PAGHAHANDA NG MEDIA NG KULTURA: MGA LAYUNIN AT HAKBANG - BIOLOGY - 2025

Ang paghahanda ng media media ay isang nakagawiang pamamaraan na ginagamit sa mga laboratoryo para sa paglaki ng nais na mga microorganism. Ang media media ay solid, likido o semi-solid na paghahanda na mayroong lahat ng kinakailangang mga nutrisyon para sa pagbuo ng isang populasyon ng microbial.

Sa pangkalahatan, ang mga paraan para sa paglilinang ng mga microorganism ay mayaman sa mga protina at amino acid at karaniwang naglalaman ng ilang sangkap na pinapaboran ang paglaki ng organismo na mapag-aralan, tulad ng mga bitamina, dugo, suwero, at iba pa.

Pinagmulan: pixabay.com

Walang pangkalahatang o unibersal na daluyan ng kultura, dahil ang komposisyon nito ay nag-iiba depende sa mga pangangailangan ng microorganism ng interes. Ang ilang mga bakterya ay maaaring lumago sa anumang daluyan ng kultura, ngunit ang iba ay may mga espesyal na kinakailangan.

Ano ang binubuo nito?

Ang mga mikrobyo, tulad ng fungi at bakterya, ay hindi maaaring pag-aralan nang paisa-isa dahil sa kanilang maliit na sukat. Para sa kadahilanang ito, dapat silang linangin sa artipisyal na paraan na nagbibigay-daan sa isang makabuluhang pagtaas sa populasyon.

Halimbawa, kung nais nating pag-aralan ang mga bakterya kailangan nating ibigay ang mga ito sa tamang mga kondisyon upang maaari silang makabuo at makabuo ng isang kolonya (na maaaring sundin ng hubad na mata).

Ang paghahanda ng media media ay magkakaiba-iba depende sa uri ng microorganism na malilinang. Bago ihanda ito, kinakailangan na malaman ang mga pangunahing pangangailangan sa nutrisyon ng organismo ng trabaho.

Ang pinakakaraniwang sangkap na ginagamit sa media media ay ilalarawan sa ibaba upang makakuha ng isang pangkalahatang ideya ng kanilang paghahanda:

Agar

Ginagamit ito sa mga kultura bilang isang gelling agent at idinagdag kapag naghahanap para sa isang solid o semi-solid medium. Ang unang ahente ng solidifying na ginamit sa paghahanda ng media ay gelatin, ngunit noong 1883 agar ay ipinakilala sa mundo ng bacteriology ni W. Hesse.

Ang bacteriological agar ay bilang pangunahing sangkap nito isang polysaccharide na may mga kumplikadong sanga na nakuha mula sa algae. Ang tambalang ito ay ginagamit bilang isang pampalapot sa mga karaniwang pagkain tulad ng ice cream at jams.

Ito ay isang napakahalagang elemento sa microbiology para sa maraming mga kadahilanan. Pangunahin dahil ang mga microorganism ay hindi maaaring magpahina sa loob nito, ito ay mga likido sa temperatura na 100 ° C at nananatili sa isang likido na estado hanggang sa umabot sa 45 ° C o mas kaunti.

Sa kaso na nais mong maghanda ng isang solidong daluyan, ang konsentrasyon ng agar ay dapat na nasa paligid ng 1.5%, habang ang semisolids ay dapat maghanda mula 0.3 hanggang 0.5%.

Mga likido

Ang paglilinang ng mga pathogen organismo ay nangangailangan ng mga likido sa katawan upang maaari silang bumuo tulad ng nais nila sa kanilang likas na kapaligiran. Para sa kadahilanang ito, idinagdag ang buo o defibrillated na dugo. Ang likido ay kinuha mula sa isang malusog na hayop at, kapag isterilisado, idinagdag ito sa medium ng kultura.

Mga sipi

Nakukuha sila mula sa iba't ibang mga bahagi ng hayop (tulad ng karne o atay) o mga gulay (mga buto) at pinoproseso upang makakuha ng isang solidong konsentrasyon sa anyo ng isang i-paste o pulbos. Ang pinakakaraniwan ay lebadura, malt, at karne.

Mga peptones

Ang mga organikong compound na ito ay nakuha ng enzymatic o chemical hydrolysis ng mga hayop o halaman na tisyu. Ang layunin ay upang magdagdag ng nilalaman na mayaman sa mga amino acid, na mga pangunahing yunit ng mga protina.

Mga shock na sumisipsip

Iniiwasan ng "buffers" o buffer system ang mga biglaang pagbabago sa pH at makakatulong na mapanatili ang pinakamainam na saklaw na pinahihintulutan ng katawan.

