Si Rose Bengal ay isang pagsubok sa laboratoryo batay sa isang reaksyon ng antigen-antibody para sa diagnosis ng brucellosis. Pinapayagan ng pamamaraan ang pagtuklas ng mga tukoy na antibodies laban sa Brucella abortus bacterium sa mga sample ng serum ng tao. Ang resulta ay maaaring maiulat nang husay o semi-dami.
Ang form na husay ay nagpapahiwatig kung ang pasyente ay positibo o negatibo para sa pagsubok, iyon ay, mayroon man o hindi mayroong mga antibodies. Samantala, ang ulat na semi-quantitative ay iniulat sa IU / ml at nagpapahiwatig ng tinatayang halaga ng mga antibodies na naroroon. Dapat pansinin na ang mga antibodies ay gagawin lamang kung ang pasyente ay nakikipag-ugnay sa microorganism.
Reaksyon ni Rose Bengal sa isang plate na pinagsama-sama. Pinagmulan: kinuha mula sa video na https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
Dahil sa mahusay na pagiging simple, mataas na sensitivity at pagtutukoy, ito ay isa sa mga pamamaraan ng seroagglutination na kadalasang ginagamit sa gamot bilang isang paunang pagsusuri para sa diagnosis ng sakit na ito.
Inihambing ng ilang mga mananaliksik ang pagiging epektibo ng pagsubok ng Rose Bengal sa iba pang mga pamamaraan, tulad ng seroagglutination (febrile antigens) at napagmasdan na bagaman mayroong mahusay na ugnayan, nakita nila ang mga nakahiwalay na kaso kung saan ang febrile antigen test ay negatibo at Rose de Positibo ang apoy.
Ang pagkakaiba na nakuha ay dahil sa ang katunayan na ang mga pasyente na ito ay may isang subclass ng IgG antibodies laban sa Brucella abortus na may mas mahusay na nakakagapos na kapasidad sa acidic pH, samakatuwid maaari silang gumanti sa reaksyon ng Rose Bengal ngunit hindi sa mga febrile antigens.
Sa kahulugan na ito, iminungkahi nila na ang mga reagents ng febrile technique na pamamaraan ay mabago sa isang acid na pH upang maaari nilang makita ang ganitong uri ng kaso.
Batayan
Ang Rose Bengal Reagent ay binubuo ng isang suspensyon ng antigenic. Binubuo ito ng S99 pilay ng Brucella abortus, diluted sa isang acidic lactate buffer (pH 3.6), kasama ang phenol at ang Rose Bengal dye.
Samakatuwid, sa halimbawang kung ano ang hinahangad ay mga anti-Brucella antibodies, kung naroroon ang mga ito ay tutugon sila sa reagent antigen at isang macroscopically na nakikita na pinagsama-samang reaksyon ay makikita. Ang pagsubok ay nakakita ng alinman sa IgM antibodies o IgG antibodies.
Nangangahulugan ito na maaari mong tuklasin ang sakit kapwa sa talamak na yugto kung saan nanaig ang mga antibodies ng IgM o sa talamak nitong yugto kung saan namamayani ang IgG antibodies.
Ito ay kumakatawan sa isang kalamangan dahil pinatataas nito ang pagiging sensitibo ng pagsubok, ngunit sa parehong oras na ito ay isang kawalan dahil hindi ito diskriminasyon sa pagitan ng isang yugto at iba pa, dahil ang reaksyon sa mga antibodies ng IgM at IgG.
Ang pagsubok ay dapat palaging isinasagawa kasama ang isang negatibong kontrol at isang positibong kontrol. Ang negatibong kontrol ay naglalaman ng serum ng hayop na walang mga antibodies at ang positibong kontrol ay naglalaman ng suwero ng pinagmulan ng hayop na may 50 IU / ml ng mga anti-Brucella antibodies.
Gumamit
Ang brucellosis ay isang malubhang sakit na may posibilidad na maging talamak at mapanganib, kaya napakahalaga na ma-diagnose nang maaga. Ito ay isang zoonosis at ang mga tao ay maaaring mahawahan sa pamamagitan ng direktang pakikipag-ugnay sa kontaminadong materyal, ang pinaka-mahina na tao na mga beterinaryo at tagapag-alaga ng hayop.
Ang impeksyon ay maaari ring maganap sa pamamagitan ng pagkain ng mga nahawaang hilaw na karne, bukod sa iba pang mga anyo ng impeksyon.
Ang sakit na ito ay umaatake sa lokal o sistematikong. Ang sistematikong form ay ang pinaka-seryoso, dahil ang iba't ibang mga organo ay maaaring maapektuhan, kabilang ang reticulum endothelial system (atay, pali, buto ng utak), balat (cellulitis at lymphadenopathy), sistema ng paghinga (pneumonia), musculoskeletal system (arthritis. sacroiliitis at spondylitis), bukod sa iba pa.
Ang Rose Bengal test ay isang napaka-kapaki-pakinabang na pamamaraan upang maisagawa ang isang paunang screening, dahil napaka murang, madaling gamitin, at may mahusay na pagtutukoy at pagiging sensitibo.
Ang mga kaso ng maling negatibo at maling positibo ay napakabihirang, at maaaring mangyari sa mga taong may napakababang titulo ng antibody (<25 IU / ml) o napakataas (> 1000 IU / ml) ayon sa pagkakabanggit.
Proseso
materyales
-Rose ang Bengal Kit
-Ang paglipat plate puting background
-50 µl pipette
-Rotator (opsyonal)
-Vortex
Teknik (pamamaraan ng husay)
Ang mga komersyal na Rose Bengal kit ay may mga handa na magamit na reagents.
