CATALASE TEST: MAKATUWIRAN, PAMAMARAAN AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2026

Ang catalase test ay isang pamamaraan na ginagamit sa mga laboratoryo ng bacteriology upang maihayag ang pagkakaroon ng enzyme catalase sa mga bakterya na nagtataglay nito. Kasama ang mantsa ng Gram, sila ang pangunahing mga pagsubok na dapat gawin sa mga bagong nakahiwalay na microorganism. Ang mga pagsubok na ito ay gumagabay sa microbiologist sa mga hakbang na dapat sundin para sa tiyak na pagkakakilanlan ng microorganism na pinag-uusapan.

Sa pangkalahatan, ang bakterya na naglalaman ng cytochrome ay nagtataglay ng enzyme catalase, na nangangahulugang ang pagkakaroon ng aerobic at anaerobic na bakterya ay dapat magkaroon. Gayunpaman, may mga pagbubukod, tulad ng Streptococcus, na sa kabila ng pagiging facultative anaerobic microorganism, ay hindi nagtataglay ng enzyme catalase.

Pagpapatakbo ng Catalase Test, na nagpapakita ng isang positibong reaksyon. Pinagmulan: Walang ibinigay na may-akda na nababasa ng makina. Ipinagpalagay ni Nase (batay sa mga paghahabol sa copyright).

Ito ang dahilan kung bakit ginagamit ang pagsubok sa catalase upang makilala ang mga pamilyang Staphylococaceae at Micrococaceae (parehong positibo ang catalase) mula sa pamilyang Streptococaceae (negatibo sa catalase).

Gayundin, ang genus Bacillus (catalase positibo) ay nakikilala mula sa genus Clostridium (catalase negatibo), bukod sa iba pa.

Batayan

Ang Catalase ay isang enzyme na inuri bilang isang hydroperoxidase, nangangahulugan ito na gumagamit sila ng hydrogen peroxide (H ₂ O ₂ ) bilang isang substrate .

Ito rin ay itinuturing na isang oxidoreductase, dahil sa reaksyon kung saan lumahok ito ay mayroong isang elemento na nagsisilbing isang donor ng elektron (pagbabawas ng sangkap) at isa pa bilang isang electron receptor (oxidizing substance).

Ang Catalase ay isang protina na naglalaman ng isang proseric group na may apat na trivalent iron atom (Fe ⁺⁺⁺ ), samakatuwid ito ay isang homoprotein. Ang ferric ion ay nananatiling naka-oxidized sa panahon ng reaksyon.

Masasabi na ang catalase ay isang detoxifying enzyme, dahil ang pagpapaandar nito ay upang maalis ang mga sangkap na ginawa sa panahon ng metabolismo ng bakterya na nakakalason sa bakterya. Kabilang sa mga sangkap na ito ay ang hydrogen peroxide.

Ang hydrogen peroxide ay nabuo mula sa pagkasira ng mga suger ng aerobically. Ang prosesong ito ay nangyayari tulad ng sumusunod:

Ang superoxide ion (O ₂ ^- ) (free radical) ay nabuo bilang end product ng assimilation ng glucose sa pamamagitan ng aerobic ruta. Ito ay nakakalason at tinanggal sa pamamagitan ng dismutase ng enzyme na superoxide na nagbabago sa ito bilang gas na oxygen at hydrogen peroxide.

Ang hydrogen peroxide ay nakakalason din sa bakterya at dapat alisin. Ang catalase ng enzyme ay nagbabawas ng hydrogen peroxide sa tubig at oxygen.

Ang Catalase ay maaaring kumilos sa mga substrate maliban sa hydrogen peroxide, tulad ng mga alkohol, aldehydes, acid, aromatic amines at phenols. Gayunpaman, ang hydrogen peroxide ay maaari ding magamit ng catalase upang ma-oxidize ang iba pang mga nakakalason na compound tulad ng methyl at ethyl alkohol.

Gayundin, ang catalase ay naroroon sa mga cell ng phagocytic, na pinoprotektahan ito mula sa nakakalason na pagkilos ng hydrogen peroxide.

Mga Karaniwang Pamamaraan para sa Catalase Test

Paraan ngSlide

materyales

3% hydrogen peroxide (10 volume).