Karamihan sa mga organismo ay maaaring lumago nang maayos sa isang pH na 7, bagaman ang ilang mga bakterya ay ginusto ang alkalina na media. Gayunpaman, mayroong mga bakterya na lumalaban sa mga pagkakaiba-iba ng pH sa pagitan ng mga halaga ng 6 at 9.

Sa mga species na sensitibo sa pH, ang pinsala ay hindi ginawa ng labis na dami ng mga hydrogen o hydroxyl ion, ngunit sa pamamagitan ng pagtaas ng mga mahina na acid o mga base na maaaring tumagos sa cell.

Gayundin, ang mga tagapagpahiwatig ng pH ay idinagdag upang subaybayan ito at maiwasan ang mga paglihis na dulot ng pagbuburo o iba pang mga proseso.

mga layunin

Ang pangunahing layunin kapag naghahanda ng isang medium medium ay upang magdagdag ng lahat ng mga kinakailangang sangkap upang pahintulutan ang matagumpay na pag-unlad ng organismo. Ang pinaka-epektibong kumbinasyon ng mga sangkap at nutrisyon upang makamit ang nais na daluyan ay dapat makilala.

Parehong ang paghahanda at pag-iimbak ng daluyan ay kritikal upang matiyak ang matagumpay na paglaki, dahil ang komposisyon ng daluyan at ang pagkakaroon ng mga sustansya ay nakasalalay sa mga hakbang na ito.

Dapat itong isaalang-alang na ang paglilinang ng mga microorganism ay isang gawain na apektado ng maraming mga kadahilanan na panlabas sa medium medium, tulad ng intensity ng ilaw na natanggap, temperatura at antas ng kaasiman o alkalinidad ng daluyan. Samakatuwid, ang bawat isa sa mga variable na ito ay dapat isaalang-alang.

Mga uri ng media

Batay sa komposisyon nito

Batay sa kanilang komposisyon, mayroong tatlong pangunahing uri ng mga pananim: natural o empirical, semi-synthetic, at tinukoy na synthetic o kemikal media.

Likas na kapaligiran

Sa mga likas na kapaligiran hindi alam ang eksaktong komposisyon. Kasama dito ang mga sangkap tulad ng gatas, diluted na dugo, mga juice ng gulay, extract at infusions ng karne at peptones. Para sa mga kadahilanang pang-ekonomiya, ang mga murang mga sangkap tulad ng toyo, whey, molass, atbp ay madalas na idinagdag.

Semi-synthetic media

Ito ay tinatawag na isang semi-synthetic medium kung ang komposisyon nito ay bahagyang kilala. Ang anumang daluyan na naglalaman ng agar ay nagiging isang semi-synthetic medium.

Kabilang sa mga ito mayroon kaming patatas dextrose agar, czapek-dox agar, oat agar, karne peptone agar, bukod sa iba pang mga halimbawa.

Synthetic o chemical na tinukoy na daluyan

Sa kasong ito ang komposisyon ng daluyan - sa mga tuntunin ng halaga ng mga mapagkukunan ng carbon, nitrogen, asupre, posporus at anumang iba pang kadahilanan ng paglago - ay lubos na kilala. Ito ay lubhang kapaki-pakinabang kung nais mong makakuha ng mga maaaring makuha na mga resulta para sa iba pang mga mananaliksik.

Para sa tinatawag na "microorganism na may mga espesyal na kinakailangan sa paglago" kinakailangan upang magdagdag ng mga kinakailangang sangkap. Ang isang halimbawa ng ganitong uri ay ang Lactobacillus.

Batay sa uri ng microorganism

Katulad nito, mayroong isa pang pag-uuri para sa kultura ng media batay sa uri ng microorganism na maaaring lumago dito. Ang pagsunod sa prinsipyong ito ay mayroon tayong sumusunod na pangkalahatang, pagpapayaman, paraan ng pagpili at pagkakaiba. Ang bawat isa ay inilarawan sa ibaba:

Pangkalahatang media

Sinusuportahan ng mga ito ang pagbuo ng isang malawak na iba't ibang mga microorganism. Kung ang anumang organismo ay nangangailangan ng mga espesyal na kundisyon para sa paglago nito, hindi ito matagumpay na malinang sa ganitong uri ng kultura.

En media ng pagyamanin

Sinusuportahan ng media ng pagpapayaman ang paglaki ng isang tiyak na uri ng microorganism, ngunit walang naidagdag na sangkap upang maiwasan ang paglaki ng iba pang mga uri ng mikrobyo.

Piniling media

Hinahanap nila ang tiyak na paglaki ng isang microorganism, tinatawag itong fungi, bacteria, protozoa, bukod sa iba pa. Upang gawin ito, pinipigilan nila ang pagbuo ng iba.

