MEDIA NG KULTURA: KASAYSAYAN, PAG-ANDAR, URI, PAGHAHANDA - BIOLOGY - 2026

Ang kultura media ay mga espesyal na paghahanda sa nutrisyon para sa pagbawi, paghihiwalay at pagpapanatili ng mga mikrobyo at fungal microorganism. Ang mga media na ito ay maaaring maging solid, likido, o semi-solid.

Si Louis Pasteur ang unang nagpakita na sa isang sabaw na ginawa gamit ang pinakuluang mga piraso ng karne, ginamit ito para sa mga bakterya na magparami ng malalaking numero, hanggang sa punto ng pag-ulap ng sabaw. Sa kahulugan na ito, ang sabaw ng karne ng Pasteur ay itinuturing na unang daluyong kultura na ginamit.

Raw at handa na media media (solid at likido). Pinagmulan: Flickr

Pagkatapos Robert Koch, sa tulong ng kanyang mga nakikipagtulungan Julius Richard Petri at Walter Hesse, gumawa ng mahusay na mga hakbang. Ang una ay dinisenyo ang Petri ulam, na ginagamit pa rin ngayon; at ang pangalawa ay naganap sa kanya upang kapalit ng gelatin para sa agar-agar upang maghanda ng solidong media ng kultura, na kung saan ay napaka-kaugnay, dahil ang gelatin ay napabagsak ng ilang mga microorganism.

Sa kasalukuyan maraming mga klase ng media media na may iba't ibang mga layunin, samakatuwid, ang mga ito ay naiuri ayon sa kanilang pag-andar: bukod sa pinakamahalagang maaari nating banggitin ang nutritional, selective, kaugalian, transportasyon, pagpayaman, at pagbibilang ng media media. mga kolonya, pagpapanatili at para sa pagsubok sa pagkamaramdaman.

Ang ilang mga media media ay espesyal para sa pagmamasid sa mga reaksyon ng kemikal, na lubhang kapaki-pakinabang para sa pagkilala ng microorganism na kasangkot. Kabilang sa mga ito maaari nating banggitin: Kligler medium, MIO, LIA, citrate, bukod sa iba pa.

Kasaysayan

Ang unang daluyan ng kultura ay inihanda ni Louis Pasteur nang subukan niyang ipakita na ang buhay ng microbial ay hindi produkto ng kusang henerasyon, ngunit ang mga microorganism ay maaaring dumami at nagmula din sa himpapawid.

Inihanda niya ang isang sabaw na may mga piraso ng karne at naobserbahan na makalipas ang ilang araw matapos na mailantad sa hangin, umuulbo ito at mayroong isang kapuri-puri na halaga ng mga microorganism sa sabaw. Kasabay nito, ang isa pang sabaw na may dating pinakuluang at hermetically selyadong piraso ng karne ay nanatiling translucent habang ang mga araw ay lumipas.

Nahuli nito ang pansin ng maraming mga mananaliksik at napagtanto nila na ang mga microorganism na ito ay may pananagutan para mabulok ang karne at nagdudulot din ng ilang mga sakit.

Para sa kadahilanang ito, napakahalagang lumikha ng isang paraan upang makalikha ang mga microorganism na ito sa laboratoryo upang pag-aralan pa sila.

Sa ganitong kahulugan, gumawa si Robert Koch ng isang napakahalagang kontribusyon sa pagpapabuti ng ilang mga diskarte sa laboratoryo, lalo na ang mga nauugnay sa paghihiwalay ng bakterya, habang ipinakilala niya ang konsepto ng isang solidong daluyan ng kultura.

Sa una ay gumamit siya ng mga hiwa ng patatas bilang isang solidong daluyan ngunit kalaunan ay idinagdag niya ang gelatin sa mga sabaw ng karne na may mas mahusay na mga resulta. Gayunpaman, may mga oras na ang halaya ay matunaw at magiging isang likido na kultura. Ngayon kilala na ito ay nangyayari dahil ang ilang mga bakterya ay may kakayahang hydrolyzing gelatin.

Ito ay pagkatapos na ang isa sa kanyang mga nakikipagtulungan ay may ideya na gumamit ng agar-agar, isang tambalan na ginamit ng kanyang asawa upang makapal ang kanyang mga matatamis.

