatawag na phenylalanine malonate sabaw, na tinatawag ding Shaw at Clarke's medium. Sa kasong ito, maaaring masuri ang dalawang pagsusuri, ang paggamit ng malonate bilang isang mapagkukunan ng carbon at ang paggawa ng pyruvic acid mula sa phenylalanine.

Paghahanda

Malot na sabaw

Ang bilang ng gramo na tinukoy ng insert ng napiling komersyal na kumpanya ay timbang (maaaring mag-iba mula sa isa't isa). Ang weighed gramo ay sinuspinde sa isang litro ng distilled water. Init nang kaunti hanggang sa ganap na matunaw. Ipamahagi ang 3 ml ng daluyan sa 13/100 mga tubo ng pagsubok na may mga takip ng koton.

Sterilize sa autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 hanggang 20 minuto.

Palamig bago gamitin. Kung hindi sila gagamitin kaagad, mag-imbak sa ref hanggang magamit. Dalhin ang mga sabaw sa temperatura ng silid bago mag-inoculate.

Ang pH ng daluyan ay dapat na 6.7 ± 0.2. Ang kulay ng handa na daluyan ay berde na bote.

Phenylalanine Malonate Broth

Tumimbang ng 11 g ng dehydrated medium at matunaw sa 1 litro ng distilled water. Ang natitirang bahagi ng paghahanda ay katulad ng naunang inilarawan.

Maaari rin itong ihanda sa pamamagitan ng pagdaragdag ng 2 g / L ng phenylalanine sa medium ng malonate sabaw bago ito isterilisado.

Gumamit

Ginagamit ito bilang bahagi ng baterya ng mga pagsubok na biochemical na tipunin para sa pagkilala ng mga bakterya ng pamilya Enterobacteriaceae.

Tumutulong sa pagkakaiba sa pagitan ng:

-Ang genus na Klebsiella at Enterobacter (+) ng genus na Escherichia at Serratia (-).

-Ang mga species ng Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame at Salmonella enterica ssp diarizonae (+), ng mga species Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Mula sa genus Klebsiella sa pangkalahatan (+) mula sa genus Actinobacillus (-).

-Matutulong na makakatulong ito sa pagkita ng kaibahan ng genera at species ng bakterya na hindi kabilang sa pamilya ng Enterobacteriaceae, tulad ng kabilang sa di-pagbuburo ng Gram negatibong bacilli na Alcaligenes faecalis (+) at Acinetobacter sp (-).

Pinagmulan: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.

Proseso

Sa ilalim ng isang mas magaan, ang isang bahagi ng isang purong cologne ay nakuha, gamit ang isang maayos na isterilisado at pinalamig na hawakan ng platinum. Ang halimbawang kinuha (light inoculum) ay natunaw sa malonate sabaw. Sumama sa takip na maluwag sa aerobiosis sa 35 ° C ± 0.2 sa loob ng 24 hanggang 48 na oras.

Ang malonate na sabaw ay maaari ring mai-inoculated mula sa isang kultura ng 18-24 na oras sa trypticase toyo. Sa kasong ito, ang 0.01 ml ay kinuha gamit ang isang sterile pipette at ang malonate na sabaw ay inoculated. Sumama sa takip na maluwag sa aerobiosis sa 35 ° C ± 0.2 sa loob ng 24 hanggang 48 na oras.

Sa pagtatapos ng oras, ang mga resulta ay binibigyang kahulugan. Ang anumang bakas ng asul na kulay pagkatapos ng 48 na oras ng pagpapapisa ng itlog ay dapat isaalang-alang na positibo. Ang pagsusulit ay hindi dapat bigyang kahulugan bilang negatibo hanggang sa lumipas ang oras na 48 oras ng pagpapapisa ng itlog.

Sa kaso ng paggamit ng phenylalanine malonate sabaw na variant, ang malonate ay unang binibigyang kahulugan at pagkatapos ay 5 patak ng 1N HCl at 3-5 patak ng 8% ferric chloride ay idinagdag. Ang isang madilim na berdeng kulay ay binibigyang kahulugan bilang isang positibong pagsubok para sa phenylalanine. Kung, sa kabilang banda, ang medium ay nagiging asul na asul, ang pagsubok ay negatibo para sa phenylalanine.

QA

Upang maisagawa ang sterility control ng daluyan, ang isa o dalawang sabaw ay dapat na mapalubha sa 35 ° C ± 0.2 para sa 24 na oras ng pagpapapisa ng itlog. Matapos ang oras na ito ay dapat na walang ulap o pagbabago ng kulay.

Para sa kalidad ng kontrol, ang kilala o sertipikadong mga galaw ay maaaring gamitin, tulad ng: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 at Escherichia coli ATCC 25922.

Ang inaasahang resulta ay:

• Ang Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae at Salmonella enterica ssp arizonae ay nagbibigay ng isang positibong reaksyon (daluyan na kulay asul).
• Para sa Escherichia coli, ang resulta ay dapat negatibo, iyon ay, inaasahan na walang magiging pagbabago ng kulay (berde) o na ito ay magiging dilaw dahil sa pagbuburo ng glucose.

Mga Limitasyon

Huwag gumamit ng sabaw na nagpapakita ng kaguluhan, namumula, pagbabago ng kulay o anumang tanda ng pagkasira.

Mga Sanggunian

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Microbiological na paghihiwalay ng Salmonella spp. at mga molekular na tool para sa pagtuklas nito. Kalusugan ng Uninorte. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Magagamit sa: scielo.org.co
2. BBL. Malonate Broth, nabago ang Ewing. 2007. Magagamit sa: bd.com
3. Mga Laboratoryo ng Senna. Malonato sabaw. Magagamit sa: cientificasenna.com
4. RenyLab. Malonato sabaw. 2013.Magagamit sa: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog Diagnostics. Malonato sabaw. Magagamit sa: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
7. Mga Laboratories ng Conda. Phenylalanine malonate sabaw. Magagamit sa: condalab.com