-Tiyakin ang reagents bago simulang magtrabaho.
-Ang mga plate na pinagsama ay may mga bilog na bilog, bawat isa para sa isang iba't ibang mga sample. Gumamit ng 3 bilog, una para sa negatibong kontrol, pangalawa para sa sample, at pangatlo para sa positibong kontrol.
-Place isang drop o 50 ofl ng mga kontrol at sample sa kanilang kaukulang bilog.
-Gawin ang reaksyon ng Rose Bengal gamit ang isang vortex. Maglagay ng isang drop sa tabi ng mga dati nang inilagay.
-Mix gamit ang mga kahoy na toothpick (gumamit ng isa para sa bawat ispesimen o kontrol). Gumawa ng mga pabilog na galaw at kumalat upang sakupin mo ang buong bilog.
Pinagmulan: mga larawan na kinuha mula sa Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Nai-edit na layout ng imahe.
-Place ang plate sa isang awtomatikong rotator sa 80 hanggang 100 RPM o manu-manong iikot nang 4 minuto. Basahin ang patunay sa pagtatapos ng oras na ito.
-Tukuyin na ang mga kontrol na ibinigay ayon sa inaasahan. Ihambing ang reaksyon ng sample sample sa mga control. Mag-ulat bilang positibo kung ang pagsasama ay sinusunod at negatibo kung walang pinagsama-samang.
Ang isang positibong pagsubok ay nagpapahiwatig na ang pasyente ay may isang halaga na katumbas o higit sa 25 IU / ml ng mga anti-Brucella antibodies.
Ang pagpapakahulugan ng isang positibong (na may pag-iipon) at negatibong (walang pinagsama-samang) reaksyon. Pinagmulan: Citrulline. Na-edit na imahe.
Teknik (semi-dami)
Kung sa reaksyon ng kwalitibo ang sample ay malakas na positibo, maaari itong semi-quantified. Para sa mga ito, ang mga serial doble na panlabas ng sample ay ginawa gamit ang solusyon sa physiological saline. Ang pamamaraan na dati nang inilarawan ay isinasagawa sa bawat pagbabanto.
Ito ay binibigyang kahulugan din sa pamamagitan ng pag-obserba ng pinagsama-samang macroscopically. Ang resulta ay ang pamagat ng pinakamataas na pagbabanto kung saan ang isang positibong resulta ay sinusunod.
Upang makalkula ang tinatayang halaga ng mga anti-Brucella antibodies, ginagamit ang mga sumusunod na pormula:
25 IU / ml x reaksyon ng titer = IU / ml
Halimbawa, kung ang isang pasyente sa semi-quantitative test test ay positibo sa ½, ¼ at 1/8 pagbabanto at nagsisimula na negatibo mula sa 1/16 pagbabanto pasulong, nangangahulugan ito na ang pasyente ay may isang titer ng 8 .
Paglalapat ng pormula:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
-Ang mga kit ay may isang petsa ng pag-expire at dapat itong iginagalang. Hindi dapat gamitin kung nag-expire ang reagent.
-During paggamit, siguraduhin na ang reagent ay hindi naglalaman ng solidong mga partikulo, dahil ito ay isang palatandaan ng pagkasira.
-Keep sa pagitan ng 2 at 8 ° C
-Hindi mag-freeze, ang pagkilos na ito ay puminsala sa reagent na walang katuturan.
-Sinagawa ang mga pagsubok kasama ang negatibo at positibong kontrol.
-Ang pamamaraan ay tinatanggap ang mga sample ng suwero na may isang tiyak na antas ng lipemia at hemolysis, gayunpaman hindi inirerekomenda na gumamit ng labis na lipemya at hemolyzed sera, ang parehong mga kondisyon ay nagbabago sa mga resulta ng pagsubok.
-Magdadala ang mga daan ng reagents sa temperatura ng silid bago simulan ang pagsusuri.
-Huwag bigyan ng kahulugan ang mga reaksyon na mas matagal kaysa sa inirekumendang oras, dahil ito ay bumubuo ng ulat ng mga maling positibo, dahil pagkatapos ng isang tiyak na oras ang reagent na pag-urong, gayahin ang isang positibong reaksyon.
-Ang pamamaraan ay 100% sensitibo at may isang pagtutukoy ng 98%.
-After pagkatapos ng isang semi-quantification ng 1000 IU / ml mayroong posibilidad na obserbahan ang isang prozone effect (maling negatibo dahil sa labis na antibody kumpara sa dami ng mga antigens).
Mga Sanggunian
- Si Rubio M, Barrio B at Díaz R. Halaga ng Rosa de Bengala, Coombs at mga kontra-immunoelectrophoresis na pagsusuri upang masuri ang mga kaso ng brucellosis ng tao kung saan negatibo ang pagsasama-sama. Kagawaran ng Mikrobiolohiya. Serbisyo ng Klinikal na Mikrobiology. University Clinic. Unibersidad ng Navarra. 406-407. Magagamit na sa: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Brucellosis." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. 6 Dis 2019, 14:37 UTC. 18 Dis 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
- Mga Laboratoryo ng Monlab. Monlab Bengal Rose - pagsubok. 2016.Maaari sa: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Rev. Peru. Med. Exp. Public Health 1997; 14 (1): 63-66. Magagamit sa: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Klinikal, serological at polymerase chain reaction follow-up ng isang pamilya na may brucellosis. Rev. bata. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Magagamit sa: scielo.conicyt.