Ang rudimentary culture medium na ito ay unti-unting naging mas sopistikado, hanggang sa maabot nito ang media media na kilala ngayon.

Komposisyon

Ang bawat daluyan ay may iba't ibang komposisyon, ngunit kinakailangan na naglalaman ito ng mga tiyak na nutrisyon para sa isang mahusay na pag-unlad ng uri ng microorganism na hinahangad.

Maaari rin itong maglaman ng mga tiyak na sangkap na kemikal na makakatulong na ibunyag ang metabolic pathway na mayroong isang tiyak na pilay, o na nagpapakita ng pagkakaroon ng ilang mga enzyme.

Ang isa pang mahalagang elemento ay ang paggamit ng mga sangkap ng buffer. Ang mga ito ay makakatulong na mapanatili ang balanse ng osmotic ng media, pati na rin ang pH.

Maaari rin silang maglaman ng mga karbohidrat at isang tagapagpahiwatig ng pH upang ipakita ang idinagdag na pagbuburo ng asukal. Ang isang pagbabago ng kulay ng daluyan ay masusunod kung mayroong acidification na nabuo sa pamamagitan ng pagbuburo.

Ang ilang media media ay naglalaman ng mga inhibitory na sangkap. Depende sa sangkap na ginamit, ang paglago ng ilang mga microorganism ay pipigilan at ang iba ay papaboran.

Mga uri ng media media

Ang media media ay inuri ayon sa iba't ibang pamantayan. Ito ay: ayon sa pagkakapareho nito, komposisyon at pagpapaandar nito.

- Ayon sa pagkakapare-pareho nito

Mga likido

Hindi sila naglalaman ng agar-agar. Ang paglaki ng bakterya o fungal ay napatunayan sa pamamagitan ng kaguluhan ng sabaw, na orihinal na translucent.

Solid

Naglalaman ang mga ito sa pagitan ng 1.5 hanggang 2% agar-agar. Ang solidified halo ay may isang ibabaw na lumalaban sa pinong kilusan ng platinum handle nang hindi masira ito.

Ang semi-solid

Naglalaman sila ng humigit-kumulang na 0.5% agar-agar, samakatuwid, ito ay isang intermediate na estado sa pagitan ng likido at solid. Tamang-tama sa media na nagsisilbi upang makita ang motility. Inirerekomenda din sila para sa pag-iingat ng mga strain, habang pinapanatili nila ang kahalumigmigan nang mas mahaba.

Biphasic

Ang mga ito ay media na inihanda sa isang paraan na mayroong isang solidong yugto at sa isang likidong daluyan. Malawakang ginagamit para sa mga kultura ng dugo.

- Ayon sa komposisyon nito

Likas na lumalagong media

Ang mga ito ay mga sangkap na kinunan nang direkta mula sa likas na katangian upang linangin ang bakterya, na nagbibigay sa kanila ng isang kapaligiran na malapit sa kung paano sila normal na umuusbong sa ekosistema. Halimbawa, gatas, juice, diluted na dugo, suwero, atbp.

Synthetic media media

Ang mga ito ang pinaka ginagamit ngayon, sila ang dehydrated media na nakuha namin sa mga komersyal na bahay at kilala ang lahat ng kanilang kemikal na komposisyon, dahil estratehikong dinisenyo sila ayon sa uri ng microorganism na ihiwalay.

Semi-synthetic culture media

Ito ay ang kumbinasyon ng isang synthetic medium na kung saan ang isang natural na elemento ay idinagdag upang pagyamanin ang daluyan.

Media kultura ng cell

Ang mga ito ay espesyal na media para sa paglilinang ng mga virus, dahil ang mga microorganism na ito ay hindi makaligtas sa labas ng mga selula, dapat silang maglaman ng mga tisyu o nabubuhay na mga cell, mula sa isang hayop o isang halaman.

Halimbawa: mga kultura ng cell ng kidney ng unggoy o mga embryonated na itlog.

- Ayon sa utility nito

Nutritive, selective, kaugalian, transportasyon, pagpapayaman, pagkakakilanlan, dami ng colonyant, pagpapanatili at pagkamaramdamin sa pagsubok ng media. Ilalarawan sila mamaya.

