MEDIO NG: PANGANGATWIRAN, PAGHAHANDA, PAGGAMIT AT MGA LIMITASYON - BIOLOGY - 2025

Ang OF o glucose fermentation medium ay isang semi-solid agar na espesyal na idinisenyo para sa pag-aaral ng oxidative at fermentative metabolism ng mga karbohidrat sa isang mahalagang pangkat ng mga microorganism bukod sa Enterobacteriaceae, na tinatawag na non-enteric Gram negatibong bacilli.

Ito ay nilikha nina Hugh at Leifson; natanto ng mga mananaliksik na ito na ang maginoo na paraan ng pag-aaral ng paggawa ng acid mula sa mga karbohidrat ay hindi angkop para sa tiyak na pangkat ng mga bakterya.

A. Komersyal na basal NG daluyan. B. Mga tubong may OF medium na binhi. Pinagmulan: A at B Mga Larawan na kinunan ng may-akda na MSc. Marielsa Gil.

Ito ay dahil ang mga di-enteric na Gram na negatibong rods sa pangkalahatan ay gumagawa ng mababang halaga ng mga asido, hindi tulad ng Enterobacteriaceae.

Sa kahulugan na ito, ang mid medium ay may mga espesyal na katangian na maaaring makita ang maliit na halaga ng acid na nabuo, kapwa sa pamamagitan ng mga ruta ng oxidative at fermentative. Ang mga pagkakaiba-iba na ito ay nauugnay sa dami ng mga peptones, karbohidrat at agar.

Ang daluyan na ito ay naglalaman ng mas kaunting mga peptones at isang mas mataas na konsentrasyon ng mga karbohidrat, sa gayon binabawasan ang mga produkto na nag-alkalize ng daluyan bilang isang resulta ng metabolismo ng protina at pagtaas ng paggawa ng mga acid dahil sa paggamit ng mga karbohidrat.

Sa kabilang banda, ang pagbaba ng halaga ng agar ay pinapaboran ang pagpapalaganap ng acid na ginawa sa buong daluyan, bilang karagdagan sa pagpapahintulot sa amin na obserbahan ang motility.

Ang medium ay binubuo ng peptone, sodium chloride, bromothymol asul, dipot potassium phosphate, agar, at isang karbohidrat. Ang pinaka-karaniwang karbohidrat ay glucose ngunit ang iba ay maaaring magamit alinsunod sa kung saan nais ng isa na pag-aralan, tulad ng lactose, maltose, xylose, bukod sa iba pa.

Batayan

Tulad ng anumang daluyan ng kultura, ang OF medium ay dapat maglaman ng mga sangkap na nakapagpapalusog na ginagarantiyahan ang paglaki ng bakterya; ang mga sangkap na ito ay mga peptones.

Para sa bahagi nito, ang karbohidrat ay nagbibigay ng enerhiya at sa parehong oras ay nagsisilbi upang pag-aralan ang pag-uugali ng microorganism laban dito, iyon ay, pinapayagan nito ang mga bakterya na maiuri bilang isang oksihensiya, pagbuburo o non-saccharolytic organismo.

Ang daluyan ay naglalaman ng isang 1: 5 peptone / karbohidrat ratio kumpara sa 2: 1 maginoo media. Tinitiyak nito na ang dami ng mga amino ng alkalina na nabuo mula sa pagkasira ng mga peptones ay hindi neutralisahin ang pagbuo ng mga mahina na acid.

Sa kabilang banda, ang daluyan ay naglalaman ng sodium chloride at dipot potassium phosphate. Ang mga compound na ito osmotically nagpapatatag ng daluyan at umayos ayon sa pH ayon sa pagkakabanggit. Ang bromothymol asul ay ang tagapagpahiwatig ng pH, na lumiliko ang kulay ng daluyan mula berde hanggang dilaw na may produksiyon ng acid.

Ang ilang mga microorganism ay maaaring gumamit ng mga karbohidrat sa pamamagitan ng mga ruta ng oxidative o pagbuburo, habang ang iba ay hindi nakakakuha ng alinman sa ruta.

