MEDIO MIO: PUNDASYON, PAGHAHANDA AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2026

Ang medium ng MIO ay isang pagsubok na biochemical na ginamit upang makatulong sa pagkilala sa mga species ng bakterya na kabilang sa pamilyang Enterobacteriaceae. Ito ay lubos na nakapagpapalusog at binubuo ng glucose, pampaalsa, peptone, triptein, L-ornithine hydrochloride, bromocresol purple, at agar.

Ang kahulugan ng acronym nito (MIO) ay naglalarawan sa bawat isa sa mga parameter na maaaring sundin sa daluyan na ito; pagkilos, indole at ornithine. Ang motility ay ang kakayahan ng microorganism na lumipat dahil sa pagkakaroon ng flagella. Upang ma-obserbahan ang pag-aari na ito, ang pagkakapareho ng daluyan ay dapat na semisolid, kaya ang paghahanda ay naglalaman ng mas kaunting agar.

Balangkas ng pagpapakahulugan ng mga resulta sa daluyan ng MIO. Pinagmulan: Inihanda ng may-akda na si MSc. Marielsa gil

Ang paggawa ng indole ay nagpapakita ng pagkakaroon ng enzyme tryptophanase na kumikilos sa amino acid tryptophan, na hinihiling ang paggamit ng isang nagbubunyag na reagent upang makita ang paggawa ng indole.

Sa wakas, tinutukoy ng ornithine kung ang bakterya ay magagawang decarboxylate ang amino acid, iyon ay, kung mayroon itong enzyme orinithine decarboxylase.

Batayan

Ang peptone, yeast extract at triptein

Ang mga elementong ito ay nag-aambag sa nutritional power ng daluyan na ito. Nagsilbi sila bilang isang mapagkukunan ng mga nutrisyon at mahahalagang amino acid para sa pag-unlad ng bakterya.

Bilang karagdagan, ang triptein ay isang mapagkukunan ng tryptophan upang ipakita ang pagkakaroon ng enzyme tryptophanase, na nagpapabagal sa tryptophan sa pamamagitan ng reductive deamination, naglalabas ng indole, pyruvic acid, ammonia at enerhiya.

Ang Indole ay walang kulay, samakatuwid ang pagkakaroon nito ay ipinahayag sa pamamagitan ng pagdaragdag ng limang patak ng reakent ng Ehrlich o Kovacs, kapwa may p-dimethylaminobenzaldehyde.

Ang pangkat ng aldehyde ng tambalang ito ay tumugon sa indole, na bumubuo ng isang hugis na singsing na fuchsia na pulang produkto sa ibabaw ng agar.

Ang anumang bakas ng kulay ay dapat isaalang-alang ng isang positibong pagsubok. Ang patunay ay dapat na basahin agad, tulad ng sa paglipas ng panahon ang kulay ay nagpapahina.

Bukod dito, ang pagsusulit na ito ay dapat na maihayag pagkatapos na maitala ang mga motility at decarboxylation na mga resulta ng ornithine.

Pagbibigay kahulugan

Positibong pagsubok: pagbuo ng isang fuchsia red singsing kapag nagdaragdag ng mga patak ng Kovacs reagent.

Negatibong pagsubok: walang pagbuo ng singsing.

Kakayahan

Ang kakayahan ng bakterya na lumipat ay makikita kung ang isang maulap na daluyan ay sinusunod o kung mayroong isang makapal na linya ng paglago na lumalawak sa paligid ng paunang inoculation.

Ang isang negatibong pagsubok sa motility ay mapatunayan sa pamamagitan ng pagmamasid sa isang manipis na linya ng paglago, at lahat ng nasa paligid nito ay walang paglaki.

Mahalaga na ang motility ay basahin bago ipahayag ang indole, dahil ang pagdaragdag ng mga ulap na ulap sa buong daluyan.

