PAGSUBOK SA OXIDASE: MAKATUWIRAN, PAMAMARAAN, AT PAGGAMIT - BIOLOGY - 2026

Ang pagsubok ng oxidase ay isang paraan ng diagnostic na nagpapakita ng pagkakaroon ng complex ng enzyme na tinatawag na cytochrome oxidase c. Ang sistemang ito ay nagpapahiwatig ng pagbabagong-anyo ng cytochrome na nabawasan sa oxidized, dahil nakakakuha ito ng oxygen at ito naman ay kumikilos bilang huling elektronikong tumatanggap (H ⁺ ) sa chain ng paghinga.

Ang salitang oxidase ay isang shorthand na paraan ng pagtukoy sa enzyme cytochrome oxidase, na kilala rin bilang indophenol oxidase. Sa mga sinaunang panahon ay pinaniniwalaan na ang mga enzymes na cytochrome oxidase at indophenol oxidase ay dalawang magkakaibang mga enzyme, ngunit ngayon kilala sila na pareho.

Positibo at Negatibong oxidase test. Pinagmulan: Walang ibinigay na may-akda na nababasa ng makina. Ipinagpalagay ng Alpha.prim ~ commonswiki (batay sa mga paghahabol sa copyright).

Para sa kanilang bahagi, ang mga cytochromes ay mga hemoproteins na naglalaman ng bakal at kumpletuhin ang sistema ng cytochrome oxidase. Ang mga cytochromes ay maaaring mag-iba mula sa mga species hanggang sa mga species.

Mayroong iba't ibang mga uri ng cytochromes (cytochromes a1, a2, a3 at 0). Ang ilang mga bakterya ay maaaring makagawa lamang ng isa, ngunit ang iba pa hanggang dalawa o tatlo sa isang pagkakataon. Sa kahulugan na ito, ang pagkakaroon ng cytochrome a at a3 ay kilala bilang cytochrome oxidase c. Ito ang uri ng cytochrome na nakita ng pagsubok ng oxidase.

Ang genera Neisseria at Pseudomonas ay naglalaman ng cytochrome oxidase c. Ang mga genera na ito ay nagbibigay ng positibong pagsusuri sa oxidase, na tumutulong sa pagkakaiba sa kanila mula sa Acinetobacter at Stenotrophomonas genera ayon sa pagkakabanggit.

Mayroon ding iba pang mga genera na positibo sa oxidase.

Batayan

Mga katangian ng sistema ng cytochrome oxidase c

Ang sistema ng cytochrome oxidase c ay gumagana sa sumusunod na paraan: ang mga oxidase-positive microorganism ay gumagamit ng oxygen upang makabuo ng enerhiya sa pamamagitan ng aerobic respirasyon. Gumagana ang sistemang ito salamat sa transportasyon ng mga electron mula sa mga sangkap ng donor tulad ng NADH ⁺ sa mga sangkap ng receptor, sa kasong ito oxygen.

Nagreresulta ito sa paggawa ng enerhiya (ATP) at tubig o hydrogen peroxide, depende sa cytochrome oxidase system na tinaglay ng microorganism.

Iyon ang dahilan kung bakit ang karamihan sa mga positibong bakterya ng oxidase ay din catalase positibo, isang kinakailangang kondisyon upang maalis ang hydrogen peroxide na ginawa, dahil ang sangkap na ito ay nakakalason sa bakterya.

Ang sistema ng cytochrome oxidase c ay naroroon sa ilang mga aerobic bacteria, ilang mga anaerob ng facultative, ilang mga microaerophilic, at walang mahigpit na anaerobes. Nauunawaan ang huli, dahil ang mahigpit na anaerobes ay hindi mabubuhay sa pagkakaroon ng oxygen, samakatuwid kakulangan sila ng sistema ng cytochrome oxidase.

Alituntunin sa pagsubok

Sa pagsusulit na ito ay gumagamit ng mga sangkap na kumikilos bilang mga tumatanggap ng artipisyal na elektron, na naghahalili ng mga likas na nasa loob ng chain ng transportasyon ng elektron.

Pangunahin, ang mga tinahi tulad ng paraphenylenediamine at indophenol ay ginagamit, na kumikilos bilang mga substrate ng receptor at mga artipisyal na donor.