Slide ng mikroskopyo

Hindi maitatapat na hawakan ng plastik o toothpick ng kahoy.

Proseso

Kumuha ng sapat na kolonya upang pag-aralan nang hindi hawakan ang agar mula kung saan ito nanggaling. Ang kolonya ay dapat na sariwa, iyon ay, mula sa isang kultura ng 18 hanggang 24 na oras.

Ilagay ang kolonya sa dry slide at magdagdag ng isang patak ng 3% hydrogen peroxide dito (maaari ring magamit ang 30% H ₂ O ₂ ). Sundin agad kung pinakawalan o hindi bula.

Pagbibigay kahulugan

Positibong reaksyon: ebolusyon ng gas, napatunayan sa pamamagitan ng pagbuo ng mga bula (malakas na bubbling).

Negatibong reaksyon: walang pagbuo ng bubble.

-Direct na pamamaraan sa purong kultura

Ilagay ang 1 ml ng 3% H ₂ O ₂ sa isang purong plato o kulturang kalso na hindi naglalaman ng dugo (mas mabuti ang nutrient agar). Alamin kung may pagbuo ng bubble kaagad o hindi. Maaari ring magamit ang 30% H ₂ O ₂ .

Ito ay binibigyang kahulugan ng kapareho ng paraan ng porta object.

-Method na may capillary tube o Fung at Petrishko

Punan ang isang 67 mm capillary tube sa taas na 20 mm na may 3% hydrogen peroxide sa pamamagitan ng capillarity.

Pindutin ang nakahiwalay na kolonya upang pag-aralan gamit ang capillary na puno ng 3% H ₂ O _{2 .} Alamin kung ang capillary ay pumupuno ng mga bula sa halos 10 segundo. Pinapayagan ng pamamaraang ito ang semi-quantification ng reaksyon sa mga krus:

Kung walang mga krus ay walang mga bula (negatibong reaksyon).

+ ---- Ilang mga bula (mahina o naantala na reaksyon).

++ - - Maraming mga bula (katamtamang reaksyon).

++ - Naabot ng mga bula ang kabaligtaran na dulo (malakas na reaksyon).

-Taylor at Achanzar pamamaraan para sa catalase test na nagbibigay ng kaduda-dudang

Maglagay ng isang nakahiwalay na kolonya sa isang malinis, tuyo na slide, pagkatapos ay maglagay ng isang patak na 0.5% H ₂ O ₂ at takpan ng isang takip. Alamin kung mayroon man o hindi mayroong pagbuo ng mga nakulong na mga bula.

Pagbibigay kahulugan: ang pagkakaroon ng mga bula ay nagpapahiwatig ng isang positibong reaksyon. Walang mga bula, ito ay binibigyang kahulugan bilang isang negatibong reaksyon.

Catalase test para sa Mycobacterium species

Ang pamamaraan na ito ay kailangang gawin sa pamamagitan ng pagkontrol sa pH at temperatura. Dapat itong isagawa sa ilalim ng isang hood ng daloy ng laminar, dahil mapanganib ang pagmamanipula ng iba't ibang species ng Mycobacterium.

-Material

Ang hydrogen peroxide 30% o 110 na volume (superoxal).

Phosphate buffer pH 7

10% Tween 80

Mycobacterium kalso kultura para sa 3 hanggang 4 na linggo

-Preparasyon

Phosphate buffer pH 7

Timbangin:

1.361 g ng anhydrous monopot potassium phosphate (KH ₂ PO ₄ ).

1.420 g ng anhydrous disodium (Na2HPO3) pospeyt.

I-dissolve ang parehong mga asing-gamot sa isang maliit na sterile distilled water at gumawa ng hanggang sa 1000 ML na may tubig.

10% Tween 80

Gumawa ng isang 1:10 pagbabanto sa Tween 80 na komersyal na puro, upang gawin ito magpatuloy tulad ng sumusunod:

Kumuha ng 1 ml ng Tween 80 at ilagay ito sa isang maliit na distilled water, matunaw at pagkatapos ay bumubuo ng lakas ng tunog na may tubig hanggang 10 ml.