Pag-andar

Anuman ang uri ng daluyan ng kultura, lahat sila ay may pangkaraniwan at iyon ay pinadali o itinataguyod nila ang pagpaparami ng ilang mga microorganism. Ang pagkakaiba ay namamalagi sa komposisyon ng bawat isa sa kanila, na kung saan ay isang pagtukoy kadahilanan para sa pangwakas na utility na magkakaroon sila.

Ang bawat isa sa umiiral na media media ay madiskarteng dinisenyo para sa tiyak na pag-andar kung saan ito nilikha, iyon ay, lahat sila ay may isang pundasyon na namamahala sa mga alituntunin ng kanilang tukoy na pag-andar.

Dapat pansinin na ang media media na minsan na nahasik ay dapat sumailalim sa mga kondisyon ng temperatura at oxygen na naaangkop sa uri ng bakterya o fungus na ihiwalay.

Halimbawa, kung nais mong ihiwalay ang mga bakterya na anaerobic na mesophilic, maaari kang gumamit ng agar agar ng dugo at mag-incubate sa ilalim ng mga kondisyon ng anaerobic (nang walang oxygen) sa 37 ° C sa loob ng 48 oras.

Ngayon, kung ang isang halamang-singaw ay kailangang ihiwalay, ginagamit ang Sabouraud agar na may mga antibiotics. Ito ay nabubulok sa aerobiosis, sa temperatura ng silid nang maraming araw, dahil ang huli ay mabagal na lumalaki.

Nutrisyunal na Simple Culture Media

Tulad ng ipinahihiwatig ng pangalan nito, ang mga media media na ito ay naglalaman ng mga sangkap na nakapagpapalusog, tulad ng mga mapagkukunan ng mga bitamina, amino acid, nitrogen at carbon, bukod sa mga ito maaari nating banggitin: katas ng karne o lebadura ng lebadura, mais na kanal, pancreatic digest, peptones, glucose, Bukod sa iba pa.

Naglalaman din sila ng iba pang mga sangkap na nagbibigay ng kapaligiran ng osmotic balanse, dahil ang karamihan sa mga pananim ay nangangailangan ng isang pH na malapit sa 7.0. Ang mga elementong ito ay maaaring: sodium chloride, disodium phosphate, bukod sa iba pa.

Ang diluent ay distilled water at ang solid media ay may agar-agar.

Ang layunin ng mga media media ay upang mabawi ang bakterya o fungal microbiota na umiiral sa isang naibigay na sample. Hindi nito naiiba ang pagitan ng mga microorganism, dahil may kakayahang lumaki ang isang malaking bilang ng mga bakterya, parehong positibo ang Gram at negatibong Gram, pati na rin ang lebadura at mycelial fungi.

Inirerekomenda ang mga ito para sa mga sample ng seeding mula sa normal na mga site ng sterile. Gayunpaman, hindi angkop ang mga ito para sa mga napakabilis na microorganism.

Kapaki-pakinabang din ang mga ito para sa pagpapanatili ng mga strain, hangga't hindi naglalaman ng glucose.

Pinahusay na media media

Kung ang dugo o pinainit na dugo ay idinagdag sa simpleng nutritive media, sila ay naging mayaman media (dugo agar at chocolate agar ayon sa pagkakabanggit).

Ang mga media na ito ay lubhang kapaki-pakinabang para sa mga seeding na normal na sterile sample, para sa pagliligtas ng mga strain na mahina, at para sa paghiwalayin ang mga nutritional na hinihingi ng mga microorganism.

Mapiling media media

Ang napiling media media bukod sa naglalaman ng mga mahahalagang nutrisyon para sa paglaki ng ilang mga microorganism na interes, idinagdag ang mga inhibitory na sangkap, tulad ng antibiotics, antifungal, dyes, bile salts, bukod sa iba pa.

Ang mga hinihimok na sangkap ay inilaan upang mabawasan ang iba't ibang mga strain na maaaring lumago, na pinapaboran ang paglaki ng isang partikular na espesyal na pangkat na maililigtas.

Halimbawa: EC sabaw (espesyal para sa kabuuan at fecal coliforms) o Sabouraud agar na may mga antibiotics (tiyak para sa fungi).