Ang Paraphenylenediamine ay na-oxidized ng sistema ng cytochrome oxidase c. Ang pangulay sa pinababang anyo nito ay walang kulay, ngunit sa form na na-oxidized na ito ay may kulay.

Ito ay kung paano napatunayan ang pagkakaroon ng cytochrome oxidase c system; dahil ang isang positibong reaksyon ay bubuo ng isang lavender o asul-lila na kulay depende sa reagent na ginamit.

Sa kabilang banda, kung ang huling elektron na tumatanggap ng sangkap sa chain ng paghinga ay naiiba sa oxygen, ang pagsubok sa oxidase ay magiging negatibo (walang paggawa ng kulay); ito ang kaso sa anaerobic microorganism.

Gayundin, kung ang cytochrome na ginagamit ng microorganism ay naiiba sa cytochrome oxidase c, magbibigay din ito ng negatibong pagsubok.

Proseso

Mayroong iba't ibang mga reagents at protocol para sa pagsubok ng oxidase, lahat para sa parehong layunin.

Mga Reagents

Ang Kovacs reagent, Gordon at McLeod reagent, Nadi reagent, Carpenter, Suhrland at Morrison reagent, at paggamit ng mga oxidase disc.

-Kovacs oxidase reagent

Binubuo ito ng 1% tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride.

Ang reagent ng Kovacs ay inihanda sa pamamagitan ng pag-dissolve ng 1 g ng nabanggit na sangkap sa 50 ml ng distilled water. Ito ay pinainit nang malinis hanggang sa ganap na matunaw. Lumipat sa isang bote ng amber ng sapat na kapasidad at bumubuo ng lakas ng tunog hanggang 100 ml na may distilled water. Maghintay ng hindi bababa sa 15 minuto bago gamitin. Mag-imbak sa isang refrigerator na protektado mula sa ilaw.

Ito ay may label na Kovacs oxidase reagent, upang maiba ito mula sa mga Kovac na reagent na ginamit upang ibunyag ang indole test. Ang reagent na ito ay ang pinaka sensitibo, mas nakakalason ngunit mas mahal kaysa sa natitirang reagents.

Ang isang positibong reaksyon ay napatunayan sa reagent na ito kasama ang pagbabago ng kulay ng kolonya sa lavender, na mabilis na lumiliko na halos itim. Ang isang negatibong reaksyon ay maliwanag dahil walang pagbabago ng kulay sa kolonya o tumatagal sa isang bahagyang kulay rosas. Ang daluyan ay maaari ring dumilim, ngunit hindi iyon nangangahulugang isang positibong reaksyon.

Sa reagent na ito, ang oras ng reaksyon ay mahalaga, isang pagbabago ng kulay na nangyayari sa pagitan ng 5 hanggang 15 segundo ay itinuturing na isang positibong reaksyon.

-Gordon at McLeod reagent

Ito ay binubuo ng dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride, na kilala rin bilang N-dimethyl-p-phenylenediamine o p-aminodimethylaniline monohydrochloride. Inihanda ito tulad ng inilarawan para sa Kovacs oxidase reagent, paghahalili para sa sangkap na kasangkot.

Ang reagent na ito ay bahagyang mas matatag kaysa sa Kovacs oxidase reagent, kahit na ang lahat ng mga reagents na naglalaman ng p-phenylenediamine ay hindi matatag.

Ang reaksyon na ito ay kalaunan, ito ay binibigyang kahulugan bilang positibo sa hitsura ng isang asul-lila na kulay sa loob ng 10 hanggang 30 minuto.

-Nadi reagent

Binubuo ito ng 1% α-naphthol sa ethyl alkohol (95% ethanol) at 1% aminodimethylaniline. Ang halo ay inihanda sa pantay na mga bahagi at paggamit ng ganap na ethyl alkohol bilang isang diluent, hanggang sa paggawa ng isang sapat na dami para sa 100 ml.

-Carpenter, Suhrland at Morrison reagent

Binubuo ito ng 1% p-aminodimethylalanine oxalate. Maghanda sa parehong paraan tulad ng inilarawan para sa Kovacs oxidase reagent, pagbabago para sa kaukulang sangkap.