Pangwakas na reagent

Paghaluin ang isang dami ng pospeyt buffer na may isang dami ng 10% Tween 80 (pantay na mga bahagi). Tukuyin sa laboratoryo kung magkano ang nais mong maghanda.

-Process

Ilagay ang 5 ml ng pospeyt na buffer sa isang sterile na naka-cache na tube tube (Bakelite).

Sa pamamagitan ng isang inoculation loop, kumuha ng sapat na kolonya ng isang paglago ng Mycobacterium na binhi sa mga wedge at natunaw sa buffer ng pospeyt.

I-takip ang tubo nang hindi masyadong masikip ang thread. Ilagay sa isang paliguan ng tubig sa 68 ° C sa loob ng 20 hanggang 30 minuto. Lumabas at hayaan ang cool sa 22-25 ° C

Sukatin ang 0.5 ml ng panghuling reagent (ihalo) at idagdag ito sa tubo na may malamig na solusyon. Sundin ang pagbuo o hindi ng mga bula.

Ito ay binibigyang kahulugan ayon sa mga nakaraang pamamaraan.

Gumamit

Kung ang paglaki ng kolonya ay nakuha sa enriched media, ang isang Gram stain at isang catalase test ay dapat gawin sa mga kolonyang nakuha. Gagabayan nito ang microbiologist sa mga pamamaraan na dapat sundin para sa tiyak na pagkakakilanlan.

Pinagmulan: Inihanda ng may-akda na si MSc. Marielsa gil

QA

Upang masuri ang mahusay na pagganap ng hydrogen peroxide reagent, gumamit ng mga sariwang pinalaki na mga strain ng control, tulad ng Staphylococcus aureus bilang positibong kontrol at Streptococcus sp strains bilang isang negatibong kontrol.

Ang isa pang kahalili na nagsisilbing isang positibong kontrol ay ang maglagay ng isang patak ng hydrogen peroxide sa agar agar, ang mga erythrocytes ay may catalase, samakatuwid, magkakaroon ng isang bubbling kung ang reagent ay nasa mabuting kalagayan.

Ang isang agar agar ay maaaring magamit bilang isang negatibong kontrol, dito ang mga erythrocytes ay naka-lysed at negatibo ang pagsubok.

Mga Limitasyon

-Huwag gumamit ng mga lumang kultura para sa pagsubok, dahil maaaring magdulot ito ng mga maling negatibo.

-Avoid na kumuha ng mga kolonya mula sa mga kultura sa agar para sa dugo, kung maingat ka na huwag hawakan ang agar; Ang pamamaraang ito ay maaaring humantong sa maling mga positibo, dahil ang mga pulang selula ng dugo ay naglalaman ng catalase.

-Kung kukuha ka ng kolonya gamit ang isang platinum na hawakan, huwag baligtarin ang pagkakasunud-sunod ng pamamaraan sapagkat maaaring makabuo ito ng mga maling positibo. Ito ay dahil ang platinum ay magagawang tumugon sa hydrogen peroxide, na nagiging sanhi ng isang bubbling.

-Huwag gumamit ng hydrogen peroxide reagent kung ito ay napakaluma, dahil ang reagent ay napaka matatag at may kaugaliang mabulok sa paglipas ng panahon.

-Beep ang hydrogen peroxide reagent na protektado mula sa ilaw at palamigan upang maiwasan ang pinsala.

-Pagpabago ng isang kalidad na kontrol ng hydrogen peroxide reagent sa bawat oras na ginagamit ito.

Isinasaalang-alang na kung 30% H ₂ O ₂ ay ginagamit ang mga reaksyon ay mas malakas kaysa sa mga isinasagawa na may 3% H ₂ O ₂ .

Mga Sanggunian

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Mga pagsubok sa biochemical para sa pagkilala ng mga bakterya na kahalagahan ng klinikal. 3rd ed. Editoryal Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Mga Laboratoryo ng BD. Catalase-Gotario Reagent. Magagamit sa: http://winklerltda.cl
5. Mga Laboratoryo ng Vadequímica. Peroxide. Pagkakapareho sa pagitan ng mga volume at porsyento. Magagamit sa: vadequimica.com