Pagkakaiba ng media media

Ang pagkakaiba-iba ng media ay naglalaman ng mga elemento ng nutritional na kinakailangan para sa paglaki ng isang tiyak na grupo ng mga microorganism at naglalaman din ng mga sangkap na sa pagkakaroon ng ilang mga microorganism ay masunud-sunurin o masiraan ng loob.

Iyon ay, gagawa sila ng mga reaksiyong kemikal na sa isang paraan o sa iba pa ay mapatunayan sa medium ng kultura.

Ang ilang mga reaksyon ay nag-alkalize o acidify ang daluyan at, salamat sa pagkakaroon ng isang tagapagpahiwatig ng pH, ang mga pagbabagong ito ay maaaring mapatunayan sa pamamagitan ng isang paglipat ng kulay sa medium at sa kolonya.

Samakatuwid, sa isang malaking grupo ng mga bakterya na magagawang lumaki sa daluyan na ito, ang mga nag-metabolize o nagpapabagal sa sangkap at sa mga hindi, sa pamamagitan lamang ng pag-obserba ng kulay ng kolonya at daluyan, ay makikilala.

Halimbawa, pinahihintulutan ng agar agar ng dugo ang isa na makilala ang mga bakterya na nagdudulot ng beta hemolysis (malinaw na halo) mula sa mga nagdudulot ng alpha hemolysis (maberde na halo) at sa mga hindi gumagawa ng hemolysis.

Selective at kaugalian media

Ang isang halimbawa nito ay kung ano ang nangyayari sa MacConkey agar. Napili ito dahil pinapayagan lamang ang paglago ng negatibong bacilli ng Gram; at ito ay pagkakaiba, dahil ang bakterya ng lactose-fermenting (mga colony ng fuchsia) ay maaaring makilala mula sa mga bakterya na walang pagbuburo (maputla na kulay rosas o walang kulay).

Media sa kultura ng transport

Tulad ng iminumungkahi ng kanilang pangalan, ang mga ito ay ginagamit upang magdala ng mga sample na kinuha sa isang higit pa o hindi gaanong malayong lugar sa laboratoryo na magpoproseso ng sample. Ang transport medium ay nagpapanatili ng sample sa mga pinakamahusay na kondisyon upang makuha ang maaasahang mga resulta.

Ang mga media media na ito ay may napaka-espesyal na katangian, dahil hindi sila maaaring lumampas sa mga nutrisyon, dahil ang populasyon ng bakterya na naroroon ay kinakailangan na manatiling mabubuhay, ngunit nang walang pagtaas sa bilang.

Sa pangkalahatan sila ay semi-solid media, na pinapayagan ang sample na manatiling hydrated. Gayunpaman, walang kompromiso ang dapat gawin sa pagkuha ng sample sa laboratoryo sa lalong madaling panahon. Mga halimbawa ng paraan ng transportasyon: Stuart medium, Cary Blair at Amies.

En media ng kultura ng pagpapayaman

Ang mga media media ay likido. Ginagamit ang mga ito upang iligtas ang mga tukoy na pathogen na sa anumang naibigay na oras ay maaaring naroroon sa isang sample sa kaunting dami.

Kapaki-pakinabang din upang iligtas ang isang pathogenic na galaw na maaaring mahina mula sa anumang natanggap na paggamot na natanggap. Hal: tubig ng peptone, thioglycollate na sabaw at selenite na sabaw.

Ang mga media na ito ay may mga sangkap na nakakahawa na pumipigil sa paglaki ng kasamang microbiota, at mga tukoy na nutrisyon na pinapaboran ang pag-unlad ng microorganism ng interes.

Media ng kultura para sa mga layunin ng pagkakakilanlan

Ang mga media na ito ay naglalaman ng mga sangkap na maaaring masunud sa kemikal ng ilang bakterya, na gumagawa ng mga reaksiyong kemikal na nagpapakita ng pagkakaroon ng mga tiyak na enzyme o metabolic pathway.

Samakatuwid, ang mga ito ay ginagamit bilang mga pagsubok sa biochemical na tumutulong sa pagkilala sa genus at mga species ng isang partikular na pangkat ng mga strain. Halimbawa: Ipinapakita ng daluyan ng Kligler kung ang microorganism ay may kakayahang mag-fermenting glucose at lactose, kung gumagawa ito ng hydrogen sulfide at gas.

