LACTOSED SABAW: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2025

Ang sabaw ng lactose ay isang paraan ng hindi pumipili na daluyong kultura na ginagamit na pangunahin bilang isang pre-enrichment sa paghihiwalay ng mga salmonella na mga galon mula sa pagsusuri ng microbiological hanggang sa mga naproseso na pagkain, mga produkto ng pagawaan ng gatas o tubig. Inirerekomenda ito ng International Commission on Microbiological Specification for Foods (ICMPF).

Ang medium ay naglalaman ng enzymatic digest ng gelatin, extract ng karne at lactose, mga sangkap na kinakailangan para sa paglaki ng bakterya. Bukod dito, ang lactose ay isang fermentable na karbohidrat, samakatuwid ang ilang mga coliform ay may kakayahang masira ito sa paggawa ng gas.

Mga lactated na sabaw na may turbidity. Pinagmulan: Larawan na kinunan ng may-akda na si MSc. Marielsa gil

Sa kadahilanang ito, ang sabaw ng lactose ay inirerekomenda ng American Public Health Association (APHA) para sa presumptive na pag-aaral ng kabuuan at fecal coliform bacteria, na kwalipikado bilang isang mahusay na kahalili upang palitan ang sabaw ng tryptose lauryl sulfate sa karaniwang pamamaraan ng Pinaka-Probable Number (MPN). ), na ginamit para sa pagsusuri ng microbiological ng pagkain, gatas at tubig sa ibabaw, sa ilalim ng lupa, libangan, domestic at pang-industriya na mga sample ng basura.

Batayan

Para sa pagsusuri ng microbiological ng ilang mga halimbawa, ang hakbang ng pre-enrichment ay mahalaga upang mabawi ang isang tiyak na microorganism na maaaring nasa napakababang dami o sa hindi kanais-nais na mga kondisyon na lumalabag o mabawasan ang kakayahang umangkop.

Ganito ang kaso ng mga pinatuyong at naproseso na mga pagkain, na posibleng kontaminado sa Salmonellas sp. Sa mga kasong ito, kung naroroon ang bakterya, nakaranas sila ng pang-aabuso sa pisikal at kemikal sa proseso ng paggawa ng produkto.

Sa isang paraan na ang mga microorganism ay nakalantad sa mga salungat na salik tulad ng pag-aalis ng tubig, pagkakalantad sa mga produkto ng inhibitory o nakakalason, at ang overlap na nabuo ng pagkakaroon ng iba pang mga bakterya sa mas maraming dami, bukod sa iba pa.

Sa kahulugan na ito, ang sabaw ng lactose ay may epekto sa pag-aayos sa mga nasira na istruktura ng microorganism, na nagiging sanhi ito upang mabawi at magparami, sa paraang ito ay maaaring napansin.

Gayundin, ang sabaw ng lactose ay may kakayahang tunawin ang mga sangkap na nagbabalat na maaaring makaapekto sa pagiging epektibo nito, na pinapayagan ang pag-unlad nito. Bilang karagdagan, ang nutritional komposisyon ng sabaw ng lactose ay madiskarteng upang pabor ang paglaki ng Salmonella sp sa iba pang mga microorganism.

Para sa pangwakas na pagkakakilanlan, dapat itong i-subcultured sa iba pang tiyak na media media.

Sa kabilang banda, ang komposisyon ng daluyan ay ginagawang posible upang makita ang lactose fermenting microorganism na gumagawa ng gas.

Paghahanda

Upang maghanda ng isang litro ng lactose sabaw, 13 gramo ng dehydrated medium ay dapat timbangin at matunaw sa 1000 ml ng distilled water.

Upang makatulong na matunaw ang daluyan sa tubig, ang solusyon ay maaaring pinainit ng kaunti, ngunit hindi masyadong marami.

Kapag homogenous, ang solusyon ay inihanda tulad ng mga sumusunod: kung ang sabaw ay gagamitin upang maghanap para sa mga coliforms, ang isang rack ng mga test tubes ay inihanda, kung saan ang isang tubong pagbuburo ng Durham ay ipinasok baligtad.

Ang tubo ng Durham ay isang napakahalagang detalye, sapagkat pinapayagan nito ang pagtuklas ng pagbuo ng gas, isang data na may malaking halaga sa paghahanap para sa mga coliform.

Kapag handa na ang mga tubo, ang 10 ml ng sabaw ng lactose ay naibigay sa kanila, isang halaga na dapat sapat upang masakop ang buong tubo ng Durham.

Kung ang sabaw ng lactose ay gagamitin bilang isang sabaw na pre-enrichment, hindi kinakailangan upang maglagay ng isang tubo na pagbuburo ng Durham. Sa kasong ito, kinakailangan ang isang mas malaking dami ng daluyan (225 ml), na ihahain sa 500 ML bote, malawak na bibig at may isang takip na takip ng thermo.

Kasunod nito, ang mga tubo o flasks ay na-autoclaved sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto.

Ang daluyan ay dapat manatili sa isang pangwakas na pH na 6.9 ± 0.2 sa 25 ° C.

Ang mga sabaw ay itinatago sa refrigerator hanggang sa gamitin.

Bago gamitin, ang mga sabaw ay dapat dalhin sa temperatura ng silid.

Sa kabilang banda, ang sabaw ng lactose ay maaari ding ihanda sa dobleng konsentrasyon.

Ang ilang mga laboratoryo ay nagdaragdag ng bromocresol na lilang sa sabaw ng lactose bilang isang tagapagpahiwatig ng pH, upang ipakita ang mga tubo kung saan nagkaroon ng lactose fermentation dahil sa pagbabago ng kulay. Sa kasong ito, ang sabaw ay tumatagal ng isang lilang kulay at kung may pagbuburo ay nagiging dilaw na ito.