Gamit ang handa na solusyon, ang mga pagsubok ng pagsubok ay inihanda tulad ng sumusunod: 6-8 cm Whatman No. 1 filter paper strips ay pinapagbinhi ng 1% dimethyl-p-phenylenediamine oxalate reagent.

Pinapayagan silang matuyo nang walang pakikipag-ugnay sa metal, mag-imbak sa mga garapon na naka-tornilyo na may desiccant at mag-imbak sa ref. Ang mga guhit na ito ay matatag hanggang sa 6 na buwan.

Ito ang pinaka matatag na reagent ng lahat ng nabanggit, at maaaring tumagal ng hanggang 6 na buwan sa solusyon. Ang isa pang plus point ay hindi ito kulay ng medium sa paligid ng kolonya, kung ginagamit ito nang direkta sa plato.

Ang hitsura ng isang pulang kulay ay binibigyang kahulugan bilang isang positibong pagsubok.

-Oxidase disc

Ang mga ito ay mga komersyal na disc na pinapagbinhi ng reagent para sa oxidase test. Mayroong maraming mga komersyal na tatak sa merkado.

Ang paggamit nito ay lubos na praktikal, dahil hindi kinakailangan upang maghanda ng mga sariwang reagents, na nagpapadali sa gawain. Ang mga resulta na nakuha ay maaasahan hangga't ang mga disc ay maayos na mapangalagaan.

Mga protocol

Ang pamamaraan ng direktang plato, hindi tuwirang pamamaraan sa papel at paggamit ng mga disc na pinapagbinhi ng mga reaktor na oxidase.

-Direct paraan ng board

2 o 3 patak ng alinman sa nabanggit na reagents ay idinagdag para sa hangaring ito nang direkta sa kolonya (s) na nilalaman sa isang plate ng medium medium na hindi naglalaman ng glucose.

Ang pagbabago o hindi ng kulay ng mga kolonya ay binibigyang kahulugan, hindi ng daluyan. Ang wastong oras ng reaksyon ay nakasalalay sa reagent na ginamit.

-Ang direktang paraan sa papel

Gupitin ang isang piraso ng filter na papel (Whatman No. 1) sa isang sukat na 6 cm ² at ilagay ito sa loob ng isang walang laman na ulam na Petri.

Magdagdag ng 2 o 3 patak ng Kovacs oxidase na reagent sa papel, kumuha ng bahagi ng kolonya upang mapag-aralan gamit ang isang platinum na hawakan o kahoy na toothpick at ikalat ito sa isang tuwid na linya sa reagent na pinapagbinhi na papel. I-interpret sa loob ng 5 hanggang 10 segundo.

Sa pamamagitan ng mga guhit na inihanda sa Carpenter, Suhrland at Morrison reagent, isang kolonya ang kumakalat sa dry strip. Ang isang solong guhit ay ginagamit upang masubukan ang maraming mga pag-ikot. I-interpret sa 10 segundo.

-Disks (m

Malumanay na magbasa-basa sa mga komersyal na disc na may sterile na distilled water at superimpose sa kolonya na pag-aralan. Inirerekomenda na gamitin ang mga plato sa 35 ° C, kung ang mga plate sa temperatura ng silid o ang mga nagpapalamig na plato ay ginamit ang reaksyon ay medyo mabagal. I-interpret ang pagbabago ng kulay sa pagitan ng 10 hanggang 20 seg.

Maaaring magamit ang mga kolonya na nilalaman sa dugo o tsokolate agar.

-Disks (hindi tuwirang pamamaraan)

Dampen ang disc tulad ng inilarawan dati. Ilagay ito sa isang walang laman na ulam na Petri. Kumuha ng isang sapat na halaga ng kolonya upang pag-aralan gamit ang isang platinum handle o kahoy na toothpick at ilagay sa disk. I-interpret ang pagbabago ng kulay sa pagitan ng 10 hanggang 20 seg.