Ito ay nakasalalay sa mga katangian ng bawat microorganism. Halimbawa, ang ilang mga mahigpit na aerobic microorganism ay maaaring mag-oxidize ng ilang mga karbohidrat, at ang mga anaerob ng facultative ay maaaring mag-oxidize at mag-ferment depende sa kapaligiran sa paligid nila, habang ang iba ay hindi nag-oxidize o nagpapataba ng mga karbohidrat (asacarolytic).

Sa wakas, mayroong isang pagbabago ng mid medium na inirerekomenda ng CDC na naglalaman ng isang espesyal na batayang OF na may pula na phenol bilang isang tagapagpahiwatig.

Proseso ng oksihenasyon

Ang proseso ng oksihenasyon ng glucose ay hindi nangangailangan ng phosphorylation ng glucose, tulad ng proseso ng pagbuburo. Sa kasong ito ang pangkat ng aldehyde ay na-oxidized sa isang grupo ng carboxyl, na nagreresulta sa gluconic acid. Ito naman ay na-oxidized sa 2-ketogluconic.

Ang huli ay maaaring maipon o masira sa dalawang molekula ng pyruvic acid. Ang sistemang ito ay nangangailangan ng pagkakaroon ng oxygen o ilang inorganic compound bilang panghuling tumatanggap ng elektron.

Ang paggawa ng mga acid sa pamamagitan ng ruta na ito ay mas mahina kaysa sa nakuha sa ruta ng pagbuburo.

Proseso ng Fermentation

Para sa pagbuburo ng glucose na maganap sa pamamagitan ng alinman sa mga magagamit na ruta, dapat muna itong phosphorylated, nagiging glucose-6-phosphate.

Ang pagbuburo ng glucose ay maaaring tumagal ng maraming mga ruta, ang pangunahing isa ay ang ruta ng Embden-Meyerhof-Parnas, ngunit maaari rin nilang kunin ang ruta ng Entner-Doudoroff, o ruta ng Warburg-Dickens ng hexose monophosphate, na kilala rin bilang ng pagkasira ng mga pentoses.

Ang ruta na pinili ay nakasalalay sa sistema ng enzymatic na nagtataglay ng microorganism.

Via Embden-Meyerhof- Parnas

Sa pagbuburo ng glucose sa pamamagitan ng landas ng Embden-Meyerhof-Parnas, nahahati ito sa dalawang mga molekulang molekula, sa kalaunan ay mapababa sa iba't ibang mga compound ng carbon, hanggang sa pagbuo ng glyceraldehyde-3-phosphate. Mula doon nagmula ang isang intermediate na sangkap, na kung saan ay pyruvic acid.

Mula doon ay magkakaroon ng iba't ibang uri ng halo-halong mga acid na maaaring mag-iba mula sa isang species hanggang sa isa pa.

Ang sistemang ito ay nangyayari sa kawalan ng oxygen at nangangailangan ng isang organikong compound bilang panghuling tumatanggap ng elektron.

Entway-Doudoroff na landas

Sa pagbuburo ng glucose sa pamamagitan ng daanan ng Entner-Doudoroff, ang glucose na 6-phosphate ay nagiging glucono-ᵼ-lactone-6-phosphate at mula doon ay na-oxidized hanggang 6-phosphogluconate at 2-keto-3-deoxy-6- phosphogluconate, upang sa wakas ay bumubuo ng pyruvic acid. Ang daang ito ay nangangailangan ng oxygen para mangyari ang glikolisis.

Pentoses ng marawal na daanan ng Warburg-Dickens Hexoxa monophosphate path

Ang ruta na ito ay isang hybrid ng 2 sa itaas. Nagsisimula ito katulad ng sa Entner-Doudoroff na landas, ngunit sa kalaunan glyceraldehyde-3-phosphate ay nabuo bilang isang hudyat ng pyruvic acid, tulad ng nangyayari sa daang Embden-Meyerhof-Parnas.

Paghahanda

Timbangin:

2 g ng peptone

5 g ng sodium klorido

10 g ng D-glucose (o ang karbohidrat upang maging handa)

0.03 g ng asul na bromothymol

3 gr ng agar

0.30 g ng dipot potassium phosphate

1 litro ng distilled water.

Paghaluin ang lahat ng mga compound maliban ang karbohidrat at matunaw sa 1 litro ng distilled water. Init at iling hanggang sa ganap na matunaw.