Ang daluyan na ito ay naglalaman ng mga paghahayag ng mga sangkap na pinapayagan ang reaksyon na sundin, tulad ng tagapagpahiwatig ng pH, at mga iron iron.

Ang simpleng pagsubok na ito ay maaaring magkakaiba sa dalawang malalaking pangkat ng mga microorganism ng bakterya, tulad ng bakterya na kabilang sa pamilyang Enterobacteriaceae mula sa tinatawag na non-fermenting bacteria.

Media para sa pagbibilang ng mga kolonya

Ang mga ito ay simple, hindi pumipili ng media na nagsisilbi para sa dami ng isang populasyon ng microbial, tulad ng karaniwang medium ng bilang. Ang uri ng microorganism na lalago sa daluyan na ito ay depende sa mga kondisyon ng temperatura at oxygen na itinatag.

Media ng kultura para sa pagsubok sa pagkamaramdamin

Ang pamantayang daluyan para sa hangaring ito ay Müeller Hinton agar, ang daluyan na ito ay mainam para sa pagsusuri ng pag-uugali ng iba't ibang mga antibiotics laban sa isang nakahiwalay na pathogenic microorganism.

Ito ay kapaki-pakinabang lalo na sa hindi natukoy na bakterya, habang sa hinihingi na bakterya maaari lamang itong magamit kung ito ay pupunan ng dugo.

Media ng kultura para sa pagpapanatili

Ang layunin ng mga nangangahulugan na ito ay upang kopyahin ang microorganism at upang mapanatili ang kakayahang umangkop ng bakterya o fungus para sa hangga't maaari at mapanatili din ang mga function ng physiological.

Ang isang mahalagang katangian ay ang ganitong uri ng daluyan ay hindi dapat maglaman ng glucose, dahil bagaman ito ay isang elemento na nagbibigay ng mabilis na paglaki, ang pagbuburo nito ay gumagawa din ng mga acid na bumababa sa buhay ng microorganism.

Ang ilang mga laboratoryo ay kailangang panatilihin ang ilang mga microorganism na maaaring magamit para sa paglaon sa pag-aaral sa huli, mga panloob na kontrol, o para sa mga layuning pang-edukasyon.

Paghahanda

Sa kasalukuyan mayroong maraming mga komersyal na tatak na namamahagi ng iba't ibang media sa kultura. Ang media ay nagmumula sa freeze-dry o dehydrated form, na nilalaman sa mga airtight garapon at protektado mula sa ilaw.

Ang bawat daluyan ay may isang label na tinukoy ang pangalan ng daluyan, ang mga bahagi, numero ng maraming at kung magkano ang timbangin upang maghanda ng isang litro ng daluyan ng kultura.

Ang natunaw na tubig ay ginagamit bilang diluent. Ang timbang na dami ay natunaw sa isang litro ng distilled water hanggang sa homogenized ang halo. Karamihan sa mga media ay autoclaved, sa 15 pounds pressure, 121 ° C temperatura, sa loob ng 15 minuto.

Ang likidong media ay autoclaved na ipinamamahagi sa kani-kanilang mga tubo sa pagtatrabaho, habang ang solidong media ay autoclaved sa Erlenmeyer flasks.

Pinapayagan ang huli na tumayo hanggang sa maabot nila ang temperatura na 55 ° C at ihahain sa mga pinggan ng Petri sa loob ng isang laminar flow hood o malapit sa Bunsen burner. Iniwan sila upang palakasin at maiimbak sa ref ang baligtad.

Mayroon ding solid media media na ipinamamahagi sa mga tubes, na nagpapahintulot sa kanila na palakasin ang alinman sa mga stud (tuwid) o sa flute beak (hilig).

Bago gamitin ang anumang inihanda na daluyan ng kultura, solid man o likido, dapat itong maiinis bago ihasik ang sample.

Kahalagahan

Ang media media ay walang alinlangan na isang napakahalagang tool ng trabaho para sa mga microbiologist, dahil ginagawang posible upang mabawi ang nakakahawang ahente na sa isang sandali ay maaaring makaapekto sa isang indibidwal o kontaminado ang isang pagkain, isang kapaligiran o isang ibabaw.