Gumamit

Ang genus na Neisseria at Acinetobacter ay paminsan-minsan ay magkatulad na morphologically dahil kahit na ang genus Acinetobacter ay isang Gram-negatibong baras, kung minsan ay makakakuha ito ng isang form ng coccoid at ibinahagi nang pares, na ginagaya ang genus Neisseria.

Sa pagkakataong ito ang oxidase test ay talagang kapaki-pakinabang. Ang genus Neisseria ay positibo at negatibo ang Acinetobacter.

Gayunpaman, ang genus Moraxella ay halos kapareho sa genus na Neisseria at parehong nagbibigay ng positibong reaksyon; Ito ang dahilan kung bakit ang mga pagsusuri sa karbohidrat na pagsusuri ay dapat palaging palaging isinasagawa para sa tiyak na pagkilala.

Sa kabilang banda, ang pagsubok sa oxidase ay kapaki-pakinabang upang maibahin ang isang bakterya na kabilang sa pamilya ng Enterobacteriaceae (lahat ng oxidase negatibo) mula sa iba pang mga fermenter, tulad ng genus Pasteurella, Aeromonas, Plesiomonas (oxidase positibo).

Ang genus Vibrio at Helicobacter ay positibo rin sa oxidase.

QA

Gumamit ng kilalang mga pilay ng Escherichia coli bilang isang negatibong kontrol at mga strain ng Pseudomonas aeruginosa bilang isang positibong kontrol.

Mga Limitasyon

-Ang mga reagents ay dapat magamit na sariwang inihanda, ang kanilang istante sa solusyon sa solusyon sa temperatura ng silid ay maikli dahil sila ay hindi matatag. Palamigin maaari silang magtagal sa pagitan ng 5 araw hanggang 2 linggo.

-Ang mga reagents ay walang kulay, kung nagbabago ang kulay dapat nilang itapon. Ang mga nasira na disc ay lumitaw dahil dumidilim sila sa paglipas ng panahon.

-Ang positibong reaksyon sa reaksyon ng Kovacs oxidase sa pagitan ng 15-60 seg ay itinuturing na isang pagkaantala na reaksyon at pagkatapos ng 60 segundo dapat itong isaalang-alang na negatibo.

-Haemophylus influenzae ay nagbibigay ng negatibong reaksyon ng oxidase kung ginagamit ang anumang reagent na may dimethyl-p-phenylenediamine, ngunit positibo kung ang Kovacs oxidase reagent (tetramethyl-p-phenylenediamine) ay ginagamit.

-Mediums na naglalaman ng glucose ay nakagambala sa pagsubok, na nagbibigay ng maling negatibo.

-Bordetella pertussis strains ay maaaring magbigay ng isang maling positibong reaksyon kung nanggaling sila mula sa highly concentrated blood plate plate.

-Ang paggamit ng mga metal (iron) humahawak ay nagbibigay ng maling positibong reaksyon.

mga rekomendasyon

-Kapag ang mga reagents ay napaka hindi matatag at may posibilidad na mag-oxidize sa sarili, inirerekomenda na i-freeze ang mga aliquots ng 1 hanggang 2 ml at alisin kung kinakailangan.

-Ang ibang paraan upang maantala ang auto-oksihenasyon ng reagent ay upang magdagdag ng 0.1% ascorbic acid kapag naghahanda ng mga reagents.

-Ang mga reagents ay hindi matatag, inirerekomenda ang isang lingguhang kontrol sa kalidad.

-Reagents na hindi pumasa sa kalidad ng control test ay hindi dapat gamitin.

Mga Sanggunian

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiological Diagnosis. Ika-5 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis ng Bailey at Scott Microbiological. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Argentina.
3. "Pagsubok sa Oxidase." Wikipedia, Ang Malayang Encyclopedia. Jan 15 2018, 10:32 UTC. 3 Apr 2019, 14:03
4. World Health Organization. Manu-manong Laboratory para sa Pagkilala at Pagsubok ng Antimicrobial na Pag-agaw ng Bacterial Pathogens ng Public Health Kahalagahan sa Pag-unlad ng Mundo 2004. Magagamit sa: who.int/drugresistance/infosharing
5. Reagent strips para sa diagnosis ng aktibidad ng oxidase sa bakterya. Rev Cubana Med Trop. 2000; 52 (2): 150-151.