Sa mobile ngunit mabagal na lumalagong bakterya mahirap ipakita ang kanilang motility sa daluyan na ito. Sa kasong ito, inirerekomenda na gumamit ng iba pang mga pagsubok o pamamaraan, tulad ng medium motility o ang drop-pending na pamamaraan.

Glucose

Ang Glucose ay ang fermentable na karbohidrat na, bilang karagdagan sa pagbibigay ng enerhiya, nag-acidify sa kapaligiran, isang kinakailangang kondisyon para sa decarboxylation ng amino acid ornithine na mangyari.

Ang pagbuburo ng glucose ay dapat palaging magaganap, simula sa prinsipyo na ang lahat ng bakterya na kabilang sa glucose ng fermentment ng Enterobacteriaceae.

L-Ornithine

Kung ang bakterya ay gumagawa ng enzyme ornithine decarboxylase, maaari itong kumilos sa sandaling ang medium ay na-acidify sa pamamagitan ng pagbuburo ng glucose.

Ang enzyme ornithine decarboxylase ay kumikilos sa carboxyl group ng amino acid na gumagawa ng isang amine na tinatawag na putresine na alkalize ang daluyan.

Ang pagsubok na ito ay dapat basahin pagkatapos ng 24 na oras ng pagpapapisa ng itlog, dahil kung susubukan mong basahin bago ka makapag-misinterpret ng pagsubok na may maling negatibong.

Dapat itong alalahanin na ang unang reaksyon na nangyayari ay ang pagbuburo ng glucose, kaya ang medium ay lumiliko ang dilaw sa isang paunang yugto (unang 10 hanggang 12 oras). Kung ang ornithine decarboxylation kasunod na nangyayari, ang medium ay lilang lilang.

Mahalagang bigyang kahulugan ang ornithine decarboxylation test bago ibunyag ang indole, dahil ang pagdaragdag ng reagent ng Kovacs ay nagbabago ng kulay ng daluyan.

Pagbibigay kahulugan

Negatibong pagsubok: daluyan na may isang dilaw na kulay o may isang dilaw na background.

Positibong pagsubok: katamtamang ganap na lila.

Tagapagpahiwatig ng PH

Sa kasong ito, ginagamit ang bromocresol purple; ang isa na namamahala sa pagbubunyag kapag may pagbabago sa pH sa medium. Sa asido, ang tagapagpahiwatig ay nagiging dilaw, at sa pag-alkali, lumiliko ito.

Teknolohiya ng pagtatanim at pagbuo

Upang maghasik ng medium ng MIO, ang isang tuwid na loop o karayom ​​ay ginagamit at kasama nito ang isang bahagi ng kolonya na mapag-aralan ay nakolekta.

Ang isang malalim na pagbutas ay ginawa sa gitna ng MIO sa isang tuwid na linya. Hindi maipapayo na magsagawa ng dobleng pagbutas, dahil maaaring magbigay ito ng isang maling imahe ng motility kung ang mga pagbutas ay hindi isinasagawa sa parehong lugar.

Mag-incubate ng 24 hanggang 48 na oras sa 37 ° C sa aerobiosis. Tingnan ang mga resulta sa pagkakasunud-sunod na ito: motility, decarboxylation ng ornithine at sa wakas ibunyag ang indole.

Maipapayo na aseptically alisin ang 2 ml ng daluyan, ilipat ito sa isang sterile tube at gawin ang indole test doon, upang kung negatibo ito, ang natitirang bahagi ng orihinal na tubo ay maaaring mabulok para sa isang karagdagang 24 na oras, upang maibunyag muli ang indole.

Ang pag-unlad ng indole ay isinasagawa tulad ng sumusunod: 3 hanggang 5 patak ng reakent ng Kovacs ay idinagdag sa MIO medium at pinasigla nang masigla. Ito ay sinusunod kung lilitaw o hindi isang pulang singsing na pula.