Aplikasyon

Sa mga laboratoryo ng microbiology, ang sabaw ng lactose ay malawakang ginagamit dahil ito ay medyo murang daluyan na nag-aalok ng maaasahan at mabilis na mga resulta (24-48 na oras).

Maaari itong magamit para sa pagsusuri ng kabuuang at fecal coliforms sa pagkain at tubig o bilang isang sabaw na pre-enrichment para sa Salmonella.

Pre-enrichment

Ang pre-enrichment ay isang hakbang bago ang sample na nagpayaman, na lubos na nagpapabuti sa pagbawi ng bakterya ng genus Salmonella sa mga naproseso na pagkain.

Upang gawin ito, ang solidong sample ng pagkain (25 gramo) o likido (25 ml) ay inihasik sa 225 ml ng lactose sabaw, pagpapapisa ng 24 hanggang 48 oras. Kasunod nito, ito ay sub-kultura sa isang enriched medium tulad ng selenite cystine sabaw o tetrathionate sabaw. Pagkatapos ay lumipat sa XLD at SS selective media.

Kabuuan at pagsusuri ng fecal coliform

Ito ay isang mahusay na daluyan bilang isang tagapagpahiwatig ng fecal contamination.

Para sa kadahilanang ito, ang sabaw ng lactose ay mainam para sa pangunahin na yugto ng pag-aaral ng coliform sa pamamagitan ng Pinaka-Pwedeng Marahil na paraan ng Numero.

Para sa mga halimbawa kung saan ang isang malaking dami ng mga coliform ay pinaghihinalaang, ang isang mas maliit na dami nito ay mai-inoculated (1ml), habang para sa mga halimbawa kung saan ang isang mas maliit na dami ng mga coliform ay pinaghihinalaang, ang isang mas malaking dami ng mga sample (10 ml) ay mai-inoculated.

Para sa pagsusuri, 10 ^-1 , 10 ^-2 , 10 ^{-3 na mga} lasaw ang ginawa , na bumubuo ng isang baterya na 3-5 tubes para sa bawat konsentrasyon na ginamit.

Mula sa bawat pagbabanto, ang parehong dami ay nahasik sa mga lactose na sabaw.

Ang mga tubo ay natutuyo sa loob ng 24 na oras. Ang mga negatibong sabaw ay natutuyo para sa karagdagang 24 na oras.

Ang interpretasyon ng mga resulta ay ginawa sa pamamagitan ng pag-obserba ng dalawang katangian: ang una ay ang pagkakaroon o kawalan ng kaguluhan at dahil ang daluyan na ito ay hindi naglalaman ng isang tagapagpahiwatig ng pH, walang magiging pagbabago ng kulay.

Ang pangalawa ay ang paggawa o hindi ng gas. Ang gas ay madaling napatunayan sa Durham tube sa pamamagitan ng hitsura ng isa o higit pang mga bula ng hangin sa loob nito.

Ito ay itinuturing na positibo kung ang parehong mga katangian ay sinusunod, iyon ay, kaguluhan sa paggawa ng gas. Ang mga positibong tubo ay dapat na muling ma-seeded sa confirmatory media (2% Brilliant Green Bile sabaw at EC sabaw).

Marka ng kontrol ng daluyan

- Kapag inihahanda ang daluyan, mahalaga na huwag kalimutang ilagay ang mga tubong Durhams kung ang layunin ng parehong ay pag-aralan ang mga coliform.

- Huwag painitin ang daluyan bago isterilisado.

- Ipamahagi sa mga tubo ng pagsubok bago isterilisado, hindi kailanman pagkatapos.

- Huwag gamitin kung ang daluyan ay higit sa 3 buwan.

- Huwag gumamit kung naobserbahan mo ang anumang pagbabago sa karaniwang mga katangian ng daluyan.

- Kapag naghahanda ng isang batch ng lactose sabaw, subukan ang kalidad nito sa pamamagitan ng paghahasik ng mga kilalang pilay tulad ng Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii, at Klebsiella pneumoniae. Lumaki sila nang maayos, na may produksyon ng gas (positibong kontrol).

- Maaari rin itong isama ang Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, na lumago nang maayos, ngunit walang produksyon ng gas (Negative Control).

- Dapat pansinin na ang orihinal na kulay ng dehydrated medium ay beige at ang inihanda na daluyan ay napaka magaan at transparent dilaw. Kung ang isang pagbabago sa kulay o hitsura ay sinusunod, maaaring lumala.

Mga Sanggunian

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biology at microbiology. (2013) 1st edition. Unibersidad ng Cartagenas, Colombia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B at Velázquez O. (2009). Mga pamamaraan para sa Microbiological Pagsusuri ng Mga Pagkain. 2nd ed. Faculty ng Chemistry, UNAM. Mexico.
3. Mga Laboratories ng Conda. 2017. Lactose na doble na konsentrasyon (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Paghahambing ng mga pamamaraan para sa pagkuha ng mga coliform bacteria mula sa sediment ng Lake Xochimilco, Mexico. Nagtatalo si Rev. microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. Magagamit sa: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Pagpapasya ng kalidad ng mikrobiolohikal na tubig ng artesian sa mga distrito ng mga kagawaran ng Central, Cordillera at Punong Bayan. Pag-imbestiga ng Inst. Science. Kalusugan 2013; 11 (1): 5-14. Magagamit mula sa: scielo.iics.