Upang makamit ang layuning ito, ang mga kemikal na compound na nakamamatay para sa isang malawak na grupo ng mga microorganism at hindi nakakapinsala sa organismo ng interes ay maaaring idagdag, o sa pamamagitan ng pagdaragdag ng mga mapagkukunan ng enerhiya na maaari lamang na assimilated ng target na microbe.

Ginagamit ang mga selektibong media kapag kumukuha ng mga medikal na halimbawa upang malinang ang isang pathogenic microorganism. Narito kinakailangan upang maitaguyod ang paglaki ng pathogen at pagbawalan ang pagbuo ng normal na microbial flora mula sa pasyente.

Halimbawa, ang Bismuth sulfite agar, ay hindi pinapayagan ang paglaki ng mga positibong bacteria na gramo at isang malaking bilang ng mga bakterya na natagpuan sa gastrointestinal na lukab. Para sa kadahilanang ito, ginagamit upang linangin ang mga bacteria na negatibong bakterya na nagdudulot ng typhoid fever, Salmonella typhi sa mga fecal sample.

Pagkakaiba ng media

Ang uri na ito ay gumagamit ng ilang mga diagnostic na katangian ng organismo ng interes (mga kakaiba sa metabolismo nito, halimbawa) upang makilala ang mga ito laban sa isa pang species na lumalaki sa parehong kapaligiran.

Ang kapwa pagkakaiba-iba ng media at napiling media ay lubos na kapaki-pakinabang sa lugar ng klinikal na microbiology at kalusugan ng publiko, dahil ang mga disiplinang ito ay kailangang makita ang pagkakaroon ng mga tiyak na microorganism na may kaugnayan sa mga pathology o hindi magandang kondisyon sa kalinisan.

Ang mga sangkap ng tagapagpahiwatig ay maaaring idagdag sa kultura na nagbibigay ng isang natatanging katangian sa hiningi na kolonya. Halimbawa, ang lactose at isang tagapagpahiwatig ng pH ay idinagdag sa agar-eosin-methylene na asul (pinaikling EMB) at agarC ng MacConkey.

Kaya, kapag ang isang kolonya ay bubuo sa mga media na may kakayahang mag-ferment lactose at makagawa ng aldehydes, maaari silang sundin sa isang espesyal na kulay.

Mga Hakbang

Sa kasalukuyan ang media media ay maaaring mabili sa form na lyophilized. Samakatuwid, ang paghahanda ay madali at ang tanging bagay na naiwan upang gawin ay rehydrate ang produkto. Ang nilalaman ay dapat timbangin (isinasaalang-alang ang pangwakas na dami na ihanda) at matunaw sa distilled water na sumusunod sa lahat ng mga indikasyon ng produkto.

Ang nilalaman ng likidong media ay dapat nahahati sa mga nais na lalagyan (pinggan ng Petri, mga tubo, atbp.) Para sa kasunod na isterilisasyon. Upang maipamahagi ang solidong daluyan ay kinakailangan upang matunaw ito gamit ang isang microwave o isasailalim ang materyal sa isang paliguan ng tubig. Ang pH ng daluyan ay dapat na nababagay.

Karaniwan ang agar ay ginagamit sa mga test tubes o pinggan Petri. Kung ang agar ay solidify sa isang hilig na posisyon, na may tamang anggulo upang ang pangwakas na gilid ng terminal ay diagonal, ang pag-aayos na ito ay kilala bilang tuka o hilig na mga tubo. Kapag ang agar ay solidify sa isang ganap na patayong posisyon, ito ay tinatawag na "malalim".

Matapos isterilisado ang media - gamit ang isang autoclave - pinahihintulutan silang magpalamig. Ang mga ito ay dapat hawakan sa isang kapaligiran na walang mga microorganism, ang pinakakaraniwan ay upang gumana sa isang ilaw na magaan na nagsisiguro sa isang aseptiko na kapaligiran sa kanilang paligid.

Mga Sanggunian

1. Celis, JE (2006). Biology ng cell: isang handbook ng laboratoryo (Tomo 2). Elsevier.
2. Finegold, SM, Bailey, WR, Baron, EJ, Fineglod, SM, & Scott, EG (1991). Bailey Scott: diagnosis ng microbiological. Pan-Amerikanong Medikal.
3. Olivas, E. (2004). Manwal ng Mga Kasanayan ng Mikrobiolohiya I at II at Parasitology. Autonomous University ng Ciudad Juarez.
4. Schlegel, HG, & Zaborosch, C. (1993). Pangkalahatang microbiology. Pressridge University Press.
5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Kaso, CL (2007). Panimula sa microbiology. Panamerican Medical Ed.