Paghahanda

MIO medium

Tumimbang ng 31 g ng medium ng MIO at matunaw sa isang litro ng distilled water.

Init hanggang sa ihalo ang halo nang isang minuto, madalas na nanginginig hanggang sa ganap na matunaw ang agar. Ipamahagi ang 4 ml ng daluyan sa 13/100 mga tubo ng pagsubok na may mga takip ng koton.

Sterilize sa autoclave sa 121 ° C sa loob ng 15 minuto. Alisin mula sa autoclave at iwan upang tumayo nang diretso sa isang rack, sa paraang nabuo ang isang semi-solidong bloke.

Pagtabi sa isang ref 2-8 ° C. Hayaan itong magpainit bago ihasik ang bakterya na pilay.

Ang kulay ng dehydrated medium ay beige at ang kulay ng handa na daluyan na bahagyang opalescent purple.

Ang pangwakas na pH ng handa na daluyan ay 6.5 ± 0.2

Ang daluyan ay nagiging dilaw sa acidic pH at lilang sa alkalina na pH.

Kovacs Reagent (Indole Test Developer)

Ang reagent na ito ay inihanda tulad ng sumusunod:

Ang 150 ML ng amyl, isoamyl o butyl alkohol (alinman sa tatlo) ay sinusukat. Sa loob nito 10 g ng p-dimethylaminobenzaldehyde ay natunaw. Kasunod nito 50 ML ng puro hydrochloric acid ay dahan-dahang idinagdag.

Ang reagent na inihanda ay walang kulay o magaan na dilaw. Dapat itong itago sa bote ng amber at itago sa isang ref. Ang isang madilim na kulay ng kayumanggi ay nagpapakita ng pagkasira nito.

Gayundin ang Kovacs reagent ay maaaring mapalitan para sa reakent ng Ehrlich. Ang huli, na mas sensitibo, ay ginustong ibunyag ang indole sa mga bakterya na makagawa nito sa mga minuto na dami, tulad ng sa ilang mga di-pagbubuong mga negatibong rod at mga anaerobes.

Gumamit

Ang daluyan na ito ay isang pagsubok na pinupunan ang isang baterya ng mga pagsubok na biochemical para sa pagkilala sa mga bakterya na kabilang sa pamilya ng Enterobacteriaceae.

Ang data ng ornithine decarboxylation ay nagsisilbi upang makilala ang mga anak na lalaki ng Shigella, na sumusubok sa positibo, mula sa Shigella boydii, Shigella flexneri, at S. dysenterieae, na sumusubok ng negatibo.

Ito rin ay naiiba ang genus Klebsiella, na sumusubok ng negatibo, mula sa genus Enterobacter, kung saan ang karamihan sa mga species nito ay sumubok ng positibo.

Pinagmulan: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.

QA

Sa bawat oras na handa ang isang batch ng MIO medium, maaaring gawin ang isang control test. Para sa mga ito, kilala o sertipikadong mga galaw ay ginagamit upang obserbahan ang pag-uugali ng daluyan.

Ang mga pilay na maaaring magamit ay ang Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes at Proteus mirabilis.

Ang mga inaasahang resulta ay E. coli at M. morganii. Dan M: +, ako: + at O: +.

Ang Klebsiella pneumoniae ay lahat ng negatibo (M: -, I: -, O :-). Ang Proteus mirabilis at Enterobacter aerogenes ay nagbibigay sa M: + I: - at O: +.

Mga Sanggunian

1. Mac Faddin J. (2003). Mga pagsubok sa biochemical para sa pagkilala ng mga bakterya na kahalagahan ng klinikal. 3rd ed. Editoryal Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015.Available sa: britanialab.com
5. Mga Laboratoryo ng BD. Katamtaman ng BBL Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Magagamit sa: bd.com
6. Mga Valtek Laboratories. Katamtamang MIO Motility, Indole, Ornithine. 2010.Av magagamit sa: tekstoamedica.com