Sa kahulugan na ito, masasabi na ang microbiology ay may iba't ibang larangan, bukod sa mga ito ay klinikal, pang-industriya, kapaligiran, microbiology ng pagkain, bukod sa iba pa, at kultura ng media ay ginagamit sa lahat ng mga ito.

Siyempre, ang uri ng daluyan na ginamit sa bawat kaso ay maaaring mag-iba ayon sa mga pangangailangan at ang uri ng sample na naproseso. Ang grupo ng microorganism na hinahangad ay nakakaimpluwensya rin.

Ang paghihiwalay ng pathogenic microorganism o ang sanhi ng anumang kontaminasyon ay mahalaga upang maipatupad ang isang epektibong paggamot o magpatibay ng mga pamamaraan na makakatulong na maalis ang kontaminadong pinag-uusapan.

Sa kaso ng klinikal na microbiology, hindi lamang mahalaga na ibukod ang microorganism at makilala ito (alamin ang genus at species), ngunit dapat ding gumanap ang antibiogram.

Ang pag-aaral na ito, na gumagamit din ng medium medium, ay magpapahintulot sa amin na sabihin kung aling antimicrobial ang sensitibo at alin ang lumalaban o, sa madaling salita, na maaaring magamit bilang isang paggamot at kung saan ay hindi.

Samakatuwid, ang media media sa pangkalahatan ay hindi maaaring kulang sa isang laboratoryo ng microbiology, anuman ang lugar.

Sa wakas, masasabi na ang media media ay naging posible upang siyasatin ang iba't ibang mga aspeto ng parehong bakterya at fungi.

Marka ng kontrol ng media media

Ang paghahanda at paggamit ng media media ay hindi dapat gaanong gawin. Sa bawat laboratoryo dapat mayroong isang departamento na nag-aaplay ng mga control protocol ng kalidad sa media, sa bawat oras na ang mga bagong batch ay handa, at sa gayon matiyak na maayos silang handa, may sterile at functional.

Upang masuri ang kanilang tibay, ang isa o dalawang media ay kinukuha nang random mula sa bawat batch at natupok sa 37 ° C sa loob ng maraming araw (walang dapat na paglaki). Tunay na may kultura at mabubuhay na sanggunian ng sangguniang ATCC (American Type Culture Collection) ay ginagamit upang mapatunayan ang kanilang pagpapaandar.

Pagtatapon ng media media

Matapos gamitin ang media media, dapat itong itapon sa paraang hindi ito kontaminado sa kapaligiran.

Para sa mga ito, ang materyal ay isterilisado sa isang autoclave bago ito itinapon. Kasunod nito, ang materyal ay tinanggal mula sa glassware. Ang huli ay pagkatapos ay hugasan, tuyo, isterilisado at itabi para magamit sa ibang pagkakataon. Sa kaso ng paggamit ng mga disposable plate, ito ay isterilisado at kalaunan ay itinapon sa mga espesyal na bag.

Mga Sanggunian

1. Borrego Microbiology sa mga selyo VIII. Robert Koch: Ang tagumpay ng pagtitiyaga (I). Balita SEM 2018, 117 (1): 1-18 Unibersidad ng Malaga. Magagamit sa: jornades.uab.cat/
2. Volcy C. Genesis at ebolusyon ng mga post ni Koch at ang kanilang kaugnayan sa phytopathology. Isang pagsusuri sa Colomb. 2008; 26 (1): 107-115. Magagamit sa: scielo.org.co/
3. Ang Burguet Lake Nancy, Castle ng Lourdes ni Abraham Lourdes. Ang kontrol ng kalidad ng media media na ginagamit sa pagsubaybay sa kapaligiran ng mga naiuri na lugar ng produksyon. Rev Cubana Hig Epidemiol 2013; 51 (2): 155-160. Magagamit sa: scielo.
4. Bonilla M, Pajares S, Vigueras J, Sigala J, Le Borgne S. Ang manu-manong materyal na materyal ng batayang kasanayan sa microbiology. Metropolitan autonomous na unibersidad. Dibisyon ng Likas na Agham at Engineering. Cuajimalpa Unit. 2016.Maaari sa: cua.uam.mx/
5. Carbajal A. Cell culture media: isang pagsusuri. Labome Ang mundo ng mga laboratoryo. University of Pittsburgh Medical Center, Estados Unidos. Magagamit sa 2013: es /
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.