Sa paglamig sa 50 ° C, 100 ml ng 10% glucose (na-filter) ay idinagdag.

Ipinamamahagi ng Aseptically ang 5 ML ng medium sa mga tubo ng pagsubok na naka-naka-cotton at autoclave sa 121 ° C, 15 pounds pressure sa loob ng 15 minuto.

Payagan na palakasin ang isang patayong posisyon.

Ang pH ng daluyan ay dapat na 7.1. Ang kulay ng handa na daluyan ay berde.

Mag-imbak sa isang refrigerator.

Aplikasyon

Ang medium ng mid ay isang espesyal na daluyan para sa pagtukoy ng metabolic na pag-uugali ng isang microorganism laban sa isang karbohidrat. Lalo na para sa mga form na kaunti, mahina o walang mga acid.

Sown

Para sa bawat microorganism, 2 OF tubes ang kinakailangan, kapwa dapat inoculated sa microorganism na pag-aralan. Ang kolonya ay nakuha gamit ang isang tuwid na hawakan at isang pagbutas ay ginawa sa gitna ng tubo nang hindi naabot ang ilalim; Maraming mga puncture ang maaaring gawin, hangga't walang interes sa pagmamasid ng motility.

Ang isang layer ng sterile liquid petrolatum o sterile tinunaw na paraffin (humigit-kumulang na 1 hanggang 2 ml) ay idinagdag sa isa sa mga tubo at may label na may letrang "F". Ang iba pang mga tubo ay naiwan sa orihinal at may label na "O". Ang parehong mga tubo ay natutuyo sa 35 ° C at sinusunod araw-araw hanggang sa 3 hanggang 4 na araw.

Pagbibigay kahulugan

Metabolismo at paggawa ng gas

Talahanayan: Pag-uuri ng mga microorganism ayon sa kanilang pag-uugali sa bukas (oksihenasyon) at sarado (pagbuburo) NG mga tubo

Pinagmulan: Ginawa ng may-akda na si MSc. Marielsa gil

Ang gas ay sinusunod sa pagbuo ng mga bula o pag-aalis ng agar.

Dapat pansinin na ang isang organismo na lamang ang nag-oxidize ng glucose ngunit hindi ito pinapasan, ay hindi mai-ferment ang iba pang mga karbohidrat, sa anumang kaso ay i-oxidize lamang ito. Samakatuwid, sa sitwasyong ito ang selyadong tubo para sa pag-aaral ng iba pang mga karbohidrat ay tinanggal.

Kakayahan

Bilang karagdagan, ang motility ay makikita sa medium ng OF.

Positive motility : paglago na hindi limitado sa lugar ng inoculation. Mayroong paglago patungo sa mga gilid ng tubo.

Negatibong motility : paglaki lamang sa paunang inoculum.

QA

Ang mga sumusunod na strain ay maaaring magamit bilang mga kontrol sa kalidad: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa at Moraxella sp. Ang inaasahang resulta ay:

1. coli: Glucose fermenter (parehong dilaw at sparkling tubes).
2. aeruginosa: Glucose oxidizer (bukas na dilaw na tubo at berde o asul na selyo).
3. Moraxella sp: Hindi saccharolytic (berde o asul na bukas na tubo, berdeng selyadong tubo).

Mga Limitasyon

-Ang ilang mga microorganism ay hindi maaaring lumaki sa medium. Sa mga kasong ito, ang pagsubok ay paulit-ulit ngunit 2% suwero o 0.1% na lebadura ng lebadura ay idinagdag sa daluyan.

-Ang mga reaksyon ng oxygen ay madalas na sinusunod lamang sa ibabaw at ang natitirang daluyan ay maaaring manatiling berde, sa parehong paraan ito ay kinuha bilang positibo.

Mga Sanggunian

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Mga pagsubok sa biochemical para sa pagkilala ng mga bakterya na kahalagahan ng klinikal. 3rd ed. Editoryal Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. NG Glucose Medium. Magagamit sa: http://f-soria.es
5. Mga Laboratories ng Conda. NG medium na glucose. Magagamit sa: condalab.com
6. Mga Laboratoryo ng BD. 2007. NG Basal Medium. Magagamit sa: bd.com